病毒或毒素與相應(yīng)的抗體結(jié)合后,失去對易感動(dòng)物的致病力,謂之中和試驗(yàn)。本試驗(yàn)主要用于:①從待檢血清中檢出抗體,或從病料中檢出病毒,從而診斷病毒性傳染。②用抗毒素血清檢查材料中的毒素或鑒定細(xì)菌的毒素類型;③測定抗病毒血清或抗毒素效價(jià);④新分離病毒的鑒定和分型,中和試驗(yàn)不僅可在易感的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行,亦可在細(xì)胞培養(yǎng)上或雞胚上進(jìn)行。試驗(yàn)方法主要有簡單定性試驗(yàn)、固定血清稀釋病毒法、固定病毒稀釋血清法、空斑減少法等。
本法多將病毒作10倍遞增稀釋,分置2列試管,第一列加正常血清(對照組),第二列加待檢血清(試驗(yàn)組)。混合后,置
表 固定血清稀釋病毒法術(shù)式
混合前 病毒稀釋 |
2×10-1 |
2×10-2 |
2×10-3 |
2×10-4 |
2×10-5 |
2×10-6 |
2×10-7 |
- |
|
正常 血清 |
稀釋病毒 |
- |
- |
- |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
- |
正常血清 |
- |
- |
- |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
|
對照組 |
稀釋液 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
1.0 |
待檢血清 |
稀釋病毒 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
- |
待檢血清 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
|
中和組 |
稀釋液 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
1.0 |
混合后病 毒稀釋 |
10-1 |
10-2 |
10-3 |
10-4 |
10-5 |
10-6 |
10-7 |
- |
表 固定血清稀釋病毒法中和試驗(yàn)(例)
病毒稀釋 |
10-1 |
10-2 |
10-3 |
10-4 |
10-5 |
10-6 |
10-7 |
LD50[2] |
中和指數(shù) |
正常血清對照組 |
- |
- |
- |
4/4[1] |
3/4 |
1/4 |
0/4 |
10-5.5 |
103.3=1.995 |
待檢血清中和組 |
4/4 |
2/4 |
1/4 |
0/4 |
0/4 |
0/4 |
0/4 |
10-2.2 |
注:[1]分母為接種數(shù),分子為死亡數(shù);
[2]LD50計(jì)算見實(shí)例。
中和指數(shù)=中和組LD50/對照組LD50=10-2.2/10-5.5=103.3
查3.3反對數(shù)是1.995,故中和指數(shù)103.3=1.995。也就是說該待檢血清中和病毒的能力為正常血清的1.995倍。本法多用以檢出待檢血清中的中和抗體,對病毒而言,通常中和指數(shù)大于50者判為陽性,10~49為可疑,小于10為陰性。