互補(bǔ)雜交要根據(jù)探針的類型、長(zhǎng)度以及研究目的來(lái)選擇優(yōu)化雜交條件。如用于基因表達(dá)檢測(cè)，雜交時(shí)需要高鹽濃度、樣品濃度高、低溫和長(zhǎng)時(shí)間(往往要求過(guò)夜)，但嚴(yán)謹(jǐn)性要求則比較低，這有利于增加檢測(cè)的特異性和低拷貝基因檢測(cè)的靈敏度；若用于突變檢測(cè)，要鑒別出單堿基錯(cuò)配，需要故需要在短時(shí)間內(nèi)(幾小時(shí))、低鹽、高溫條件下高嚴(yán)謹(jǐn)性雜交。多態(tài)性分析或者基因測(cè)序時(shí)，每個(gè)核苷酸或突變位都必須檢測(cè)出來(lái)，通常設(shè)計(jì)出一套四種寡聚核酸，在靶序列上跨越每個(gè)位點(diǎn)，只在中央位點(diǎn)堿基有所不同，根據(jù)每套探針在某一特點(diǎn)位點(diǎn)的雜交嚴(yán)謹(jǐn)程度，即可測(cè)定出該堿基的種類。

　　雜交反應(yīng)還必須考慮雜交反應(yīng)體系中鹽濃度、探針GC含量和所帶電荷、探針與芯片之間連接臂的長(zhǎng)度及種類、檢測(cè)基因的二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響。有資料顯示探針和芯片之間適當(dāng)長(zhǎng)度的連接臂可使雜交效率提高150倍。連接臂上任何正或負(fù)電荷都將減少雜交效率。由于探針和檢測(cè)基因均帶負(fù)電荷，因此影響他們之間的雜交結(jié)合，為此德國(guó)癌癥研究院的Jorg Hoheisel等提出用不帶電荷的肽核酸（PNA）做探針效果更好。雖然PNA的制備比較復(fù)雜，但與DNA探針比較有許多特點(diǎn)，如不需要鹽離子，因此可防止檢測(cè)基因二級(jí)結(jié)構(gòu)的形成及自身復(fù)性。由于PNA-DNA結(jié)合更加穩(wěn)定和特異，因此更有利于單堿基錯(cuò)配基因的檢測(cè)。我們?cè)谶@里簡(jiǎn)單介紹一些常用雜交試劑和消耗品

　　對(duì)于商品化的芯片和Array類產(chǎn)品，通常都有配套的雜交試劑以方便使用。例如：

　　1. Clontech公司的Altas Glass Microarrays，產(chǎn)品已經(jīng)包含GlassHyb Hybridization Solution和GlassHyb Wash Solution，能有效縮短雜交時(shí)間，提高信噪比。同時(shí)還提供了方便使用的Altas Glass Hybridization Chamber，旋蓋式的設(shè)計(jì)和1.8ml的容積，避免了傳統(tǒng)coverslip式雜交盒的弊端�？梢詥为�(dú)購(gòu)買。

　　7899-1 Altas Glass Hybridization Chamber each

　　8016-1 GlassHyb Hybridization Solution 50ml

　　2. Clontech ExpressHyb Hybridization Solution快速雜交液能有效加快雜交速度，減少雜交時(shí)間，同時(shí)提高靈敏度。適用于各種基于膜的核酸雜交反應(yīng)，如cDNA Array、Southern、Northern、菌落原位雜交，特別是Clontech公司的Altas系列、MTN系列、MTE系列的各種膜基質(zhì)的Macroarray。在 這些系列的產(chǎn)品中均配有快速雜交液樣品。由于膜可以反復(fù)使用，通常需要另外購(gòu)買快速雜交液。

　　8015-1 ExpressHyb Hybridization Solution 250ml

　　8015-2 ExpressHyb Hybridization Solution 500ml

　　3. 對(duì)于自己制作的芯片，可以自行配置雜交緩沖液，也可以參考Ambion公司提供的幾種Glass Array 雜交緩沖液。SlideHyb Glass Array Hybridization Survey Kit是專為玻片或者尼龍膜基質(zhì)的玻片DNA Array優(yōu)化雜交條件而設(shè)計(jì)的。由于芯片的雜交條件受多種因素的影響，Ambion認(rèn)為很難找到一種適用于所有芯片的雜交緩沖液。在這個(gè)試劑盒中提供了4種嚴(yán)謹(jǐn)程度不同的雜交液，供不同的需要。1號(hào)緩沖液的雜交條件是最嚴(yán)謹(jǐn)?shù)�，背景最低�?、3號(hào)的靈敏度相應(yīng)提高而背景也相應(yīng)升高，4號(hào)緩沖液沒(méi)有去垢劑。這些雜交液可以單獨(dú)購(gòu)買，連預(yù)先配好的SDS、SSC等常用緩沖液都可以在Ambion買到。畢竟在芯片這樣精密的實(shí)驗(yàn)中，在這么小的一個(gè)點(diǎn)上的DNA的量是非常有限的，要得到理想的結(jié)果需要非常精確的反應(yīng)條件。Ambion 同樣提供芯片雜交盒，抗化學(xué)腐蝕，耐70度高溫，一次可放三張片。

　　Cat.No. Product Name Size

　　1860 SlideHyb™GlassArray Hybridization Survey Kit 100rxns

　　8861 SlideHyb™ Glass Array Hybridization Buffer#1 5 x 2 ml

　　8862 SlideHyb™ Glass Array Hybridization Buffer #2 5 x 2 ml

　　8863 SlideHyb™ Glass Array Hybridization Buffer #3 5 x 2 ml

　　8864 SlideHyb™ Glass Array Hybridization Buffer #4 5 x 2 ml

　　10040 Glass Array Hybridization Cassette 1 each

　　4. Ambion同樣提供適用于各種核酸膜雜交的雜交液和Wash Buffer，精心優(yōu)化的反應(yīng)條件有效提高雜交靈敏度和降低背景，已經(jīng)經(jīng)過(guò)ULTRArray (Ambion), Atlas(Clontech)，LifeGrid (Incyte Genomics), GeneFilter (Research Genetics), and Panorama (Sigma-Genosys) arrays等產(chǎn)品驗(yàn)證。

　　Cat# ProductName Size

　　7118 Yeast RNA 10 x 10 mg/ml

　　8665 ULTRArray™ Hybridization Buffer 225 ml

　　8666 ULTRArray™ Hybridization Buffer 500 ml

　　8667 ULTRArray™ Low Stringency Wash Buffer 1 L

　　8668 ULTRArray™ High Stringency Wash Buffer 1 L

　　9680 Salmon Sperm DNA (sheared) 10x10 mg/ml

　　9763 20X SSC 1 L

　　9765 20X SSC 4 x 1 L

　　9780 RNaseZap™ 250 ml