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超詳細(xì)的高效液相色譜常見問題與解決方法匯總,先轉(zhuǎn)發(fā)收藏!

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2022-10-25
核心提示:  壓 力 異 常操作壓力的變化往往是故障的征兆。從下表中找出所觀察到的現(xiàn)象,并在右側(cè)的列表中參考相應(yīng)的解決方法。 A、
  壓 力 異 常

操作壓力的變化往往是故障的征兆。從下表中找出所觀察到的現(xiàn)象,并在右側(cè)的列表中參考相應(yīng)的解決方法。 

A、沒有壓力顯示,沒有流動(dòng)相流動(dòng)


原 因

解決方法

1、電源問題 

1、接通電源,開機(jī)

2、保險(xiǎn)絲被燒壞

2、更換保險(xiǎn)絲

3、控制器設(shè)定不正確或設(shè)定失敗

3、a、采取恰當(dāng)?shù)脑O(shè)定

   b、修理或更換控制器

4、柱塞桿折斷

4、更換柱塞桿

5、泵頭內(nèi)有空氣

5、溶劑脫氣、啟動(dòng)泵抽出空氣

6、流動(dòng)相不足

6、a、補(bǔ)充流動(dòng)相

   b、更換入口濾頭

7、單向閥損壞

7、更換單向閥

8、漏液

8、擰緊或更換手緊接頭


B、  流動(dòng)相流動(dòng)正常,但沒有壓力顯示


原 因

解決方法

1、儀表損壞

1、更換儀表

2、壓力傳感器損壞

2、更換壓力傳感器


C、 壓力持續(xù)偏高


原 因

解決方法

1、流速設(shè)定過高

1、調(diào)整流速設(shè)定

2、柱前篩板堵塞

2、a、在允許情況下反沖色譜柱

   b、更換篩板

   c、更換色譜柱

3、流動(dòng)相使用不當(dāng)或緩沖鹽的結(jié)晶沉淀

3、a、使用恰當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相

   b、沖洗色譜柱

4、色譜柱選擇不當(dāng)

4、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱

5、進(jìn)樣閥損壞

5、清洗或更換進(jìn)樣閥

6、柱溫過低

6、提高溫度

7、控制器失常

7、修理或更換控制器

8、保護(hù)柱阻塞

8、清洗或更換保護(hù)柱

9、在線過濾器阻塞

9、清洗或更換在線過濾器


D、壓力持續(xù)偏低


原 因

解決方法

1、流速設(shè)定過低

1、調(diào)整流速

2、系統(tǒng)漏液

2、確定漏液位置并維修

3、色譜柱選擇不當(dāng)

3、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱

4、柱溫過高

4、降低溫度

5、控制器失常

5、維修或更換控制器


E、壓力不斷上升


原 因

解決方法

1、見列表C

1、見列表C


F、壓力降為零


原 因

解決方法

1、見列表A、B

1、見列表A、B


G、壓力不斷下降,但不回零


原 因

解決方法

1、見列表D

1、見列表D


 H、壓力波動(dòng)


原 因

解決方法

1、泵中有氣體

1、a、溶劑脫氣

     b、從泵中除去氣體

2、單向閥損壞

2、更換單向閥

3、泵密封損壞

3、更換泵密封

4、脫氣不充分

4、a、溶劑脫氣

   b、改變脫氣方法(使用在線脫氣法等)

5、系統(tǒng)漏液

5、確定漏液位置并維修

6、使用梯度洗脫

6、由于流動(dòng)相粘度的變化引起的壓力波動(dòng)

漏  液

通?梢酝ㄟ^擰緊或更換管路接頭來解決漏液的問題。但值得注意的是過分?jǐn)Q緊會(huì)導(dǎo)致金屬接頭的漏液和塑料接頭的磨損。如果通過稍微擰緊接頭不能解決漏液的問題,就必須將接頭取下,檢查是否損壞(例如,卡套損壞、密封表面有雜質(zhì));損壞的接頭應(yīng)該更換掉。

A、接頭處漏液


原 因

解決方法

1、接頭松動(dòng)

