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間接炭凝反應(yīng)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

原理

間接炭凝集反應(yīng)簡稱炭凝。它是以炭粉微粒作為載體,將已知的抗體球蛋白吸附于這種載體上,形成炭粉抗體復(fù)合物,當(dāng)炭血清與相應(yīng)的抗原相遇時,二者發(fā)生特異性結(jié)合,形成肉眼可見的炭微粒凝集塊。

目前炭凝反應(yīng)已用于炭疽、鼠疫和馬副傷寒性流產(chǎn)等病的診斷。


材料與試劑

1.炭粉 炭粉粒子最好大小在0.12mm~0.15mm,目前市場上出售的炭粉均不合要求,必須過300目/寸的標(biāo)準(zhǔn)篩以300r/min離心去沉淀,再以3 000r/min離心去上清,收集沉淀物。

2.高免血清

3.待測標(biāo)本

4.滅活兔血清

5.正常血清

6.標(biāo)準(zhǔn)抗原

7.0.05mol/L pH7.2PBS液

8.1%硼酸的PBS液


操作方法

1.炭致敏 取濕炭粉0.25g(干粉0.10g),加入經(jīng)56℃~60℃滅活30min的稀釋高免血清3ml,充分搖勻,置37℃致敏30min,不時搖動,取出后用pH 7.2 PBS液洗滌3次。最后一次用含1%硼酸和1%兔血清的PBS液洗滌一次,離心去上清,再取此液3ml,混勻即可。同時以正常血清致敏的炭粒處理,以作對照。

致敏血清(加1/萬硫柳汞防腐)于室溫或4℃冰箱中保存,一年內(nèi)有效。

2.取潔凈玻璃板一塊,以玻璃鉛筆劃成小格,加被檢標(biāo)本0.10ml,再加免疫炭血清0.05ml,充分混勻,靜止1min~5min,判定結(jié)果。同時設(shè)三個對照:

⑴免疫炭血清 標(biāo)準(zhǔn)抗原。

⑵正常炭血清 標(biāo)準(zhǔn)抗原。

⑶正常炭血清加待檢抗原。


結(jié)果判定

在對照完全成立的情況下,判定本試驗(yàn)結(jié)果:

“++++”:炭粉全部凝集,液體完全清亮透明。

“+++” :炭粉大部分凝集,液體透明。

“++” :炭粉一半凝集,液體較透明。

“+” :炭粉微凝集,但與對照有差別,液體混濁。

“—” :炭粉不凝集,液體不透明。

炭凝以“++”做為反應(yīng)滴度的終點(diǎn)。

 

 

 
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