（一）按照反應(yīng)裝置的結(jié)構(gòu)，自動(dòng)生化分析儀主要分為流動(dòng)式(Flow system)、分立式(Discrete system)兩大類(lèi)。

 

1．流動(dòng)式 指測(cè)定項(xiàng)目相同的各待測(cè)樣品與試劑混合后的化學(xué)反應(yīng)在同一管道流動(dòng)的過(guò)程中完成。這是第一代自動(dòng)生化分析儀。

 

2．分立式 指各待測(cè)樣品與試劑混合后的化學(xué)反應(yīng)都是在各自的反應(yīng)杯中完成。其中有幾類(lèi)分支。

 

(1)典型分立式自動(dòng)生化分析儀。此型儀器應(yīng)用最廣。

 

(2)離心式自動(dòng)生化分析儀，每個(gè)待測(cè)樣品都是在離心力的作用下，在各自的反應(yīng)槽內(nèi)與試劑混合，完成化學(xué)反應(yīng)并測(cè)定。由于混合，反應(yīng)和檢測(cè)幾乎同時(shí)完成，它的分析效率較高。

 

3．袋式自動(dòng)生化分析儀是以試劑袋來(lái)代替反應(yīng)杯和比色杯，每個(gè)待測(cè)樣品在各自的試劑袋內(nèi)反應(yīng)并測(cè)定。

 

4．固相試劑自定生化分析儀(亦稱(chēng)干化學(xué)式自動(dòng)分析儀) 是將試劑固相于膠片或?yàn)V紙片等載體上，每個(gè)待測(cè)樣品滴加在相應(yīng)試紙條上進(jìn)行反應(yīng)及測(cè)定。操作快捷、便于攜帶是它的優(yōu)點(diǎn)。

 

(二)典型分立式自動(dòng)生化分析儀基本結(jié)構(gòu)

 

1．樣品(Sample)系統(tǒng)

 

樣品包括校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣品。系統(tǒng)一般由樣品裝載、輸送和分配等裝置組成。

 

樣品裝載和輸送裝置常見(jiàn)的類(lèi)型有：

 

(1)樣品盤(pán)(Sample disk)，即放置樣品的轉(zhuǎn)盤(pán)有單圈或內(nèi)外多圈，單獨(dú)安置或與試劑轉(zhuǎn)盤(pán)或反應(yīng)轉(zhuǎn)盤(pán)相套合，運(yùn)行中與樣品分配臂配合轉(zhuǎn)動(dòng)。有的采用更換式樣品盤(pán)，分工作和待命區(qū)，其中放置多個(gè)弧形樣品架(Sector)作轉(zhuǎn)載臺(tái)，儀器在測(cè)定中自動(dòng)放置更換，均對(duì)樣品盤(pán)上放置的樣品杯或試管的高度、直徑和深度有一定要求，有的需專(zhuān)用樣品杯，有的可直接用采血試管。樣品盤(pán)的裝載數(shù)，以及校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、常規(guī)樣品和急診樣品的裝載數(shù)，一般都是固定的。這些應(yīng)根據(jù)工作需要選擇。

 

(2)傳動(dòng)帶式或軌道式進(jìn)樣 即試管架(Rack)不連續(xù)，常為10個(gè)一架，靠步進(jìn)馬達(dá)驅(qū)動(dòng)傳送帶，將試管架依次前移，再單架逐管橫移至固定位置，由樣品分配臂采樣。

 

(3)鏈?zhǔn)竭M(jìn)樣試管固定排列在循環(huán)的傳動(dòng)鏈條上，水平移動(dòng)到采樣位置，有的儀器隨后可清洗試管。

 

分配加樣裝置大都由注射器、步進(jìn)馬達(dá)或傳動(dòng)泵、加樣臂和樣品探針等組成，①注射器(syrine unit)。根據(jù)注射器直徑和活塞移動(dòng)距離的多少，定量吸取樣品或試劑。它的精度決定加樣的精度，一般可精確到1微升。注射器漏液時(shí)，首先考慮是否探針堵塞，其次是注射器活塞磨損等。有的加液系統(tǒng)采用容積型注射泵和數(shù)控脈沖步進(jìn)馬達(dá)，提高精度。②樣品探引(Probe)與加樣臂相聯(lián)，直接吸取樣品。探針均設(shè)有液面感應(yīng)器，防止探針損傷和減少攜帶污染。有的設(shè)有阻塞檢測(cè)報(bào)警系統(tǒng)當(dāng)探針樣品中的血凝塊等物質(zhì)阻塞時(shí)．儀器會(huì)自動(dòng)報(bào)警沖洗探針，并跳過(guò)當(dāng)前樣品，對(duì)下一樣品加樣。有的還有智能化防撞裝置遇到阻礙探針立即停止運(yùn)動(dòng)并報(bào)警。即使如此，它仍是非正規(guī)操作時(shí)的易損件。為了保護(hù)探針，除預(yù)先需要根據(jù)樣品容器的高低、最低液面高度等進(jìn)行設(shè)置外、，樣品容器的規(guī)格、放置以及液面高度等設(shè)定條件不得隨意改變。在某些儀器上，采樣器和加液器組合在一起，加樣品和加試劑或稀釋液一個(gè)探針一次完成。③加樣臂。連接探引，在樣品杯(試劑瓶)和反應(yīng)杯之間運(yùn)動(dòng)，完成采樣和加樣(加試劑)。它的運(yùn)動(dòng)方式，與儀器工作效率及工作壽命有一定關(guān)系。④閥門(mén)用以決定液體流動(dòng)方向。⑤稀釋系統(tǒng)。對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)稀釋、過(guò)后稀釋或加倍，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)原液系列稀釋等。不同儀器的稀釋方式有所差異，要注意識(shí)別。試劑系統(tǒng)亦有稀釋功能：

