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RNA斑點(diǎn)雜交

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-06
    與DNA斑點(diǎn)雜交類(lèi)似,每個(gè)樣品至多加10μg總RNA(經(jīng)酚/氯仿或異硫氰酸胍提取純化)。方法是將RNA溶于5μlDEPC水,加15μl甲醛/SSC緩沖液(10×SSC中含0.15mol/l 甲醛)使RNA變性。然后取5~8μl點(diǎn)樣于處理好的濾膜上,烘干。
  培養(yǎng)細(xì)胞,標(biāo)本處理技術(shù)可以簡(jiǎn)化,不用提取和純化RNA。方法是用含0.5%Nonidet P40的低滲緩沖液對(duì)多種動(dòng)物細(xì)胞作簡(jiǎn)單處理,離心去掉細(xì)胞核和細(xì)胞碎片,就得到基本不帶DNA而富含RNA的細(xì)胞質(zhì)提取物,這一粗RNA在高鹽下用甲醛變性,不需加工直接點(diǎn)到硝酸纖維素膜上。本法可以快速檢測(cè)大量標(biāo)本,而只需極少量的細(xì)胞(5×104)或組織。
  整個(gè)RNA實(shí)驗(yàn)中,要防止激活內(nèi)源性RNase,有許多種預(yù)防措施,有一種是在樣品中加入核糖核苷氧礬基復(fù)合物(RVC)。
 

 

 
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