一、用途
艱難梭狀芽孢桿菌乳膠凝集檢測(cè)試劑用于確證鑒定從假膜性結(jié)腸炎、與抗生素有關(guān)的腹瀉和手術(shù)后腹瀉病人的糞便樣品中分離出的艱難梭狀芽孢桿菌可疑菌落。該試劑盒僅供專業(yè)人員使用。
二、原理
乳膠顆粒表面包被與艱難梭狀芽孢桿菌細(xì)胞壁抗原具有特異性的兔免疫球蛋白抗體。當(dāng)敏化的乳膠顆粒與艱難梭狀芽孢桿菌菌懸液混合后,敏感而特異的免疫化學(xué)反應(yīng)可使乳膠顆粒迅速形成肉眼可見的凝集。
三、試劑盒組成成分
REAG TEST 測(cè)試試劑 M
乳膠顆粒包被與艱難梭狀芽孢桿菌抗原具有特異性的兔免疫球蛋白。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(藍(lán)色瓶蓋)
CONTROL + 陽性對(duì)照試劑 M41b 陽性對(duì)照 0.5mL
不具活性的艱難梭狀芽孢桿菌抗原,用于與測(cè)試試劑反應(yīng)。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(黑色瓶蓋)
NaCl 0.85% 0.85%鹽水 M40 0.85%生理鹽水 5.0mL
含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(白色瓶蓋)
使用說明書
檢測(cè)板
攪拌棒
需要的其它材料
l 接種環(huán)
l 梭狀芽孢桿菌的選擇性分離平板(CCFA或CCEY)
四、警告和注意事項(xiàng)
安全:
1、試劑僅供體外診斷使用。
2、試劑盒作防腐劑使用的疊氮化鈉可與鉛或銅制品反應(yīng)形成易爆的金屬疊氮化物。可用大量水沖洗以避免疊氮化物的堆積。
3、在處理或檢測(cè)可疑致病菌時(shí)應(yīng)采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施。被污染的物品可用3%的次氯酸鈉消毒處理30分鐘。含酸的廢液應(yīng)作中和處理。
4、陽性對(duì)照液在生產(chǎn)中已作惰性處理,但仍應(yīng)遵循潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序。
檢測(cè)過程:
1、試劑盒應(yīng)按說明書使用。
2、所有試劑在使用前應(yīng)達(dá)到室溫。
3、不要稀釋試劑盒內(nèi)的任何試劑
4、不要混合不同批次試劑盒的試劑。
5、不要冷凍試劑盒內(nèi)的試劑。
6、不要使檢測(cè)乳膠試劑的滴管接觸到陽性對(duì)照試劑或細(xì)菌樣品。
7、使用前應(yīng)確保檢測(cè)板清潔干燥。
8、如果陽性對(duì)照不發(fā)生凝集或乳膠試劑在生理鹽水中自凝,說明試劑已無效。應(yīng)使用新的試劑盒。
五、貯存及保質(zhì)期
檢測(cè)試劑盒不使用時(shí)應(yīng)貯存在2~8℃,并應(yīng)在包裝盒標(biāo)簽上的有效期內(nèi)使用檢測(cè)試劑。
六、樣本
糞便樣品應(yīng)接種于增菌肉湯中在37℃培養(yǎng)18~24小時(shí)后,然后在選擇性平板(CCFA或CCEY)上培養(yǎng)增菌液。平板應(yīng)在厭氧環(huán)境中37℃培養(yǎng)24~48小時(shí)。
挑取選擇性分離平板上的艱難梭狀芽孢桿菌可疑菌落,用該試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。(程序如下)
七、檢測(cè)過程
質(zhì)量控制:
在每次使用檢測(cè)試劑盒前應(yīng)作下列質(zhì)量控制檢測(cè),以確證試劑的有效性。
1、檢測(cè)試劑的控制:滴加1滴生理鹽水(M40)于一個(gè)測(cè)試反應(yīng)環(huán)內(nèi),然后在同一反應(yīng)環(huán)內(nèi)滴1滴測(cè)試試劑(M
2、陽性對(duì)照的控制:輕輕搖勻陽性對(duì)照試劑(M
測(cè)試程序:
1、滴1滴生理鹽水(M40)于潔凈的檢測(cè)板上的一個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)。
2、用接種環(huán)從選擇性分離平板上挑取可疑菌落,與反應(yīng)環(huán)內(nèi)的生理鹽水混合,形成均勻的菌懸液。