 

2.試劑(Reagent)系統(tǒng)一般由試劑儲(chǔ)放和分配加液裝置組成。

 

(1)試劑倉(cāng)常與試劑轉(zhuǎn)盤(pán)結(jié)合在起。多數(shù)儀器將試劑倉(cāng)設(shè)為冷藏室，以提高在線試劑的穩(wěn)定期。

 

(2)分配加液裝置(Dispense unit)。與樣品系統(tǒng)的類(lèi)似。，試劑探針常�？梢詫�(duì)試劑預(yù)加溫，雙試劑系統(tǒng)的試劑2(R2)探針起始量宜較下，以便配合不同R1/R2比例的試劑。

 

(3)試劑瓶(Bottle)。有不同的形狀及大小規(guī)格。如 COBAS MIRA PLUS儀有4、10、15、35ml等規(guī)格，瓶底呈凹形，OLYMPUS Au600儀有30和60ml兩種；日立7060儀有20、50、100ml三種等規(guī)格。應(yīng)根據(jù)工作量和試劑規(guī)格．考慮試劑瓶殘留死體積和更換頻率，合理選用。獨(dú)特設(shè)計(jì)的卡式試劑盒，體積小，防蒸發(fā)，方便儲(chǔ)存。

 

(4)配套試劑常有條形碼，儀器設(shè)有條形碼檢查系統(tǒng)，可對(duì)試劑的種類(lèi)、批號(hào)、存量、有效期和校準(zhǔn)曲線等貨剌，進(jìn)行核對(duì)校驗(yàn)，如BeckmanCX7等。

 

(5)試劑瓶蓋自動(dòng)開(kāi)關(guān)系統(tǒng)，更有利于試劑保存。有的儀器可在運(yùn)行中添加，更換試劑，有的則須在暫停狀態(tài)進(jìn)行。

 

3.條形碼(Barcode)識(shí)讀系統(tǒng)

 

一般由掃描系統(tǒng)、信號(hào)整形和譯碼器三部分組成。掃描系統(tǒng)以光源掃射黑條白空相間的條碼符號(hào)由于條和空對(duì)光的反射不同、不同寬窄的條符反射光持續(xù)時(shí)間不同，產(chǎn)生強(qiáng)度不同的反射光．再經(jīng)光電轉(zhuǎn)換元件接收并轉(zhuǎn)換成相應(yīng)強(qiáng)度的電信號(hào)，最后通過(guò)信號(hào)整形，由譯碼器解譯。系統(tǒng)自動(dòng)識(shí)別樣品架及樣品編號(hào)識(shí)別試劑、校準(zhǔn)品及其批號(hào)、失效期，有的并可識(shí)別校驗(yàn)校準(zhǔn)曲線等信息。

 

實(shí)驗(yàn)室常用條形碼類(lèi)型有CODE 39、CODE 128、2 of 5 Standard、Interleaved2of 5等。要自編樣品條形碼需要條形碼輸入器，條形碼閱讀系統(tǒng)與條形碼要匹配。已有全自動(dòng)試管分配暨條形碼粘貼準(zhǔn)備系統(tǒng)。

 

4．反應(yīng)系統(tǒng)

 

(1)反應(yīng)盤(pán)裝載一系列反應(yīng)比色杯（Cuvettes）,多為轉(zhuǎn)盤(pán)形式。反應(yīng)測(cè)定過(guò)程中按固定程序，在加樣臂、加液臂、攪拌棒、光路和清洗裝置之間轉(zhuǎn)動(dòng)。有的儀器在反應(yīng)杯中完成反應(yīng)后再吸入比色杯比色，現(xiàn)在更常見(jiàn)反應(yīng)和檢測(cè)同在比色杯中進(jìn)行，效率更高，尤其適于連續(xù)監(jiān)測(cè)法。比色杯多采用硬質(zhì)石英玻璃、硬質(zhì)玻璃、無(wú)紫外光吸收的丙烯酸塑料等，使用壽命不一。Dimension系列的比色杯在機(jī)器內(nèi)自動(dòng)制造，自動(dòng)封口，免沖洗，無(wú)污染。流動(dòng)池式主要在小型分析儀用。容積一般幾十微升，但抽液管道占用較多反應(yīng)液，多樣品連續(xù)使用，增加交叉污染機(jī)會(huì)。

