保存

當(dāng)獲得產(chǎn)生所需的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞后，必須將一部分雜交瘤細(xì)胞保存，否則在連續(xù)傳代的過程中，可能產(chǎn)生突變或染色體的漂移以至喪失固有特性或丟失產(chǎn)生抗體的特性。另外在長期的培養(yǎng)過程中，難免不發(fā)生污染以至于毀滅。所以必須冷藏保存一部分。保存方法如下：

1．材料

(1) 細(xì)胞：取對數(shù)生長期的細(xì)胞。

(2) 10％二甲基亞砜保護(hù)液（二甲基亞砜能損壞濾器，而又被高壓所破壞，所以不能過濾或高壓消毒。其本身就是毒品，無菌）：含10％二甲基亞砜、20％滅活胎牛血清，70％RPMI—1640液。

(3) 20％FCS—1640培養(yǎng)液：含青霉素100U/ml，鏈霉素100μg/ml。

(4) 滅菌的2ml安瓶等

2．操作方法

(1) 去掉細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的舊的培養(yǎng)液，加入10％FCS—1640液，使細(xì)胞懸浮。

(3) 1 000r/min離心10min，去上清。細(xì)胞沉淀用10％二甲基亞砜保護(hù)液制成懸液，使成1.0×107細(xì)胞／ml。

(3) 取樣，臺盼蘭染色，計數(shù)活細(xì)胞，應(yīng)在95％以上。

(4) 用注射器將細(xì)胞分裝安瓶，每瓶0.5ml～1.0ml，熔封安瓶。

(5) 放4℃ 2h。

(6) 放液氮罐氣態(tài)部分（-70℃）15h。

(7) 轉(zhuǎn)入液氮部分。

復(fù)蘇

1．從液氮罐中取出安瓶立即放37℃水浴中速溶。

2．無菌操作打開安瓶，取出細(xì)胞懸液，轉(zhuǎn)入組織培養(yǎng)瓶。

3．逐滴緩慢加入20％FCS－1640培養(yǎng)液3.5ml，這個過程延續(xù)3min。

4．5％CO2飽和濕度，37℃培養(yǎng)。

5．4h后棄去培養(yǎng)液上清，加入新鮮的20％FCS－1640培養(yǎng)液。

6．繼續(xù)培養(yǎng)，換液，以至形成單層。