病毒或毒素與相應(yīng)的抗體結(jié)合后,失去對(duì)易感動(dòng)物的致病力,謂之中和試驗(yàn)。本試驗(yàn)主要用于:①從待檢血清中檢出抗體,或從病料中檢出病毒,從而診斷病毒性傳染。②用抗毒素血清檢查材料中的毒素或鑒定細(xì)菌的毒素類(lèi)型;③測(cè)定抗病毒血清或抗毒素效價(jià);④新分離病毒的鑒定和分型,中和試驗(yàn)不僅可在易感的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行,亦可在細(xì)胞培養(yǎng)上或雞胚上進(jìn)行。試驗(yàn)方法主要有簡(jiǎn)單定性試驗(yàn)、固定血清稀釋病毒法、固定病毒稀釋血清法、空斑減少法等。
在細(xì)胞培養(yǎng)上進(jìn)行病毒中和試驗(yàn),近年來(lái)多采用空斑減少法。先將病毒稀釋成適當(dāng)濃度,使每0.2ml含80個(gè)~100個(gè)PFU(空斑形成單位),與不同稀釋度的待檢血清等量混合,置
表 空斑減少法中和試驗(yàn)示例
血清稀 釋倍數(shù)[1] |
1:16 (4-2) |
1:64 (4-3) |
1:256 (4-4) |
1:1024 (4-5) |
1:409 (4-6) |
不加 血清 對(duì)照 |
中和抗 體價(jià)[2] |
|
待檢血清A |
空斑數(shù) |
3 |
13 |
38 |
51 |
53 |
55 |
4-3.6=1:140 |
空斑減少率 |
95% |
76% |
31% |
7% |
0% |
|||
待檢血清B |
空斑數(shù) |
- |
8 |
25 |
51 |
56 |
55 |
4-4.1=1:290 |
空斑減率數(shù) |
- |
85% |
54% |
7% |
0% |
|||
待檢血清C |
空斑數(shù) |
- |
- |
6 |
22 |
44 |
55 |
4-5.2=1:1300 |
空斑減少率 |
- |
- |
89% |
59% |
19% |
注:[1] 血清用4倍遞增稀釋?zhuān)?/span>
[2] 空斑減少50%的血清稀釋度,其計(jì)算法同LD50的計(jì)算。