 

蠕動(dòng)泵(Pump)。半自動(dòng)生化儀需要蠕動(dòng)泵抽吸反應(yīng)液進(jìn)人流動(dòng)比色池作測(cè)定。要求定期對(duì)蠕動(dòng)泵校準(zhǔn)，即通過(guò)吸人定量的水來(lái)檢驗(yàn)泵的吸液量是否準(zhǔn)確。一般均設(shè)有泵校準(zhǔn)功能。

 

(2)混合裝置(Mixing unit) 如采用多頭回旋攪拌棒(二頭雙清洗式攪拌系統(tǒng))。攪拌棒常具特氟隆不粘涂層，避免液體粘附。

 

(3)溫控裝置生化分析儀通過(guò)恒溫控制裝置來(lái)保持孵育溫度的調(diào)控和恒定也是由計(jì)算機(jī)來(lái)控制的，理想的孵育溫度波動(dòng)應(yīng)小于±01℃。保持恒溫的方式有三種。①空氣浴恒溫：即在比色杯與加熱器之間隔有空氣。空氣浴恒溫的特點(diǎn)是方便、速度快、不需要特殊材料，但穩(wěn)定性和均勻性較水浴稍差。羅氏(Roche)的cobas和0lympus Au2700系統(tǒng)采用的就是空氣浴恒溫模式。②水浴循環(huán)式：即在比色杯周?chē)�充盈有水，加熱器控制水的溫度。水浴恒熱的特點(diǎn)是溫度恒定，但需特殊的防腐劑以保證水質(zhì)的潔凈，且要定期更換循環(huán)水。日立系統(tǒng)生化分析儀采用的即是水浴循環(huán)恒溫裝置。⑧恒溫液循環(huán)間接加熱式：結(jié)構(gòu)原理是在比色杯周?chē)�流�?dòng)著一種特殊的恒溫液(具無(wú)味、無(wú)污染、惰性、不蒸發(fā)等特點(diǎn))。比色杯和恒溫液之間有極小的空氣狹縫，恒溫液通過(guò)加熱狹縫的空氣達(dá)到恒溫，其溫度穩(wěn)定性優(yōu)于干式，和水浴式循環(huán)式相比不需要特殊保養(yǎng)。

 

5．清洗(Wash)系統(tǒng)

 

探針和攪拌棒采用激流式等方式自動(dòng)沖洗。清洗裝置一般由吸液針、吐液針和擦拭刷組成。清洗工作流程為吸出反應(yīng)一吸于一注入純水一吸干一擦干。清洗液有堿性和酸眭兩種。一般說(shuō)來(lái)，在吸出反應(yīng)液后，儀器先用堿性液沖洗，再用酸性液沖洗，最后用去離子水沖洗三遍。擦拭刷的功能是吸去杯壁上掛淋的水，刷體內(nèi)部有負(fù)吸裝置。使用進(jìn)程中要注意擦拭刷是否磨損。

 

值得注意的是，對(duì)于常規(guī)沖洗還不能清除交叉污染(carry—over)的實(shí)驗(yàn)要特別處理，以減少交叉污染或攜帶污染。例如，膽固醇測(cè)定試劑中的膽酸鹽對(duì)血清總膽汁酸的測(cè)定有干擾，在消除交叉污染的程序中，可輸入程序，指令總膽汁酸不在測(cè)試膽固醇的比色杯中進(jìn)行測(cè)定，如不能避開(kāi)，儀器則對(duì)比色杯進(jìn)行特別沖洗，防止發(fā)生交叉污染。

 

沖洗水的水溫自動(dòng)控制到與恒溫反應(yīng)槽溫度相近，保證反應(yīng)系統(tǒng)的恒溫，并增加去污力。急診測(cè)定后采用針對(duì)性清洗，似乎比采用固定的全面清洗程序更有效率更經(jīng)濟(jì)。耗水量?jī)x器間相差較大。

 

ABBOTT AEROSET 自動(dòng)生化分析儀等系統(tǒng)具有自動(dòng)清洗功能(smart wash)和最佳標(biāo)本順序選擇功能(OSS)。即儀器根據(jù)試劑或樣品間交叉污染的項(xiàng)目組合，自動(dòng)改變檢測(cè)順序，避免互有影響的分析項(xiàng)目；確實(shí)無(wú)法回避時(shí)，則采用選定的特殊清洗劑作自動(dòng)清洗。

 

6．比色系統(tǒng)

 

