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瓊脂糖凝膠電泳法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-02
1.儀器裝置 電泳室及直流電源同紙電泳。
2.試劑
(1) 醋酸-鋰鹽緩沖液(pH3.0) 取冰醋酸50ml,加水800ml混合后,用氫氧化鋰調(diào)節(jié)pH至3.0,再加水至1000ml。
(2) 甲苯胺藍(lán)溶液 取甲苯胺藍(lán)0.1g,加水100ml使溶解。
3.操作
(1)制膠 取瓊脂糖約0.2g,加水10ml,置水浴中加熱使溶脹完全,加溫?zé)岬拇姿幔圎}緩沖液(pH3.0)10ml,混勻,趁熱將膠液涂布于大小適宜(2.5cm×7.5cm或4cm×9cm)的玻璃板上,厚度約3mm,靜置,待凝膠結(jié)成無(wú)氣泡的均勻薄層,即得。
(2) 標(biāo)準(zhǔn)品溶液及供試品溶液的制備 照各藥品項(xiàng)下規(guī)定配制。
(3) 點(diǎn)樣與電泳 在電泳槽內(nèi)加入醋酸-鋰鹽緩沖液(pH3.0),將凝膠板置于電泳槽架上,經(jīng)濾紙橋浸入緩沖液。于凝膠板負(fù)極端分別點(diǎn)樣1μl,立即接通電源,在電壓梯度約30V/cm,電流強(qiáng)度1~2mA/cm的條件下,電泳約20分鐘,關(guān)閉電源。
(4) 染色與脫色 取下凝膠板,用甲苯胺藍(lán)溶液染色,用水洗去多余的染色液至背景無(wú)色為止。
 

 

 
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