少妇av中文字幕社_无码无码av中国精品片_婷婷五月在线精品视频在线_性色福利刺激无码专区

VIP標識 上網(wǎng)做生意,首選VIP會員| 設為首頁| 加入桌面| | 手機版| RSS訂閱
食品伙伴網(wǎng)服務號
 

PCR技術簡史

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01

PCR的最早設想
核酸研究已有100多年的歷史,本世紀60年代末、70年代初人們致力于研究基因的體外分離技術,Korana于1971年最早提出核酸體外擴增的設想:“經(jīng)過DNA變性,與合適的引物雜交,用DNA聚合酶延伸引物,并不斷重復該過程便可克隆tRNA基因”。

PCR的實現(xiàn)
1985年美國PE-Cetus公司人類遺傳研究室的Mullis等發(fā)明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應。其原理類似于DNA的體內(nèi)復制,只是在試管中給DNA的體外合成提供以致一種合適的條件---摸板DNA,寡核苷酸引物,DNA聚合酶,合適的緩沖體系,DNA變性、復性及延伸的溫度與時間。

PCR的改進與完善
 Mullis最初使用的DNA聚合酶是大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片段,其缺點是:①Klenow酶不耐高溫,90℃會變性失活,每次循環(huán)都要重新加。②引物鏈延伸反應在37℃下進行,容易發(fā)生模板和引物之間的堿基錯配,其PCR產(chǎn)物特異性較差,合成的DNA片段不均一。此種以Klenow酶催化的PCR技術雖較傳統(tǒng)的基因擴增具備許多突出的優(yōu)點,但由于Klenow酶不耐熱,在DNA模板進行熱變性時,會導致此酶鈍化,每加入一次酶只能完成一個擴增反應周期,給PCR技術操作程序添了不少困難。這使得PCR技術在一段時間內(nèi)沒能引起生物醫(yī)學界的足夠重視。1988年初,Keohanog改用T4 DNA聚合酶進行PCR,其擴增的DNA片段很均一,真實性也較高,只有所期望的一種DNA片段。但每循環(huán)一次,仍需加入新酶。1988年Saiki 等從溫泉中分離的一株水生嗜熱桿菌(thermus aquaticus) 中提取到一種耐熱DNA聚合酶。此酶具有以下特點:①耐高溫,在70℃下反應2h后其殘留活性大于原來的90%,在93℃下反應2h后其殘留活性是原來的60%,在95℃下反應2h后其殘留活性是原來的40%。②在熱變性時不會被鈍化,不必在每次擴增反應后再加新酶。③大大提高了擴增片段特異性和擴增效率,增加了擴增長度(2.0Kb)。由于提高了擴增的特異性和效率,因而其靈敏性也大大提高。為與大腸桿菌多聚酶I Klenow片段區(qū)別,將此酶命名為Taq DNA多聚酶(Taq DNA Polymerase)。此酶的發(fā)現(xiàn)使PCR廣泛的被應用。

 

 

 
推薦圖文
推薦食品專題
點擊排行
 
 
Processed in 0.157 second(s), 19 queries, Memory 0.88 M