(1)光源多數(shù)采有鹵素?zé)�，工作波長(zhǎng)為325～800nm。鹵素?zé)舻氖褂脡勖�較短，一般只有1 000～l 500小時(shí)。當(dāng)燈的發(fā)光強(qiáng)度不夠時(shí)，儀器會(huì)自動(dòng)報(bào)警，應(yīng)及時(shí)更換，部分生化分析儀采用的是長(zhǎng)壽命的氙燈，24小時(shí)待機(jī)可工作數(shù)年，工作波長(zhǎng)285-750nm。

 

(2)比色杯 自動(dòng)生化分析儀的比色杯也是反應(yīng)杯。比色杯的光徑0.5～0.7 cm不等，通常為石英或優(yōu)質(zhì)塑料。光徑小的省試劑，當(dāng)比色杯光徑小于1 cm時(shí)，部分儀器可自動(dòng)校正為1cm。生化分析儀的比色杯自動(dòng)沖洗裝置在儀器完成比色分析后做自動(dòng)反復(fù)沖洗、吸干的動(dòng)作，比色杯在自動(dòng)檢查合格后繼續(xù)循環(huán)使用。要及時(shí)更換不合格的比色杯。如采用的是石英比色杯，比色杯要定期檢查清洗。

 

(3)單色器與檢測(cè)器各類(lèi)自動(dòng)生化分析儀應(yīng)用的是可見(jiàn)一紫外吸收光譜法，即監(jiān)測(cè)200-700nm光區(qū)某特定波長(zhǎng)下發(fā)色基團(tuán)吸光度的變化，輔以微機(jī)軟件系統(tǒng)的計(jì)算來(lái)完成測(cè)定。可見(jiàn)一紫外吸光譜定量的基礎(chǔ)是Lamber—Beer定律。

 

傳統(tǒng)的分光度測(cè)定普遍采用前分光，即在光源燈和樣品杯之間先要用濾光片、棱鏡或光柵分光，通過(guò)可調(diào)的狹縫，取得與樣品“互補(bǔ)”的單色光之后，照射到樣品杯，再用光電池或光電管作為檢測(cè)器，測(cè)定樣品對(duì)單色光的吸收量(吸光度)。

 

而現(xiàn)代大多生化分析儀采用后分光測(cè)量技術(shù)。后分光測(cè)定：將一束白光(混合光)先照到樣品杯，然后再用光柵分光，同時(shí)用一列發(fā)光二極管排在光柵后面作為檢測(cè)器。后分光的優(yōu)點(diǎn)是不需移動(dòng)儀器比色系統(tǒng)中的任何部件，可同時(shí)選用雙波長(zhǎng)或多波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定，這樣可降低比色的噪聲，提高分析的精確度和減少故障率。

 

生化儀的單色器即分光裝置，有干涉濾光片和光柵分光兩類(lèi)。干涉濾光片有插入式和可旋轉(zhuǎn)的圓盤(pán)式兩種。插入式就是將需用的濾光片插入濾片槽中，圓盤(pán)式是將儀器配備的濾光片都安裝在圓盤(pán)中，使用時(shí)旋轉(zhuǎn)至所需濾光片處即可。干涉濾光片價(jià)格便宜，但易變潮霉變，從而影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，半自動(dòng)生化分析儀多采用此種濾光片。

 

光柵分光可分為全息反射式光柵和蝕刻式凹面光柵兩種。前者是在玻璃上覆蓋一層金屬膜后制成，有一定程度的相差易被腐蝕；后者是將所選波長(zhǎng)固定地刻制在凹面玻璃上，耐磨損、抗腐蝕、無(wú)相差。全自動(dòng)生化分析儀多采用光柵分光。

 

7．程序控制系統(tǒng)

 

計(jì)算機(jī)是自動(dòng)生化分析儀的大腦，標(biāo)本、試劑的注加和識(shí)別，條碼的識(shí)別，恒溫控制，沖洗控制，結(jié)果打印，質(zhì)控的監(jiān)控，儀器各種故障的報(bào)警等都是由計(jì)算機(jī)控制完成。儀器一代勝過(guò)一代，自動(dòng)化程度越來(lái)越高，有的儀器甚至可以完成部分日常保養(yǎng)程序。自動(dòng)生化分析儀數(shù)據(jù)處理功能日趨完善，如：反應(yīng)進(jìn)程中吸光度，各種測(cè)定方法，各種校準(zhǔn)方法室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果的統(tǒng)計(jì)等，生化儀都可進(jìn)行處理。計(jì)算機(jī)還可以調(diào)看病人的數(shù)據(jù)、儀器的性能指標(biāo)、儀器的運(yùn)行狀態(tài)等。自動(dòng)生化儀中的質(zhì)控和病人結(jié)果還可通過(guò)儀器計(jì)算機(jī)與實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)(LIS)的對(duì)接進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)管理。

 

程序控制器是系統(tǒng)的硬件部分。它主要包括：

 

(1)微處理器和主機(jī)電腦。用于儀器各個(gè)單元和總體控制，應(yīng)具有程控操作、故障診斷、多種數(shù)據(jù)處理和儲(chǔ)存等強(qiáng)大功能。一般根據(jù)儀器功能的需要和電腦硬件市場(chǎng)的主流產(chǎn)品來(lái)配置。