1、擰緊

2、接頭磨損

2、更換

3、接頭過緊

3、a、擰松,再重新擰緊

   b、更換

4、接頭被污染

4、a、拆下清洗

   b、更換

5、部件不匹配

5、使用同一品牌的配件


B、 泵漏液


原 因

解決方法

1、單向閥松動(dòng)

1、a、擰緊單向閥(不必?cái)Q的過緊)

   b、更換單向閥

2、接頭松動(dòng)

2、擰緊接頭(不必?cái)Q的過緊)

3、混合器密封損壞

3、a、更換混合器密封

   b、更換混合器

4、泵密封損壞

4、維修或更換泵密封件

5、壓力傳感器損壞

5、維修或更換壓力傳感器

6、脈沖阻尼器損壞

6、更換脈沖阻尼器

7、比例閥損壞

7、a、檢查隔膜,如果漏液立即更換

   b、檢查手緊接頭,損壞的立即更換

8、放空閥的損壞

8、a、擰緊放空閥

   b、更換放空閥


C、  進(jìn)樣閥漏液


原 因

解決方法

1、轉(zhuǎn)子密封損壞

1、重新安裝或更換進(jìn)樣閥

2、定量環(huán)阻塞

2、更換定量環(huán)

3、進(jìn)樣口密封松動(dòng)

3、調(diào)整

4、進(jìn)樣針頭尺寸不合適

4、使用恰當(dāng)?shù)倪M(jìn)樣針

5、廢液管中產(chǎn)生虹吸

5、保持廢液管高于廢液液面

6、廢液管阻塞

6、更換或疏通廢液管


D、  色譜柱漏液


原 因

解決方法

1、尾端接頭松動(dòng)

1、擰緊接頭

2、卡套內(nèi)有填料

2、拆下、清洗卡套、重新安裝

3、篩板厚度不合適

3、使用合適的篩板(參考下表)

                         

 E、 篩板選擇指導(dǎo)


物質(zhì)粒徑

篩板孔徑

3-4u

0.5u

5-20u

2u


F、  檢測(cè)器漏液


原 因

解決方法

1、流通池墊片損壞

1、a、避免過大的背景壓力(壓力降)

   b、更換墊片

2、流通池窗破碎

2、更換窗口

3、手緊接頭漏液

3、擰緊或更換

4、廢液管阻塞

4、更換廢液管

5、流通池阻塞

5、重新安裝或更換

液相色譜系統(tǒng)的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變?cè)O(shè)備參數(shù)得到解決;而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對(duì)于色譜柱和流動(dòng)相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。
A、  峰拖尾


原 因

解決方法

1、篩板阻塞

1、a、反沖色譜柱

   b、更換進(jìn)口篩板

   c、更換色譜柱

2、色譜柱塌陷

2、填充色譜柱

3、干擾峰

3、a、使用更長(zhǎng)的色譜柱

   b、改變流動(dòng)相或更換色譜柱

4、流動(dòng)相PH選擇錯(cuò)誤

4、調(diào)整PH值。對(duì)于堿性化合物,低PH值更有利于得到對(duì)稱峰

5、樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生反應(yīng)

5、a、加入離子對(duì)試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑

  b、更改色譜柱


B、  峰前延


原 因

解決方法

1、柱溫低

1、升高柱溫

2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)

2、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑

3、樣品過載

3、降低樣品含量

4、色譜柱損壞

4、見A1、A2


C、   峰分叉


原 因

解決方法

1、 保護(hù)柱或分析柱污染


1、取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞,拆下來清洗。如果問題仍然存在,可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染,運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧。如果問題仍然存在,入口可能被阻塞,更換篩板或更換色譜柱。

 2、樣品溶劑不溶于流動(dòng)相

2、改變樣品溶劑。如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑。


D、  峰變形


原 因

解決方法

1、樣品過載

1、減少樣品載量


E、 早出的峰變形


原 因

解決方法

1、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)

1、a、減少進(jìn)樣體積

   b、運(yùn)用低極性樣品溶劑


F、  早出的峰拖尾程度大于晚出的峰


原 因

解決方法

1、柱外效應(yīng)

