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轉(zhuǎn)錄依賴的擴增系統(tǒng)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01
轉(zhuǎn)錄依賴的擴增系統(tǒng)(Transcript-based amplification system,TAS),是Kwen等人于1989年研究報道的,主要用于擴增RNA合成A、B引物,引物A的3'末端與待擴增RNA互補,其5'端有T7RNA多聚酶的啟動子信息.逆轉(zhuǎn)錄酶以A引物為起點合成cDNA;引物B與此cDNA3'端互補合成cDNA第二鏈.逆轉(zhuǎn)錄酶除具有逆轉(zhuǎn)錄活性外,還有DNA多聚酶的活性及RNaseH的活性.T7RNA多聚酶又以此雙鏈DNA為模板.轉(zhuǎn)錄出與待擴增RNA一樣的RNA,這些RNA又可作為下輪反應(yīng)的模板.T7RNA多聚酶的催化效率很高,一個模板可轉(zhuǎn)錄10~103個RNA拷貝,因而反應(yīng)液中待檢RNA的數(shù)量以10的指數(shù)方式擴增.
  TAS的主要特點是擴增效率高,因為其RNA拷貝數(shù)呈10的指數(shù)方式增加,只需6個循環(huán)靶序列的拷貝數(shù)就能達到2×106.它的另一個特點是特異性高,由于TAS只能進行6次溫度循環(huán),錯摻率低,加之用葡聚糖珠夾心雜交,因而特異性也高.雖然本法有較高的特異性和敏感性,但其循環(huán)過程復(fù)雜,需重復(fù)加入逆轉(zhuǎn)錄酶和T7RNA多聚酶,有待進一步研究.
 

 

 
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