 

(2)顯示器(CRT monitor unit)。通常用鍵盤(pán)、鼠標(biāo)、觸摸屏等方式進(jìn)行操作。

 

(3)系統(tǒng)及配套軟件。多采用Windows-NT或windows界面，具全圖形化設(shè)計(jì)，多菜單選擇，信息導(dǎo)引，故障報(bào)警，幫助提示，人機(jī)“對(duì)話”，方便直觀，不少儀器有即時(shí)反應(yīng)曲線顯示。

 

(4)通過(guò)Rs 232 c等數(shù)據(jù)接口與其他計(jì)算機(jī)、打印機(jī)等設(shè)備傳輸數(shù)據(jù)。具人工智能雙向通訊系統(tǒng)(Host query)，儀器可直接自行向主電腦詢問(wèn)病人／樣品基本資料及檢測(cè)項(xiàng)目。有的具遠(yuǎn)程通訊及監(jiān)控功能，可遙控遠(yuǎn)處測(cè)試及維修檢查，實(shí)現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)工作。

 

自動(dòng)生化分析儀均采用程序控制的自動(dòng)分析。分析程序一經(jīng)確定，工作時(shí)只要簡(jiǎn)單地輸入測(cè)定項(xiàng)目或編碼，儀器即可按編制程序自動(dòng)完成測(cè)定、計(jì)算和報(bào)告。具體的控制程序因儀器而異，一般分為固定程序和自編程序兩種。固定程序?yàn)閮x器廠家預(yù)先設(shè)定，常與指定試劑配套；有的不能更改，有的也可由用戶修改。它與配套試劑一同使用時(shí)，既方便工作，質(zhì)量也比較可靠，但成本較高。自編程序靈活實(shí)用，便于開(kāi)發(fā)新項(xiàng)目，強(qiáng)調(diào)程序的靈活性。比如，成批測(cè)定過(guò)程中應(yīng)可隨時(shí)插入急診標(biāo)本測(cè)定而不打亂原有程序；單個(gè)急診標(biāo)本測(cè)定操作簡(jiǎn)捷、消耗少，可靈活預(yù)稀釋或重復(fù)測(cè)定。

 

二、儀器一般工作流程

 

生化分析儀的正確應(yīng)用，只是掌握了測(cè)定技術(shù)原理還不夠，還需要對(duì)具體儀器的工作流程及測(cè)定計(jì)算方法有足夠的了解。

 

(一)一般工作流程

 

工作流程可以通過(guò)儀器的測(cè)定周期來(lái)考察。重點(diǎn)關(guān)注比色杯空白讀數(shù)點(diǎn)(CB)、加樣品點(diǎn)（S）、各試劑加液點(diǎn)(R1、R2、……)、試劑空白讀數(shù)點(diǎn)(RB)、各測(cè)定讀數(shù)點(diǎn)(P)、各點(diǎn)時(shí)間間隔及周期總時(shí)間等。每個(gè)儀器一般都在反應(yīng)轉(zhuǎn)盤(pán)的固定位置和反應(yīng)測(cè)定周期的固定時(shí)間設(shè)置樣品試劑和稀釋的加液位，以及測(cè)定讀數(shù)點(diǎn)。如HITACHI 7170在P1到P34周期為10分鐘時(shí)，PO前加樣品，Rl在Pl前，R2在P5和P6間，R3在P16和P17間，R4在：P33和P34間。

 

(二)數(shù)據(jù)處理計(jì)算方法

 

儀器在各個(gè)吸光度讀數(shù)點(diǎn)讀取的吸光度數(shù)據(jù)，并不一定都納人濃度計(jì)算。儀器往往根據(jù)儀器定義和操作者設(shè)定的要求，對(duì)吸光度原始數(shù)據(jù)作計(jì)算處理，轉(zhuǎn)換成所謂反應(yīng)數(shù)據(jù)，再按系數(shù)或公式作濃度計(jì)算。舉例如下：

 

1．HITACH 7170的終點(diǎn)法測(cè)定點(diǎn)(A )吸光度計(jì)算為(AX+AX－1)／2。實(shí)際吸光度=吸光度數(shù)據(jù)×10 000。

 

2．0LYHPUS AU 600試劑空白數(shù)據(jù)：P0點(diǎn)試劑空白(RB)=P0點(diǎn)吸光度一比色杯水空白(wB)；任一測(cè)定點(diǎn)試劑空白(RB )。該點(diǎn)吸光度一比色杯水空白(WB)。

 

3．Monarch 1 000兩點(diǎn)終點(diǎn)法的反應(yīng)數(shù)據(jù)。(終點(diǎn)測(cè)定吸光度一終點(diǎn)空白吸光度)一(始點(diǎn)測(cè)定吸光度一始點(diǎn)空白吸光度)。

 