1、a、調(diào)整系統(tǒng)連接(使用更短、內(nèi)徑更小的管路)

   b、使用小體積的流通池


G、  K’增加時(shí),脫尾更嚴(yán)重


原 因

解決方法

1、二級(jí)保留效應(yīng),反相模式

1、a、加入三乙胺(或堿性樣品)

   b、加入乙酸(或酸性樣品)

   c、加入鹽或緩沖劑(或離子化樣品)

   d、更換一支柱子 

2、二級(jí)保留效應(yīng),正相模式

2、a、加入三乙胺(或堿性樣品)

   b、加入乙酸(或酸性樣品)

   c、加入水(或多官能團(tuán)化合物)

   d、試用另一種方法

3、二級(jí)保留效應(yīng),離子對(duì)

3、加入三乙胺(或堿性樣品)


H、 酸性或堿性化合物的峰拖尾


原 因

解決方法

1、緩沖不合適

1、a、使用濃度50-100mM的緩沖液

   b、使用Pka等于流動(dòng)相PH值的緩沖液


I、額外的峰


原 因

解決方法

1、樣品中有其他組份

1、正常

2、前一次進(jìn)樣的洗脫峰

2、a、增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率

   b、提高流速

3、空位或鬼峰

3、a、檢查流動(dòng)相是否純凈

   b、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑

   c、減少進(jìn)樣體積


J、   保留時(shí)間波動(dòng)


原 因

解決方法

1、溫控不當(dāng)

1、調(diào)好柱溫

2、流動(dòng)相組分變化

2、防止變化(蒸發(fā)、反應(yīng)等)

3、色譜柱沒有平衡

3、在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱


K、  保留時(shí)間不斷變化


原 因

解決方法

1、流速變化

1、重新設(shè)定流速

2、泵中有氣泡

2、從泵中除去氣泡

3、流動(dòng)相選擇不恰當(dāng)

3、a、更換合適的流動(dòng)相

   b、選擇合適的混合流動(dòng)相


L、  基線漂移


原 因

解決方法

1、柱溫波動(dòng)。(即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng)。通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器。)

1、控制好柱子和流動(dòng)相的溫度,在檢測(cè)器之前使用熱交換器。

2、流動(dòng)相不均勻。(流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。)

2、使用HPLC級(jí)的溶劑,高純度的鹽和添加劑。流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣,使用中使用氦氣。

3、流通池被污染或有氣體

3、用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用鹽酸)

4、檢測(cè)器出口阻塞。(高壓造成流通池窗口破裂,產(chǎn)生噪音基線)

4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測(cè)器手冊(cè)更換流通池窗。

5、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化

5、更改配比或流速。為避免這個(gè)問題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。

6、柱平衡慢,特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)

6、用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗,更改流動(dòng)相時(shí),在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。

7、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成

7、檢查流動(dòng)相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑。

8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。

8、使用保護(hù)柱,如有必要,在進(jìn)樣之間或在分析過程中,定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。

9、使用循環(huán)溶劑,但檢測(cè)器未調(diào)整。

9、重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測(cè)器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí),使用新的流動(dòng)相。

10、檢測(cè)器沒有設(shè)定在最大吸收波長(zhǎng)處。

10、將波長(zhǎng)調(diào)整至最大吸收波長(zhǎng)處。


M、 基線噪音(規(guī)則的)


原 因

解決方法

1、在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣

1、流動(dòng)相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。

2、漏液

2、見第三部分。檢查管路接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換泵密封。

3、流動(dòng)相混合不完全

3、用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑

4、溫度影響(柱溫過高,檢測(cè)器未加熱)

4、減少差異或加上熱交換器

5、在同一條線上有其他電子設(shè)備

5、斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正。

6、泵振動(dòng)

6、在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器


N、 基線噪音(不規(guī)則的)


原 因

解決方法

1、 漏液


1、見第三部分。檢查接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封。檢查流通池是否漏液。

2、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成

2、檢查流動(dòng)相的組成。

3、流動(dòng)相各溶劑不相溶

3、選擇互溶的流動(dòng)相

4、檢測(cè)器/記錄儀電子元件的問題

4、斷開檢測(cè)器和記錄儀的電源,檢查并更正。

5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡

5、用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng)

