酶制劑是將生物體內(nèi)產(chǎn)生的酶經(jīng)過加工的產(chǎn)品。目前,細菌、真菌等微生物是各種酶制劑的主要來源。隨著近代生物工程技術的不斷進展,利用微生物酶制劑來提高飼料利用率、消除抗營養(yǎng)因子、提高動物的消化能力等已引起飼料工業(yè)的高度重視。國外20世紀70年代開始了飼用酶制劑的研究與應用,我國于20世紀90年代逐步開始這方面的研究,目前我國酶制劑在飼料中的使用率僅占10%,而歐洲發(fā)達國家90%的飼料都使用酶制劑。酶制劑飼料添加劑不僅具有提高飼料利用率、促進動物生長、防治疾病等作用,而且可替代抗生素的添加,減少了動物體內(nèi)藥物殘留和產(chǎn)生耐藥性等副作用,是一種綠色環(huán)保型飼料添加劑,具有廣闊的發(fā)展前景。
1微生物酶制劑的生產(chǎn)方式
目前在飼料中添加的酶制劑,都是由微生物生產(chǎn)的。動植物也存在各種酶,但提取酶的成本極高,且生產(chǎn)受季節(jié)限制。而用微生物來生產(chǎn)酶制劑,其產(chǎn)量高、生產(chǎn)成本低,不受季節(jié)限制。利用微生物來生產(chǎn)飼用酶制劑有兩種方法,一種是固體發(fā)酵,另一種是液體發(fā)酵。用固體發(fā)酵的方式來生產(chǎn)酶制劑也叫表層發(fā)酵。與液體深層發(fā)酵相比,其生產(chǎn)規(guī)模小、生產(chǎn)成本低、不會產(chǎn)生環(huán)境污染,其發(fā)酵的酶活力高、酶系全。但缺點是:生產(chǎn)工人勞動強度大、產(chǎn)量不易擴大。液體發(fā)酵生產(chǎn)酶制劑主要的優(yōu)點是:操作勞動強度小、可自動化、可大規(guī)模生產(chǎn)。主要缺點是:生產(chǎn)投資規(guī)模大、生產(chǎn)成本高、產(chǎn)生廢水易污染環(huán)境。目前國內(nèi)生產(chǎn)的飼用酶制劑,采用固體發(fā)酵法占絕對優(yōu)勢,因為飼料中成分復雜,多種酶的效果比單酶效果好。固體發(fā)酵生產(chǎn)的酶,酶系復雜,酶不經(jīng)濃縮,將發(fā)酵產(chǎn)品烘干后,粉碎,然后測定其活力單位,再添加填充劑,以達到企業(yè)產(chǎn)品標準,包裝后成成品。這樣的復合酶比單一酶更受到使用單位的歡迎。液體發(fā)酵的產(chǎn)品一般是其中某一種酶的酶活極高,而其他酶的酶活極低。使用時與其他單一酶配合使用,但總的酶系還不能與固體發(fā)酵產(chǎn)生的酶的酶系相比。不論細菌還是真菌、放線菌,均能采用固體發(fā)酵的方法來生產(chǎn)酶制劑。
2微生物酶制劑種類
飼料原料中的抗營養(yǎng)因子及難于消化的成分較多,飼料中的抗營養(yǎng)因子是植酸鹽和非淀粉多糖,包括β-葡聚糖、阿拉伯木聚糖、纖維素、果膠,而消除這些抗營養(yǎng)因子的酶制劑就是:植酸酶、β-葡聚糖酶、木聚糖酶、果膠酶、α-半乳糖苷酶。而對于早期幼小畜禽來講主要是其內(nèi)源酶分泌不足。一般在常規(guī)日糧飼料中添加以淀粉酶、蛋白酶為主的復合酶,以促進營養(yǎng)物的消化吸收,消除營養(yǎng)不良和減少腹瀉的發(fā)生。
2.1飼用植酸酶的應用
植物性飼料中的磷大部分在植酸及植酸鹽中,單胃動物難以利用而隨糞便排出,污染環(huán)境,而且植酸鹽中的磷通過鰲合作用,降低動物了Zn、Mn、Ca、Cu、Fe、Mg等微量元素的利用,通過蛋白質(zhì)結(jié)合,形成復合體而降低對蛋白質(zhì)的消化吸收。植酸酶是一種降解植物性原料中的植酸及其鹽類中一種酯酶。產(chǎn)植酸的微生物種類很多,之中最主要的是真菌曲霉屬微生物,如Aspergillus、Ficuum、Aspergill niger.它們分泌的植酸酶能催化植酸向正磷酸鹽、肌醇和肌醇衍生物轉(zhuǎn)化,在豬、雞、日糧中添加植酸酶制劑可使植酸中的磷水解釋放出來,使其中的磷得以為動物利用,使植酸磷消化率提高60%~70%,這樣可以減少外加無機酸鹽,減少糞便磷的排放,減輕對環(huán)境污染,而且還可以提高被結(jié)合的蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)的利用,提高消化率。Simons等首次在豬飼料中添加微生物合成的植酸酶取得滿意效果,當1000單位/千克飼料的植酸酶可使磷的利用率達21%~57%.