4．AU 600的終點(diǎn)法(帶試劑空白，END法)的反應(yīng)數(shù)據(jù)=終點(diǎn)吸光度一P0點(diǎn)吸光度(試劑空白，RB)。終點(diǎn)法(不帶試劑空白，END)．法)的反應(yīng)數(shù)據(jù)=終點(diǎn)吸光度-比色杯水空白(WB)。

 

5．Au 600的兩點(diǎn)法(自身空白)的反應(yīng)數(shù)據(jù)=[加第二試劑后測(cè)定點(diǎn)讀數(shù)一P0點(diǎn)讀數(shù)]一[加第二試劑前測(cè)定點(diǎn)讀數(shù)一PO點(diǎn)讀數(shù)]。

 

三、主要操作程序

 

(一)儀器運(yùn)行前操作程序

 

主要進(jìn)行儀器的基本設(shè)置：

 

l．試驗(yàn)項(xiàng)目設(shè)置對(duì)試驗(yàn)名稱(chēng)、編碼，試驗(yàn)組合(Profile)、試驗(yàn)輪次(Round)，必要時(shí)包括試驗(yàn)順序等設(shè)置。

 

2．各試驗(yàn)的參數(shù)設(shè)置包括試驗(yàn)間比值、結(jié)果核對(duì)等參數(shù)的設(shè)定。

 

3．劑設(shè)置根據(jù)有關(guān)試驗(yàn)參數(shù)，設(shè)置各試驗(yàn)的試劑位、試劑瓶規(guī)格，必要時(shí)設(shè)定試劑批號(hào)、失效期等。

 

4．校準(zhǔn)品設(shè)置對(duì)校準(zhǔn)品的位置、濃度和數(shù)量等進(jìn)行設(shè)置。

 

5．質(zhì)控設(shè)置 根據(jù)質(zhì)控要求。設(shè)置質(zhì)控物個(gè)數(shù)，質(zhì)控規(guī)則，質(zhì)控項(xiàng)目及相應(yīng)質(zhì)控參數(shù)等。

 

6．樣品管設(shè)置 包括樣品管類(lèi)型，殘留液高度（死體積），識(shí)別方式等設(shè)置。

 

7．其他設(shè)置對(duì)數(shù)據(jù)傳輸方式、結(jié)果報(bào)告格式、復(fù)查方式及復(fù)查標(biāo)準(zhǔn)等設(shè)置。

 

(二)常規(guī)操作程序

 

開(kāi)機(jī)(預(yù)熱、保養(yǎng))-設(shè)置開(kāi)始條件(日期時(shí)間索引、輪次、樣品起始號(hào)等)-根據(jù)需要，申請(qǐng)校準(zhǔn)、質(zhì)控和病人測(cè)定項(xiàng)目(包括架號(hào)、杯號(hào)或順序號(hào)。測(cè)定中可繼續(xù)申請(qǐng))_裝載校準(zhǔn)品、質(zhì)控物和病人標(biāo)本-裝載試劑-核對(duì)儀器起始狀態(tài)（未應(yīng)用條碼系統(tǒng)，采用順序識(shí)別樣品時(shí)，尤其要核對(duì)測(cè)定起始編號(hào)是否與樣品架號(hào)和申請(qǐng)?zhí)栂喾��?定標(biāo)和質(zhì)控測(cè)定-檢查定標(biāo)和質(zhì)控結(jié)果-病人標(biāo)本測(cè)定-測(cè)定過(guò)程監(jiān)控（試劑檢查，觀察分析結(jié)果，編輯校正）-數(shù)據(jù)傳遞（打印報(bào)告，向檢驗(yàn)管理系統(tǒng)傳輸，包括工作量統(tǒng)計(jì)、財(cái)務(wù)統(tǒng)計(jì)、病人情況追蹤、質(zhì)控分析等)。測(cè)定后保養(yǎng)。

 

(三)測(cè)定結(jié)果檢查分析

 

1．要了解和熟悉儀器的各種警示符號(hào)的含義與作用在正確設(shè)定參數(shù)的前提下，利用各種警示符能提高我們發(fā)現(xiàn)問(wèn)題和解決問(wèn)題的效率。

 

2．要熟悉和靈活運(yùn)用儀器的相關(guān)操作屏(界面) 如：用反應(yīng)過(guò)程監(jiān)測(cè)(Reaction Monitor)，觀察反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線；用校準(zhǔn)追蹤(Calibration Trace)回顧分析校準(zhǔn)曲線；利用統(tǒng)計(jì)(Statistics)了解不同日期段病人測(cè)定均值及數(shù)據(jù)分析；運(yùn)用分析數(shù)據(jù)編輯(Data Edit)察看和校正測(cè)定數(shù)據(jù)。

 