3、觀察菌懸液是否會(huì)出現(xiàn)自動(dòng)凝集現(xiàn)象。如果出現(xiàn)自凝現(xiàn)象,即不可用乳膠試劑檢測(cè)該菌株。應(yīng)選用其它的檢測(cè)方法。如果沒有出現(xiàn)凝集,進(jìn)行下一步測(cè)試。
4、輕輕搖勻乳膠測(cè)試試劑后,滴1滴至反應(yīng)環(huán)內(nèi)的菌懸液中,不要使檢測(cè)乳膠試劑的滴管接觸到菌懸液。
5、用1支干凈的攪拌棒混合菌懸液和測(cè)試試劑約30秒,然后輕搖檢測(cè)板。
6、在2分鐘內(nèi)觀察凝集結(jié)果。
7、記錄結(jié)果后,將攪拌棒和檢測(cè)板進(jìn)行適當(dāng)?shù)南咎幚怼?/span>
八、結(jié)果說明
在2分鐘內(nèi)出現(xiàn)凝集,表明樣品中有艱難梭狀芽孢桿菌,如不出現(xiàn)凝集,表明測(cè)試菌落中無艱難梭狀芽孢桿菌。
九、使用的局限性
1、結(jié)果應(yīng)依據(jù)所有的臨床和實(shí)驗(yàn)室信息進(jìn)行判斷。分離出艱難梭狀芽孢桿菌不能確診假膜性結(jié)腸炎或抗生素性腹瀉。
2、使用乳膠試劑檢測(cè)艱難梭狀芽孢桿菌時(shí)應(yīng)選取選擇性平板上可疑菌落,以提高分離率。
3、其它的梭狀芽孢桿菌偶爾也可在CCFA平板上生長,但它們?cè)?/span>CCEY平板上的菌落形態(tài)與艱難梭狀芽孢桿菌不同,或不生長。
4、分離出的可疑艱難梭狀芽孢桿菌發(fā)生自凝現(xiàn)象時(shí),不可采用乳膠試劑檢測(cè),應(yīng)選用其它方法檢測(cè)。
十、檢測(cè)效果對(duì)比
在一個(gè)獨(dú)立的英國微生物實(shí)驗(yàn)室和和公司內(nèi)部均分別對(duì)Microscreen 艱難梭狀芽孢桿菌乳膠試劑盒與一種已廣泛使用的商業(yè)化的乳膠試劑盒做了測(cè)試效果對(duì)比。用二種商品共檢測(cè)137株在選擇性平板上生長的菌落。
|
Microscreen |
總計(jì) |
||
陽性 |
陰性 |
|||
另一已廣泛使用的乳膠試劑盒 |
陽性 |
85* |
0 |
85 |
陰性 |
0 |
52** |
52 |
|
總計(jì) |
85 |
52 |
|
靈敏度 185/85=100%
特異性 52/52=100%
一致性 137/137=100%
*檢測(cè)樣品中分離出的85株,其中18株在二種試劑盒中均存在交叉反應(yīng),但其中的16株不會(huì)在艱難梭狀芽孢桿菌的選擇性平板中生長或其生長時(shí)菌落形態(tài)與艱難梭狀芽孢桿菌不同。另外2株(均為C.glycolicum)在其平板上可弱生長,但菌落不具有大多數(shù)艱難梭狀芽孢桿菌所特有的熒光。
**其中有2株艱難梭狀芽孢桿菌(血清型A9、A10)。其中1株(A10)顯示出輕微異常的菌落形態(tài),其余的50株包括不同種的細(xì)菌,其中5株為梭狀芽孢桿菌屬。大部分單個(gè)菌落不會(huì)在艱難梭狀芽孢桿菌的選擇性平板上生長 或生長時(shí)顯示出非典型的可疑菌落。
測(cè)試結(jié)果顯示Microscreen乳膠凝集檢測(cè)試劑盒與這種已廣泛使用的商業(yè)化的乳膠試劑盒檢測(cè)效果相當(dāng)。盡管少量菌株在2種試劑盒中均存在假陽性結(jié)果,但在艱難梭狀芽孢桿菌的選擇性平板上,不會(huì)生長或菌落形態(tài)不同。
總的來說,用Microscreen艱難梭菌乳膠凝集檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果與所對(duì)比的另一商業(yè)化產(chǎn)品結(jié)果一致。
十一、重復(fù)性
批內(nèi)重復(fù)性:通過以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對(duì)照抗原及一組質(zhì)控菌株對(duì)同1批產(chǎn)品的靈敏度和特異性進(jìn)行檢測(cè)。由不同的操作者隨機(jī)測(cè)試3次,3個(gè)操作者間分析結(jié)果無顯著差異。
批間的重復(fù)性:通過以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對(duì)照抗原及一組質(zhì)控菌株對(duì)3批產(chǎn)品的靈敏度和特異性進(jìn)行檢測(cè)。3個(gè)批次間的敏感性和特異性無差異。廣東環(huán)凱微生物科技有限公司 電話:020-32077703