原理

混合型玫瑰花環(huán)的方法是既應用補體致敏的家鴿紅細胞（PRBC）作為B—細胞的標志，同時又應用綿羊紅細胞（SRBC）作為T—細胞的標志，在一張玻片上同時檢測T、B淋巴細胞。

操作方法

1．鴿翼下靜脈采血，加等量阿氏液，保存于4℃，可用2周。

2．以Hank’s液洗鴿紅細胞3次，最后配成5％PRBC懸液。

3．取5％PRBC0.25ml，加溶血素（兔抗鴿紅細胞抗體，亞凝集單位）0.25ml于37℃水浴30min。以Hank’s液洗滌3次，去上清，加Hank’s液0.25ml。

4．加1％SRBC懸液0.25ml，37℃水浴30min，Hank’s液洗滌3次，去上清，加Hank’s液0.25ml。

5．加淋巴細胞懸液0.25ml（2×106～4×106個細胞／ml），37℃水浴5min，500r/min離心3min，置4℃過夜。

6．取出迅速加入20％甲醛溶液0.5ml，混勻，于4℃放置10min后，加2滴2％美蘭液，輕輕搖勻。

7．取1滴于載玻片，加蓋玻片，置鏡下觀察。計數(shù)300個淋巴細胞。

結果判定

一個淋巴細胞吸附有3個以上的PRBC為PRBC玫瑰花細胞，即為B細胞。

一個淋巴細胞周圍吸附有3個以上SRBC為SRBC玫瑰花細胞，即為T細胞。

一個淋巴細胞周圍附有2個以上PRBC和3個以上SRBC為雙相玫瑰花細胞，即為D淋巴細胞。

既無PRBC又無SRBC附著的淋巴細胞為N淋巴細胞，即為無標記淋巴細胞。

D淋巴細胞與N淋巴細胞是極少數(shù)的。

計數(shù)300個淋巴細胞，分別計數(shù)PRBC、SRBC玫瑰花細胞和雙相玫瑰花細胞的形成率。