3．校準(zhǔn)的檢查要充分利用儀器設(shè)置的功能，監(jiān)測(cè)校準(zhǔn)曲線圖形、各校準(zhǔn)點(diǎn)吸光度值(不能忽略試劑空白值及空白速率值)、計(jì)算K值等的波動(dòng)情況，以及與以往的比較。必要時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步檢查反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線。必須結(jié)合質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)來(lái)把握實(shí)驗(yàn)條件。

 

4．病人結(jié)果的檢查除了目測(cè)觀察或用血清指數(shù)了解標(biāo)本性狀，注意和了解臨床資料及診斷外，學(xué)會(huì)分析反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線及數(shù)據(jù)是重要的基本功。

 

四、基本測(cè)定方法

 

(一)終點(diǎn)法(End point method)

 

根據(jù)反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特征及其吸光度大小，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量分析的方法。對(duì)一般化學(xué)反應(yīng)來(lái)說(shuō)，反應(yīng)完全(或正、逆反應(yīng)動(dòng)態(tài)平衡)、反應(yīng)產(chǎn)物穩(wěn)定時(shí)為反應(yīng)終點(diǎn)。對(duì)抗原一抗體反應(yīng)來(lái)說(shuō)，是抗原和抗體完全反應(yīng)、形成最大且穩(wěn)定的免疫復(fù)合物時(shí)為終點(diǎn)。在反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線上為與x軸平行線區(qū)段。在測(cè)定計(jì)算方式上，一般分為一點(diǎn)法和兩點(diǎn)法兩種。

 

1．一點(diǎn)法(One Point) 以試劑和樣品混合之前的空氣空白(GB)、水空白(WB)或試劑空白(RB)的吸光度值為測(cè)定計(jì)算基點(diǎn)，以反應(yīng)終點(diǎn)的吸光度讀數(shù)減去空白讀數(shù)，得到反應(yīng)吸光度。通過(guò)與相同條件下校準(zhǔn)液反應(yīng)吸光度的比較，求得測(cè)定結(jié)果。常與一點(diǎn)校準(zhǔn)法配合使用，即采用一個(gè)校準(zhǔn)濃度，校準(zhǔn)曲線通過(guò)零點(diǎn)且成線性。也應(yīng)用多點(diǎn)校準(zhǔn)。

 

2．兩點(diǎn)終點(diǎn)法(Two Point End)即終點(diǎn)一始點(diǎn)法 以試劑和樣品混合之后的某一時(shí)間點(diǎn)作為始點(diǎn)，以反應(yīng)終點(diǎn)的吸光度讀數(shù)減去始點(diǎn)讀數(shù)。一定條件下可降低樣品對(duì)反應(yīng)或反應(yīng)本身的特異性于擾(主要指色度干擾)。常采用雙試劑，多以加R2前某一點(diǎn)作測(cè)定始點(diǎn)；某些情況下，也可以加R2后一點(diǎn)作測(cè)定始點(diǎn)。若使用單試劑，主反應(yīng)啟動(dòng)太快或儀器起始讀數(shù)點(diǎn)受限時(shí)難以運(yùn)用。

 

固定時(shí)間法(Fixed Method)與兩點(diǎn)終點(diǎn)法的區(qū)別只是在：測(cè)定讀數(shù)的末點(diǎn)不在反應(yīng)平衡區(qū)段，而是根據(jù)方法學(xué)選擇。如血清肌酐(苦味酸法)測(cè)定。

 

3．三點(diǎn)終點(diǎn)法 即雙終點(diǎn)法，在一個(gè)通道內(nèi)一次進(jìn)行兩項(xiàng)反應(yīng)相關(guān)的終點(diǎn)法測(cè)定。比如同測(cè)游離脂肪酸和甘油三酯。某些儀器(如HITACHI系列)設(shè)置此方法。

 

(二)連續(xù)監(jiān)測(cè)法(Continuous monitoring method)

 

又稱(chēng)速率法(Rate Assay)。即連續(xù)監(jiān)測(cè)反應(yīng)過(guò)程，根據(jù)所測(cè)定的產(chǎn)物生成或底物消耗的速度進(jìn)行定量分析的方法。在反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線上為反應(yīng)呈恒速區(qū)段(斜率保持不變)，常用于酶活性線性反應(yīng)期測(cè)定。

 

1．連續(xù)監(jiān)測(cè)法即零級(jí)反應(yīng)速率法，亦稱(chēng)斜率法。在較長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間區(qū)段內(nèi)(至少90-120秒)，每隔一定時(shí)間(常為2~30秒)讀取一次吸光度值，至少讀取4點(diǎn)，得到3個(gè)△A；一般將連續(xù)多次讀數(shù)作最小二乘法處理，讀數(shù)間隔時(shí)間太短的作帶速率時(shí)間(TR)多點(diǎn)法處理，均取線性反應(yīng)部分的讀數(shù)，求出單位時(shí)間內(nèi)的反應(yīng)速率△A/min。此法必須以零級(jí)反應(yīng)為測(cè)定計(jì)算的基礎(chǔ)，因?yàn)橹挥性诹慵?jí)反應(yīng)下，單位時(shí)間內(nèi)的吸光度變化(反應(yīng)速率△A/min)才與酶活力呈正比。此法相對(duì)減少了分析誤差，大大提高了分析速度和準(zhǔn)確性。但是，半自動(dòng)生化分析儀采用單樣品連續(xù)監(jiān)測(cè)，相當(dāng)耗時(shí)。應(yīng)用連續(xù)監(jiān)測(cè)法，首先應(yīng)準(zhǔn)備線性范圍內(nèi)的高、中、低濃度的樣品，分別作反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線，了解不同濃度下反應(yīng)全過(guò)程，兼顧確定延遲時(shí)間和線性監(jiān)測(cè)期。

