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液相夾心雜交

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-06
    1 親合雜交:在靶核酸存在下,兩個(gè)探針與靶雜交,形成夾心結(jié)構(gòu),雜交完成后,雜交物可移到新的管或凹孔中,在其中雜交物上的吸附探針可結(jié)合到固相支持物上,而雜交物上的檢測(cè)探針可產(chǎn)生檢測(cè)信號(hào)。用生物素標(biāo)記吸附探針,用125I標(biāo)記檢測(cè)探針,這個(gè)系統(tǒng)的敏感性可檢測(cè)出4×106靶分子。該試驗(yàn)保持了固相夾心雜交的高度特異性。
  2 采用多組合成探針和化學(xué)發(fā)光檢測(cè):第一類(lèi)探針是未標(biāo)記的檢測(cè)探針和液相吸附探針,它們有50個(gè)堿基長(zhǎng),其中含有30個(gè)細(xì)菌特異序列堿基和20個(gè)堿基的單鏈長(zhǎng)尾;第二類(lèi)探針是固相吸附探針,它可吸附在小珠或微孔板上。未標(biāo)記檢測(cè)探針的單鏈長(zhǎng)尾用于結(jié)合擴(kuò)增多個(gè)標(biāo)記探針,液相吸附探針和靶雜交物從溶液中分離并固定在小珠或微板上,典型的試驗(yàn)可用25個(gè)不同的檢測(cè)探針和10個(gè)不同的吸附探針。第一個(gè)標(biāo)記檢測(cè)探針上附著很多酶(堿性磷酸酶或過(guò)氧化物酶)可實(shí)現(xiàn)未標(biāo)記檢測(cè)探針的擴(kuò)增。使用化學(xué)發(fā)光酶的底物比用顯色反應(yīng)酶的底物更敏感。這個(gè)雜交方法已用于乙肝病毒、沙眼衣原體、淋球菌以及質(zhì)?剐缘臋z測(cè),敏感性達(dá)到能檢測(cè)5×104雙鏈DNA分子。
 

 

 
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