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3M大腸菌群快速檢驗測試片操作以及判讀 |
| 一、測試大腸菌群 操作方法 |
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 1. 未開封時，冷藏于≤8℃（≤46℉），并在保存期內用完，高溫度時，凝固水可以排除，包裝物最好于室溫啟開。 |
 2. 已開封的，將封口以膠帶封緊。 |
 3. 已啟開的包裝袋不要冷藏并于一個月內使用完。 |
 4. 制備食物樣品稀釋液，稱取或吸取食物樣品，置入適宜的無菌容器內，如均質袋、稀釋瓶、WhirlPak bag或者其他滅菌容器內. |
 5. 加入適量的無菌稀釋液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4調PH7.2) 、0.1%的旦白膠水(ISO方法6887) 、緩沖旦白膠水(ISO方法6579) 、鹽溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸餾水. 但不可用含有枸櫞酸鹽、bisulfite or thiosulfate的緩沖液. 因為它能抑止菌生長。 |
 6、攪拌或均質樣品.
樣品的稀釋液調PH6.6-7.2對酸性樣用IN NaOH、堿性樣用INHCI調PH。
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 7、將測試片置于平坦表面處，揭開上層膜。 |
 8、使用吸管將1ml樣液垂直滴加在測試片的中央處。 |
 9、細心將上層膜緩慢蓋下，避免有氣光泡產生，切勿使上層膜直接落下。 |
 10、使用壓板（平面底朝下）放置在上層膜中央處。 |
 11、輕輕的壓下，使樣液均勻覆蓋于圓形的培養(yǎng)面積上，切勿扭轉壓板。 |
 12、拿起壓板，靜置至少1分鐘以使培養(yǎng)基凝固。 |
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 14、可目視及用標準菌落計數器或其它的照明放大鏡計數，并可參考判讀卡計算菌落數。
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 15、可以分離菌落作進一步鑒定，即掀起上層膜，由培養(yǎng)膠上挑取單個菌落。 |
 13、測試片的透明面朝上，可堆疊至20片。培養(yǎng)時間和溫度因方法而有不同，最通用的認可方法是：
總大腸菌群
● AOAC官方方法986.33和989.10（乳/生乳和其它乳制品）
大腸菌群：32℃±1℃培養(yǎng)24±2h
● AOAC官方方法991.14（食品類）
大腸菌群：35℃±1℃培養(yǎng)24±2h
● NMKL方法（147.1993）
大腸菌群：37℃±1℃培養(yǎng)24±2h
● AFNOR認可方法3M 01/2-09/89A和B（除水生貝殼類動物外的所有食品）
大腸菌群：30℃±1℃培養(yǎng)24±2h
耐熱的（糞）大腸菌群
● AFNOR認可方法，3M 01/2-09/89C（所有食品） 44℃±1℃培養(yǎng)24±2h。當提高培養(yǎng)溫度時，培養(yǎng)箱應有一定的濕度是需要的。 |
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| 二、測試大腸菌群 判讀方法 |
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Petrifilm ColiformTM Coliform測試片含有VRB培養(yǎng)劑 (Violet Red Bile)，一種冷水可溶性的凝膠劑和四唑翁(tetrazollium)指示劑，可增強菌落計數效果。表面覆蓋的膠膜，可留住發(fā)酵乳糖的大腸菌群產生的氣體。
AOAC和FDA細菌學分析手冊（RAM）規(guī)定大腸菌群為革蘭氏陰性桿菌，發(fā)酵乳糖產酸產氣。大腸菌群菌落在Petrifilm CC測試片上生長產酸，PH指示劑使培養(yǎng)基顏色變深，在紅色菌落周圍有氣泡者，為大腸菌群細菌。
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 大腸菌群簽定,在不同國家可以有變更
(見培養(yǎng)時間和溫度部分提示).
AOAC確認的方法:
Total coliform= 69 (有氣泡的菌落) |
 No growth=0
注意圖2到圖5培養(yǎng)基顏色的變化,隨著coliform 菌數增多,培養(yǎng)基顏色變深,背景的泡(沫)
為培養(yǎng)基現象,不是大腸菌群生長結果. |
 Total coliform count=79
Petrifilm cc 測試片菌落數適宜記數范圍是15-150,不要計算圓型培基外的菌落,因為泡棉上已不含選擇性培養(yǎng)基.見圓圈1 |
 Estimated total coliform count=220
測試片面積約為20cm2,當菌落數超過150個,為了估計菌落數可選擇其中一個或數個有代表性菌落的小方格(1cm2)計算平均菌落數,在乘以20方向得到整個測試片上的菌落數.
菌落太多時需進一步稀釋樣品,方能獲得準確計數. |
 TNTC(菌數太多無法計數)
Petrifilmcc測試片菌落無法計數時至少有下列現象之一.(1)很多小菌落(2)有許多氣泡(3)培養(yǎng)的顏色深暗. |
 Acrual coun=4
當有大量的非大腸菌群細菌如假單胞菌屬細菌存在時,Petrifilmcc測試片培養(yǎng)基顏色呈黃色. |
 Total coliform count=2
食物顆粒為不規(guī)規(guī)則形狀,且不帶氣泡. |
 Total coliform count=8
氣泡可有不同形狀,氣泡可使菌落撐散,使菌落輪廓似氣泡,見圓圈1和2,人為的氣泡可能是不當的操作所至,或是來自樣品捏的氣體,他們成不規(guī)則形狀,且不與菌落相連接.見圓圈3. |
 例如,1-10示為不同類型氣泡與菌落的連接情況,所有菌落應計數. |
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發(fā)布日期：2006-05-15
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