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腺病毒載體的優(yōu)點(diǎn)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01

1. 宿主范圍廣, 對人致病性低
腺病毒載體系統(tǒng)可廣泛用于人類及非人類蛋白的表達(dá)。腺病毒可感染一系列哺乳動物細(xì)胞,因此在大多哺乳動物細(xì)胞和組織中均可用來表達(dá)重組蛋白。特別需要指出的是:腺病毒具有嗜上皮細(xì)胞性,而人類的大多數(shù)的腫瘤就是上皮細(xì)胞來源的。另外,腺病毒的復(fù)制基因和致病基因均已相當(dāng)清楚,在人群中早已流行(70-80%成人體內(nèi)都有腺病毒的中和抗體存在)。人類感染野生型腺病毒后僅產(chǎn)生輕微的自限性癥狀,且病毒唑治療有效。

2. 在增殖和非增殖細(xì)胞中感染和表達(dá)基因

逆轉(zhuǎn)錄病毒只能感染增殖性細(xì)胞,因此DNA轉(zhuǎn)染不能在非增殖細(xì)胞中進(jìn)行,而必須使細(xì)胞處于持續(xù)培養(yǎng)狀態(tài)。腺病毒則能感染幾乎所有的細(xì)胞類型,除了一些抗腺病毒感染的淋巴瘤細(xì)胞。腺病毒是研究原代非增殖細(xì)胞基因表達(dá)的最佳系統(tǒng),它可以使轉(zhuǎn)化細(xì)胞和原代細(xì)胞中得到的結(jié)果直接進(jìn)行對比。

3. 能有效進(jìn)行增殖,滴度高

腺病毒系統(tǒng)可產(chǎn)生1010到1011VP/ml,濃縮后可達(dá)1013VP/ml,這一特點(diǎn)使它非常適用于基因治療。

4. 與人類基因同源

腺病毒載體系統(tǒng)一般應(yīng)用人類病毒作為載體,以人類細(xì)胞作為宿主,因此為人類蛋白進(jìn)行準(zhǔn)確的翻譯后加工和適當(dāng)?shù)恼郫B提供了一個理想的環(huán)境。大多數(shù)人類蛋白都可達(dá)到高水平表達(dá)并且具有完全的功能。

5. 不整合到染色體中,無插入致突變性

逆轉(zhuǎn)錄病毒可隨機(jī)整合到宿主染色體,導(dǎo)致基因失活或激活癌基因。而腺病毒則除了卵細(xì)胞以外幾乎在所有已知細(xì)胞中都不整合到染色體中,因此不會干擾其它的宿主基因。在卵細(xì)胞中整合單拷貝病毒則是產(chǎn)生具有特定特征的轉(zhuǎn)基因動物的一個較好的系統(tǒng)。

6. 能在懸浮培養(yǎng)液中擴(kuò)增

293細(xì)胞可以適應(yīng)懸浮培養(yǎng),這一調(diào)整可使病毒大量擴(kuò)增。大量事實(shí)證明懸浮293細(xì)胞可在1~20L的生物反應(yīng)器中表達(dá)重組蛋白。

7. 能同時表達(dá)多個基因

這是第一個可以在同一細(xì)胞株或組織中用來設(shè)計表達(dá)多個基因的表達(dá)系統(tǒng)。最簡單的方法是將含有兩個基因的雙表達(dá)盒插入腺病毒轉(zhuǎn)移載體中,或者用不同的重組病毒共轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞株來分別表達(dá)一個蛋白。測定不同重組病毒的MOI比值可正確估計各重組蛋白的相對共表達(dá)情況。
正是由于具有以上一些優(yōu)點(diǎn),腺病毒被極其廣泛地應(yīng)用于體外基因轉(zhuǎn)導(dǎo)、體內(nèi)接種疫苗、和基因治療等各個領(lǐng)域。

 

 

 
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