瓊脂凝膠結構均勻,含水量大,吸附量小,因此電泳速度快,電泳結果區(qū)帶整齊,分辨率高,易染色,制成薄膜標本保存方便。所以瓊脂凝膠電泳最常用。
試劑及材料
1.pH8.6離子強度0.05巴比妥緩沖液
2.優(yōu)質瓊脂
3.玻板、打孔器等
操作方法
1.以巴比妥緩沖液配成1%~1.5%瓊脂,溶化后制成2mm~3mm的瓊脂板。
2.打孔 在玻片的1/3處打孔,孔徑3mm~6mm。也可用剃須刀片挖一小槽。
3.加樣 將血清樣品直接加入孔內,如非血清樣品則盡可能用pH7.4PBS透析后加樣。
也可以不打孔,用濾紙片蘸取樣品直接插入以小刀劃開的瓊脂裂縫中。
4.電泳 將樣品端放入負極,用濾紙(紗布、棉布均可)2~3層搭橋(與玻片同寬度),電壓3V/cm~6V/cm,電流強度1.5mA/cm~3mA/cm。
5.斷電 電泳2h~4h,斷電。
6.固定、染色、觀察結果。
注意事項
1.為了觀察泳動情況,以掌握斷電時間,可在加樣的同時,加一滴伊文斯蘭染色液即可。
2.開始電泳時,電壓要小一些,以逐漸升至所需要得強度。