6、檢測(cè)器內(nèi)有氣泡

6、清洗檢測(cè)器,在檢測(cè)器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器

7、流通池污染(即使是極少的污染物也會(huì)產(chǎn)生噪音。)

7、用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池

8、檢測(cè)器燈能量不足

8、更換燈

9、色譜柱填料流失或阻塞

9、更換色譜柱

10、流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常

10、維修或更換混合器,在流動(dòng)相不走梯度時(shí),建議不使用泵的混合裝置


O、 寬峰


原 因

解決方法

1、流動(dòng)相組成變化

1、重新制備新的流動(dòng)相

2、流動(dòng)相流速太低

2、調(diào)節(jié)流速

3、漏液(特別是在柱子和檢測(cè)器之間)

3、見section 3。檢查接頭是否松動(dòng)、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。

4、檢測(cè)器設(shè)定不正確

4、調(diào)整設(shè)定

5、柱外效應(yīng)影響

a、柱子過載

b、檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過大

c、柱子與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)或管路內(nèi)徑太大

d、記錄儀響應(yīng)時(shí)間太長(zhǎng)

5、           

a、 小體積進(jìn)樣(例如:10ul而不是100ul)以1:10或1:100的比例稀釋樣品

b、減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池

c、 使用內(nèi)徑為0.007-0.01的短管路

d、減少響應(yīng)時(shí)間

6、緩沖液濃度太低

6、增加濃度

7、保護(hù)柱污染或失效

7、更換保護(hù)柱

8、色譜柱污染或失效,塔板數(shù)較低

8、更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰,則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。

9、柱入口塌陷

9、打開柱入口,填補(bǔ)塌陷或更換柱子

10、呈現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)未被完全分離的物質(zhì)的峰

10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果

11、柱溫過低

11、提高柱溫。除非特殊情況,溫度不宜超過75℃

12、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大

12、使用較小的時(shí)間常數(shù)


P、  分離度降低


原 因

解決方法

1、流動(dòng)相污染或變質(zhì)(引起保留時(shí)間變化)

1、重新配置流動(dòng)相

2、保護(hù)柱或分析柱阻塞

2、去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞,可進(jìn)行反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞,建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦颉H绻麊栴}仍然存在,進(jìn)口可能阻塞了,更換入口處的篩板或更換色譜柱。


Q、 所有的峰面積都太小


原 因

解決方法

1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過高

1、減少衰減的設(shè)定

2、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)設(shè)定太大

2、設(shè)定較小的時(shí)間常數(shù)

3、進(jìn)樣量太少

3、增大進(jìn)樣量

4、記錄儀連接不當(dāng)

4、使用正確的連接


R、 所有的峰面積都太大


原 因

解決方法

1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過低

1、采取較大的衰減

2、進(jìn)樣過多

2、減少進(jìn)樣量

3、記錄儀連接不正確

3、正確連接記錄儀


以下問題在使用進(jìn)樣閥過程中有可能發(fā)生。


A、 手動(dòng)進(jìn)樣閥,轉(zhuǎn)動(dòng)不靈


原 因

解決方法

1、轉(zhuǎn)子密封損壞

1、更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封

2、轉(zhuǎn)子太緊

2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度


B、   手動(dòng)進(jìn)樣閥,載樣困難


原 因

解決方法

1、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)

1、重新安裝

2、定量環(huán)阻塞

2、清洗或更換定量環(huán)

3、進(jìn)樣器污染

3、清洗或更換進(jìn)樣器

4、管路阻塞

4、清洗或更換管路


C、 自動(dòng)進(jìn)樣閥,不能轉(zhuǎn)動(dòng)


原 因

解決方法

1、無壓力(或電源)

1、提供恰當(dāng)?shù)膲毫Γ娫矗?/span>

2、轉(zhuǎn)子太緊

2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度

3、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)

3、重新安裝


D、 自動(dòng)進(jìn)樣閥,其它問題


原 因

解決方法

1、阻塞

1、清洗或更換阻塞部件

2、機(jī)械故障

2、見隨機(jī)維修手冊(cè)

