少妇av中文字幕社_无码无码av中国精品片_婷婷五月在线精品视频在线_性色福利刺激无码专区

VIP標(biāo)識 上網(wǎng)做生意,首選VIP會員| 設(shè)為首頁| 加入桌面| | 手機版| RSS訂閱
食品伙伴網(wǎng)服務(wù)號
 

siRNAs制備的方法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01

目前為止較為常用的5種制備siRNAs的方法包括:

1.化學(xué)合成

2.體外轉(zhuǎn)錄

3.長片斷dsRNAs經(jīng)RNase III 類降解

4.siRNA表達載體或者病毒載體在細(xì)胞中表達siRNAs

5.PCR制備的siRNA表達框在細(xì)胞中表達

前三種方法經(jīng)過體外制備siRNAs然后應(yīng)用專門的RNA轉(zhuǎn)染試劑將siRNAs轉(zhuǎn)到細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染或者電轉(zhuǎn)染導(dǎo)入哺乳動物細(xì)胞;后兩種方法則這兩種方法的優(yōu)點在于不需要直接操作RNA,依賴能夠表達siRNAs的DNA載體或者基于PCR的表達框架轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,通過轉(zhuǎn)染到細(xì)胞的DNA模板在體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄得到siRNAs。每種方法都有自己的優(yōu)點和缺點。哪種是最好的方法,其實取決于實驗?zāi)康摹?br />

比較項目

體外制備siRNA

體內(nèi)表達siRNA

化學(xué)合成

體外轉(zhuǎn)錄

RNase III降解dsRNA

SiRNA

表達載體

PCR

表達框

設(shè)計和篩選最有效siRNA序列

需要

不需要

需要

材料需求

21ntsiRNA

29nt siDNA

轉(zhuǎn)錄模版 (200-1000bp)

45-50nt dsDNA

~50nt dsDNA

制備規(guī)模

大量

受限

大量

受限

合成/制備 轉(zhuǎn)染

所需時間

4-2

dsDNA合成時間 1

轉(zhuǎn)錄模版制備時間 1

dsDNA合成時間 5天以上

dsDNA合成時間 6小時

個人所需操作時間

幾乎沒有

(只需定購)

中等

中等

標(biāo)記siRNA

進行細(xì)胞定位

不能

轉(zhuǎn)染的難易程度

專門的RNA轉(zhuǎn)染試劑或者電轉(zhuǎn)染

DNA轉(zhuǎn)染,不直接操作RNA

檢測總體轉(zhuǎn)染效率

不能

不能

抑制時效(即穩(wěn)定性)

短暫

長期

短暫

制備費用

相對較低

中等

 

 

 
推薦圖文
推薦食品專題
點擊排行
 
 
Processed in 0.670 second(s), 1203 queries, Memory 3.47 M