(一) 構(gòu)建重組腺病毒載體的目的
1. 增加外源基因的裝載容量 我們知道,腺病毒有一定的包裝容積限制,大約在75~105%,即28~40kb左右,若超出此范圍則或是不能包裝或是發(fā)生分子重排。以5型腺病毒基因組36kb計算,在不對腺病毒基因組作任何改變的情況下,腺病毒載體最多可以轉(zhuǎn)運2.8kb左右的外源基因,這對于許多基因治療方案來說是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。為了進(jìn)一步地擴(kuò)大腺病毒載體的應(yīng)用范疇,有必要缺失其基因組中的某些反式作用元件以增大其裝載容積。
2. 降低免疫原性 如前所述,強(qiáng)免疫原性是腺病毒的主要特點之一,在有免疫功能的動物體內(nèi)會很快被清除掉,導(dǎo)致其所攜帶的目的基因表達(dá)時相比較短。研究表明,腺病毒的強(qiáng)免疫原性主要是由其衣殼蛋白和晚期基因表達(dá)產(chǎn)物(L1~L5)引起的。因此,可以通過控制腺病毒晚期基因的表達(dá)來降低其免疫原性。
3. 提高靶向性 腺病毒的宿主范圍廣的特點使其被廣泛應(yīng)用于基因治療的各個領(lǐng)域,然而在許多基因治療方案中只需感染特定的組織或細(xì)胞,矯枉過正,反受其害。有多種方案用于提高腺病毒載體的靶向性,主要可以概括為以下兩個研究方向:其一是對腺病毒的纖毛蛋白和五聚體進(jìn)行改造,使其可以特異性地與某些組織、細(xì)胞表面的受體結(jié)合;另一個研究方向是調(diào)控腺病毒生長所必需的基因,使其可以靶向特定的組織或細(xì)胞內(nèi)復(fù)制增殖,表達(dá)目的基因。
(二) 腺病毒載體的分類:
按生活周期不同,大體上可將重組腺病毒載體可分為復(fù)制缺陷型(replication- defective)和增殖型(replication-competent)腺病毒載體兩大類別。