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等電聚焦載體兩性電解質(zhì)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-08-18

1 載體兩性電解質(zhì)必需具備的條件

(i)在等電點(diǎn)處必需有足夠的緩沖能力,以便能控制pH梯度,而不致被樣品蛋白質(zhì)或其他兩性物質(zhì)的緩沖能力改變pH梯度的進(jìn)程。
(ii)在等電點(diǎn)必需的足夠高電導(dǎo),以便使一定的電流通過,而且要求具備不同pH值的載體有相同的電導(dǎo)系數(shù),使整個體系中的電導(dǎo)均勻,如果有局部電導(dǎo)過小,就會產(chǎn)生極大的電位降,從而其他部分電壓就會太小,以致不能保持梯度,也不能使應(yīng)聚焦的成分進(jìn)行電遷移,達(dá)到聚焦。
(iii)分子量要小,便于與被分離的高分子物質(zhì)用透析或凝膠過濾法分開。
(iv)化學(xué)組成應(yīng)不同于被分離物質(zhì),不干擾測定。
(v)應(yīng)不與分離物質(zhì)反應(yīng)或使之變性。總起來說,當(dāng)一個兩性電解質(zhì)的等電點(diǎn)介于兩個很近的pk值之間時,它在等電點(diǎn)的解離度大,緩沖能力強(qiáng),而且電導(dǎo)系數(shù)高,這 就是好的載體兩性電解質(zhì)。

2 理想的載體兩性電解質(zhì)的合成

  用具有幾個pH值很相近的多乙烯多胺(如五乙烯六胺)為原料,與不飽和酸(如丙烯酸)發(fā)生加合反應(yīng):加合反應(yīng)優(yōu)先加在α、β飽和酸的β碳原子上,調(diào)節(jié)胺和酸的比例可以加上一個或多個羧基,這種合成方法與一般有機(jī)會合成不同,有機(jī)合成一般要求合成的產(chǎn)物愈純愈好,而這里要求合成出的產(chǎn)物愈復(fù)雜愈好,要有多異構(gòu)物和同系物,以保證的很多具有不同而又互相接近的pK值和pI值,從而得到平滑的pH梯度。載體兩性電解質(zhì)的等電點(diǎn)在pH3-10的范圍,分子量在300-1000之間,它們的緩沖能力等于或優(yōu)于組氨酸,電導(dǎo)性能良好,可以使電場強(qiáng)度分布較均勻,它們的水溶性良好,在1%水溶液中的紫外吸收值(260mμ)很低。

 

 

 

 

 

 
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