Cromwell等在豬飼料中添加0毫克/千克、250毫克/千克、500毫克/千克、1000毫克/千克植酸酶,結(jié)果發(fā)現(xiàn),當添加500毫克/千克植酸酶時,平均日增重、飼料轉(zhuǎn)化率和磷利用率分別提高12%~16%、6%和23%~80%,當添加1000毫克/千克植酸酶時,平均日增重、飼料轉(zhuǎn)化率和磷利用率分別提高9%~23%、6%、33%~57%.在雞飼料的試驗表明,添加植酸酶50~1500單位/千克時,飼料轉(zhuǎn)化率提高,并有效改善鈣、磷的利用率,與添加無機磷的對照組相比,除生長性能相似或稍好外,磷的糞便排出減少一半。
大量研究表明,豬、禽日糧添加植酸酶可提高植酸磷的利用率,取代或減少無機磷酸鹽的添加,同時減輕因磷酸鹽含氟量高而中毒。同時使磷的排放量大幅度降低,蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)的消化率亦提高,對于因磷污染環(huán)境而制約家禽、家畜飼養(yǎng)業(yè)發(fā)展的國家,飼料中添加植酸酶具有特別重要的意義。
2.2蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和α-半乳糖苷酶
蛋白酶的作用是將組成蛋白的大分子多肽水解成寡肽或氨基酸,淀粉酶的作用是將大分子淀粉水解成寡糖、極限糊漿和葡萄糖。脂肪酶的作用是可將天然油脂分解,最終產(chǎn)物為單酸苷油脂、脂肪酸。α-半乳糖苷酶能將α-半乳糖苷低聚糖分解為單糖。
Corring等的研究表明,仔豬胃腸道的消化酶活性隨著年齡增長而增長,但斷奶對消化酶的活性增長趨勢有倒退的影響,在第4周至斷奶后1周內(nèi)各種消化酶活性降低到斷奶前水平的1/3.這是的腸道消化生理功能不適應高淀粉、高蛋白的飼料日糧,引起胃腸機能紊亂,易誘發(fā)腹瀉發(fā)生,同時脂肪酶活性低也是誘發(fā)腹瀉原因之一,如果在仔豬飼料日糧中加入外源性淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶來補充內(nèi)源性酶分泌不足,可以改善消化,減輕腹瀉。在以豆粕為主要蛋白源的日糧中添加α-半乳糖苷酶、蛋白酶可以有效改善營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。根據(jù)研究,添加枯草桿菌蛋白酶,可以分解大豆儲存蛋白質(zhì),還可以降解胰蛋白酶抑制因子、植物凝結(jié)素和抗原蛋白等。
2.3非淀粉多糖酶
在非常規(guī)植物性飼料中存在大量的非淀粉多糖。植物性原料的細胞壁都含有纖維素、果膠等物質(zhì),蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)都包裹在里面,大麥、小麥和黑麥都含有β-葡聚糖、木聚糖,米糠中含有大量的纖維素和木聚糖。
纖維素酶、果膠能破除植物細胞壁,使細胞內(nèi)容物充分釋放出來,為單胃動物腸道所吸收。β-葡聚糖酶、木聚糖酶和果膠酶能水解水溶性β-葡聚糖、木聚糖和果膠,能有效降低動物腸道中食糜黏度,有利于內(nèi)源消化液充分和食糜混合,充分消化,利于營養(yǎng)物的吸收提高飼料的利用率及能量,降低料重比。添加非淀粉多糖酶可在飼料日糧中加大非常規(guī)飼料的用量,非常規(guī)飼料資源豐富,價格低廉,這樣可以提高養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟效益。
Friesen etal在以大麥為基礎的日糧,加β-葡聚糖酶后,肉雞增重可提高46%,(加或不加酶的增重為100克/只、146克/只)表觀代謝能AEM提高33%(10.77兆焦/千克日糧∶14.3兆焦/千克日糧),脂肪消化率提高193%(17.4%∶15%).根據(jù)浙江農(nóng)科院畜牧所研究表明,以大麥為基礎的日糧加β-葡聚糖酶后,即使大麥價格高于玉米0.1元,也可和玉米基礎日糧達到同等效益。大量研究表明,以大麥為基礎日糧添加酶可以改善肉雞生長和飼料轉(zhuǎn)化率,以前人們很少將大麥用于肉雞日糧中,因其含有較高的β-葡聚糖酶,不利于生長,降低飼料轉(zhuǎn)化率,出現(xiàn)黏糞,添加β-葡聚糖酶已證明能減少β-葡聚糖酶的負效應。