 

2．兩點(diǎn)速率法即所謂擬一級(jí)速率法。在反應(yīng)中選取兩時(shí)問(wèn)點(diǎn)t 1、t 2，讀取吸光度A 1、A2，計(jì)算(A2-A1)，(t2-t1)=△A，△t。此方法與終點(diǎn)兩點(diǎn)法的區(qū)別主要有兩點(diǎn)：后一讀數(shù)點(diǎn)反應(yīng)未達(dá)終點(diǎn)，以速率計(jì)算結(jié)果。它與連續(xù)監(jiān)測(cè)法比較，缺點(diǎn)在于人為確定t 1、t 2，不定因素較多，不能保證反應(yīng)在t 1-t 2期間呈線性，影響結(jié)果準(zhǔn)確性；應(yīng)在常規(guī)測(cè)定前，先做預(yù)試驗(yàn)來(lái)確定線性時(shí)間段。若在選擇的時(shí)間段內(nèi)反應(yīng)不成線性(如零級(jí)反應(yīng)期短，儀器無(wú)法設(shè)置或測(cè)定)，則只能改用終點(diǎn)法。優(yōu)點(diǎn)在于方法簡(jiǎn)單；酶活力較低、測(cè)定吸光度值較小時(shí)，可增加測(cè)定時(shí)間段而不受儀器連續(xù)監(jiān)測(cè)時(shí)間點(diǎn)的局限，減少讀數(shù)誤差。

 

3．速率B法在一個(gè)通道內(nèi)一次進(jìn)行兩項(xiàng)反應(yīng)相關(guān)的速率法測(cè)定。它既可以是兩項(xiàng)試驗(yàn)測(cè)定，也可用于干擾或／及樣品空白自動(dòng)補(bǔ)償0后一用途的原理是：利用儀器的微機(jī)自動(dòng)處理，在第一反應(yīng)(干擾反應(yīng))一直維持線性的前提下，可以從第二反應(yīng)(主反應(yīng))速率中扣除第一反應(yīng)速率的延續(xù)影響。如用于消除膽紅素轉(zhuǎn)化為膽綠素吸光度下降、對(duì)肌酐苦味酸法測(cè)定的負(fù)干擾等。某些儀器(如HITACHI系列)設(shè)置此方法。

 

(三)空白(blank)校正

 

在分光光度法中，常利用空白溶液來(lái)調(diào)節(jié)儀器的吸光度零點(diǎn)，或用來(lái)抵消某些測(cè)定的干擾因素。在生化分析儀測(cè)定中，除了采用雙或多波長(zhǎng)、兩點(diǎn)法等排除背景干擾外，常要運(yùn)用專(zhuān)門(mén)空白測(cè)定，以便從樣品測(cè)定吸光度中扣除其影響。正確選擇空白校正，對(duì)提高準(zhǔn)確度起重要作用。

 

1．試劑空白一般在方法類(lèi)型和校準(zhǔn)模式中，即分為有或無(wú)試劑空白兩大類(lèi)。試劑空白單獨(dú)測(cè)定或與校準(zhǔn)配合測(cè)定，并需預(yù)選裝載去離子水樣品杯或試劑空白架。校準(zhǔn)或病人樣品的各測(cè)定點(diǎn)吸光度，均要扣除相應(yīng)測(cè)定點(diǎn)的試劑空白吸光度或空白速率值。無(wú)試劑空白的方法，多直接以反應(yīng)杯的水空白作為測(cè)定基準(zhǔn)值。

 

在不少儀器中，試劑空白測(cè)定類(lèi)似校準(zhǔn)測(cè)定，并非在病人樣品測(cè)定時(shí)實(shí)時(shí)測(cè)定。所以，要注意它的測(cè)定頻率，避免因試劑批號(hào)或質(zhì)量的變化造成試劑空白的改變引起的計(jì)算誤差。

 

2.樣品空白 主要為了消除樣品本身混濁或色度的干擾。常采用空白通道法，測(cè)定校正結(jié)果=顯色反應(yīng)通道結(jié)果-空白通道結(jié)果。多數(shù)儀器須另外占用測(cè)定通道，分析速度減半，但去干擾的準(zhǔn)確性應(yīng)高于兩點(diǎn)終點(diǎn)