3、控制器故障

3、維修或更換控制器

由氣味、景象和聲音可以發(fā)現(xiàn)的問題,你需要運(yùn)用你所有的感官去發(fā)現(xiàn)液相色譜的問題。你最好養(yǎng)成習(xí)慣,每天花上幾分鐘運(yùn)用你的感官(除了味覺)來“感覺”你的液相色譜是否存在問題,這樣可以幫助你迅速找到問題所在。例如:在你看到漏液之前,你可能首先聞到它的氣味。大部分的問題是可以通過眼睛看到。
A、  溶劑的氣味


原 因

解決方法

1、漏液

1、見section 2

2、濺出

2、a、檢查廢液瓶是否已滿

   b、找到濺出的部位并清洗干凈


B、 熱氣味


原 因

解決方法

1、儀器過熱

1、a、檢查并調(diào)節(jié)通風(fēng)設(shè)施

   b、檢查并調(diào)節(jié)溫度設(shè)定

   c、關(guān)掉儀器,查找維修手冊(cè)


C、  讀數(shù)不正常


原 因

解決方法

1、壓力不正常

1、見section 2

2、柱溫箱問題

2、

a、檢查并調(diào)節(jié)設(shè)定

b、參照用戶手冊(cè)

3、檢測(cè)器燈失效

3、更換燈


D、  燈警告


原 因

解決方法

1、壓力超出極限值

1、

a、檢查是否阻塞

b、檢查并調(diào)節(jié)極限值的設(shè)定

2、其它警示燈

2、見用戶手冊(cè)


E、   警告音


原 因

解決方法

1、溶劑泄漏/濺出

1、找到并解決

2、其它警告音

2、見用戶手冊(cè)


F、  刺耳的短音或長(zhǎng)音


原 因

解決方法

1、軸承失效

1、見用戶手冊(cè)

2、潤(rùn)滑不夠

2、進(jìn)行恰當(dāng)?shù)臐?rùn)滑

3、機(jī)械故障

3、見用戶手冊(cè)

常見故障及日常維護(hù)

下表中列出了液相色譜常見的一些問題,右側(cè)中則列出的日常維護(hù)的方法可以減少問題出現(xiàn)的頻率。括號(hào)中的數(shù)字是建議進(jìn)行維護(hù)的時(shí)間間隔。用戶手冊(cè)則提供您更多的維護(hù)方法。

 
溶劑瓶


問 題

維 護(hù)

1、進(jìn)口篩板阻塞

1、

a、更換(3-6個(gè)月)

b、過濾流動(dòng)相,0.5u濾膜

2、氣泡

2、流動(dòng)相脫氣


 


問 題

維 護(hù)

1、氣泡

1、流動(dòng)相脫氣

2、泵密封損壞

2、更換(3個(gè)月)

3、單向閥損壞

3、過濾流動(dòng)相,運(yùn)用在線過濾,準(zhǔn)備備用單向閥


進(jìn)樣閥


問 題

維 護(hù)

1、轉(zhuǎn)子密封損壞

1、

a、不要擰的過緊

b、過濾樣品


色譜柱

 

問 題

維 護(hù)

1、篩板阻塞

1、a、過濾流動(dòng)相

   b、過濾樣品

   c、運(yùn)用在線過濾或保護(hù)柱

2、柱頭塌陷

2、a、避免使用PH>8的流動(dòng)相(針對(duì)大部分硅膠的柱子)

   b、使用保護(hù)柱

   c、使用預(yù)柱(飽和色譜柱)

 

檢測(cè)器


問 題

維 護(hù)

1、燈失效,檢測(cè)器響應(yīng)降低,噪音增大

1、更換(6個(gè)月)或準(zhǔn)備備用燈

2、流通池有氣泡

2、a、保持流通池清潔

   b、池后使用反壓抑制器

   c、流動(dòng)相脫氣


 一般


問 題

維 護(hù)

1、腐蝕/摩擦損壞

1、在不使用時(shí)保持系統(tǒng)緩沖液的清潔



文章(文字)來源:培優(yōu)創(chuàng)新藥品研發(fā)與一致性評(píng)價(jià)。


編輯:songjiajie2010

 
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