大量試驗表明,日糧添加高比例的小麥,同時加木聚糖酶,肉雞的表觀代謝能、增重、飼料轉(zhuǎn)化率、蛋白質(zhì)消化率、脂肪消化率及糞便均得到改善。與玉米相比,其生長或飼料轉(zhuǎn)化率與玉米日糧相同,甚至超過玉米日糧。南京農(nóng)業(yè)大學以米糠在肉雞上做試驗,在米糠日糧添加以木聚糖為主的粗酶制劑,其日增重可提高11.1%,為米糠類飼料的利用開辟了有效途徑。
3飼用酶的應用模式
家禽家畜等的喂養(yǎng)方式是以粉料或顆粒的方式來喂養(yǎng)的。當使用粉料時,酶可以直接先加到預混料中,要均勻混合進去。當采用高溫制粒時就涉及到蛋白質(zhì)變性問題,酶是一種活性蛋白質(zhì),它與所有的蛋白質(zhì)一樣對環(huán)境很敏感,在高溫時會變性。飼料制粒后進入冷卻系統(tǒng)前,飼料的溫度很高,可達90℃,制粒會導致飼料自身內(nèi)源酶和外添加酶的活性受到損失,只是不同性質(zhì)的酶其活性損失程度不同。加酶飼料制粒后酶活性損失程度與不同酶的特性、酶制劑的劑型、制粒時溫度有關。由于酶在飼料制粒時,使用蒸汽調(diào)質(zhì),同時也承受壓力,用干酶制劑做耐高溫試驗或用酶在高溫溶液內(nèi)做耐高溫試驗不能說明制粒的結(jié)果,當然會存在一定的相關性。制粒酶活損失是一個頗有爭議的問題,因為酶被高度稀釋,到目前為止還沒有精確測定加酶飼料中的酶活性的方法。Nunes報道,制粒溫度高于60℃時顯著降低戊聚糖酶(如木聚糖)的活性。Spring報道,真菌淀粉酶和戊聚糖酶在制粒溫度達到80℃時無明顯的活性損失。
為了避免飼料制粒的活性損失,可采用穩(wěn)定化技術和制粒后噴酶技術。采用穩(wěn)定化技術,主要采用物理包埋、化學修飾來提高酶的耐熱性,這樣在制粒時,能有效減少酶的損失。制粒后噴酶,是將酶制劑在制粒后添加到飼料中的技術,其方法是采用液體酶通過噴霧系統(tǒng),將酶均勻地涂布到還保持余熱的顆粒飼料表面,利用余熱讓水分蒸發(fā)。采用這兩種技術都會極大提高飼用酶的成本,在飼料工業(yè)中目前還沒有應用,有些加酶飼料還仍采用制粒方法。
4飼用酶生物有待進一步研究的領域
盡管已證明酶在動物飼料中應用有較高的經(jīng)濟效益和社會效益,但它的應用仍處于起步階段,有許多問題需待研究。
4.1提高生物發(fā)酵效價,大幅度提高酶活性
目前很多酶的生產(chǎn)活力單位不夠高,這樣在應用時成本較高,不利于廣泛應用。如植酸酶,既能節(jié)約外加磷源的量又能改善環(huán)境,但它的應用受到了極大的限制,在國內(nèi)只應用于蛋雞上。其主要原因是,目前微生物發(fā)酵產(chǎn)生植酸酶的酶活力不高,在使用時并不比外加磷源成本低。肉雞生長快,磷的需求大,如果用外加植酸酶來代替磷源,其成本比外源磷高很多。如果極大地提高植酸酶發(fā)酵活力單位,降低成本,可使植酸酶得到更廣泛地應用。
4.2集多種酶有同一微生物生產(chǎn)
由于飼料成分復雜,添加復合酶效果比單一酶好。采用固體發(fā)酵生產(chǎn)的酶制劑,都是復合酶,以一種酶為主,活力較高,如含有其他幾種酶,一般活力較低。如果采用基因工程方法,構(gòu)筑基因工程菌,使產(chǎn)兩種以上高活力的酶的基因在同一種菌表達,如可采用將高產(chǎn)活力蛋白酶、果膠酶、α-半乳糖苷酶的基因構(gòu)筑在同一菌中,生產(chǎn)的酶用在以豆餅為主要蛋白源的飼料中(目前讓研究人員感興趣是將纖維素酶、β-葡聚糖酶、木聚糖酶、植酸酶這些單胃動物體內(nèi)不能分泌的酶的基因構(gòu)筑在一起,來產(chǎn)生復合酶),這樣可以極大的降低成本,促進酶制劑廣泛應用。
4.3研制能耐高溫的酶
能耐高溫的酶加入飼料中,能保證在飼料制粒時減少酶活性損失。通過各種方法選育出來的新型微生物酶,這種酶在高溫時沒有高的活性,而在37℃左右具有較高的活性,在制粒時也不受明顯的損失。這樣的酶最受飼料工業(yè)的歡迎。
4.4酶的應用方面
研究酶與日糧成分的相互作用,以確定所需酶的種類,同時研究酶在腸道內(nèi)的作用方式,和不同日糧狀況下酶的最佳組成,以及加酶后哪些氨基酸和微量元素或礦物質(zhì)可以不加或少加,所有這些將帶來較高的經(jīng)濟效益。