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免疫金試紙膜和試劑盒檢測法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27
因為膠體金具有肉眼可觀察的紅色,所以為不需要任何儀器的試紙膜或試劑盒法的免疫檢測提供了可能,利用免疫金試紙膜法檢測的模式可以很靈活,根據(jù)具體情況可以采用不同的方式:既可以標(biāo)記抗體,又可以標(biāo)記抗原;既可以采用標(biāo)記抗原與待測抗原的競爭方式進行檢測,又可以利用標(biāo)記抗體或標(biāo)記二抗的夾心法方式進行檢測。
美國PAN PROBE、INC、生物技術(shù)公司生產(chǎn)的產(chǎn)品名稱為“快速一步法膠體金尿測試條”的膠體金試紙,有以下幾種產(chǎn)品種類:(1)嗎啡/海洛因/鴉片;(2)可卡因;(3)苯丙胺;(4)甲基苯丙胺;(5)大麻;(6)安定。這種檢測試條的檢測時間是5min,在室溫下保存有效期兩年.使用方法是將3滴尿液加入加樣孔,雙紅線為陰性,單紅線為陽性[3]
本試驗基于抗原/抗體結(jié)合反應(yīng)的原理,并被用于對人類尿樣中嗎啡和鴉片制品的分析檢測.分析過程中,在尿樣中的藥物及其代謝物與固著在滲透膜上的藥物綴合物共同競爭在有色微小顆粒上的有限的抗體結(jié)合部位.試驗?zāi)驑颖坏稳氲綕B透膜一端的樣本液槽中.如果尿樣含有所要檢測的藥物,那么藥物及其代謝產(chǎn)物會競爭在微小顆粒上的有限的抗體結(jié)合部位、當(dāng)藥物很充足時,它們會全部占據(jù)抗體結(jié)合部位、這會阻止有色微小顆粒和膜上試驗探極區(qū)相結(jié)合.這樣陽性尿樣在試驗區(qū)就不會出現(xiàn)沉淀色帶.試紙上另一條對照色帶是另一處抗體反應(yīng)區(qū),它表明試驗是可靠的.在作試驗結(jié)果判斷前,對照色帶總是應(yīng)該出現(xiàn)的.一般情況下,陰性結(jié)果是出現(xiàn)兩條色帶:一條為對照色帶,在試驗區(qū)還出現(xiàn)一條色帶沉淀線,而陽性結(jié)果只出現(xiàn)一條色帶。
市面上大量使用的早早孕HCG膠體金試紙,采用了雙抗體夾心法的檢測模式.陽性尿樣是雙紅線,陰性尿樣是單紅線、人體絨毛膜促性腺激素(HCG)的含量是衡量懷孕與否的重要指標(biāo),懷孕婦女尿液中的HCG濃度比末懷孕婦女顯著增高.HCG抗體1預(yù)先被固定在試紙膜的特定部位上(就是檢測線出現(xiàn)的部位),金標(biāo)HCG抗體2被平鋪在尿樣展開時經(jīng)過的區(qū)域、當(dāng)陽性尿樣被加入時,尿樣中的HCG首先與膜上平鋪的金標(biāo)HCG抗體2結(jié)合,隨著尿樣的展開最終被固定在HCG抗體1的地方并顯色。當(dāng)陰性尿樣被加入后,由于沒有HCG與金標(biāo)抗體2結(jié)合,最終金標(biāo)抗體2不會在抗體1處被富集,所以檢測線不出現(xiàn)紅色[6]
艾滋病I/II型定性試劑盒也采用了膠體金標(biāo)記的方法,檢測的是人體血清中的艾滋病病毒(human immunodeficiency virus,HIV)特異性抗體。
便隱血膠體金試紙可以檢測糞便中微量人血紅蛋白,為早期胃腸道腫瘤發(fā)現(xiàn)和診斷提供了依據(jù)。目前便隱血膠體金試紙已被一些醫(yī)院臨床采用,并在健康人群體檢中運用.便隱血膠體金試紙檢驗法采用雙抗體的三明治夾心免疫檢驗法,特異性抗體是針對糞便樣品中的血紅蛋白(Hb).如果便樣中含有Hb,它就會和試劑中的金標(biāo)抗體組成抗原抗體復(fù)合物,再和反應(yīng)區(qū)中的另一種Hb抗體形成紫紅色的色帶,如果便樣中無Hb,反應(yīng)區(qū)中就不會有色帶出現(xiàn).
梅毒膠體金法試劑盒采用免疫膠體金技術(shù),通過硝酸纖維素膜上包被特異性梅毒基因重組抗原,檢測標(biāo)本中特異性的梅毒抗體,梅毒膠體金法具有較好的特異性和靈敏度,在用于供血者篩選時優(yōu)于TRUST法,且操作簡便,結(jié)果判斷清晰快速,但其必須使用血清或血漿,不適合街頭一次性流動采血[7]
此外還有其他的一些膠體金試劑盒,象“滴金法快速檢測幽門螺桿菌感染試劑盒”等,好多種用于細(xì)菌、病毒檢驗的膠體金試劑盒。
現(xiàn)有膠體金試劑盒很多,價格和質(zhì)量各異,適用性不同,應(yīng)遵循合理的原則加以選擇,以期最小的花費達(dá)到最佳的效果。
膠體金技術(shù)因其獨特的優(yōu)越性,現(xiàn)在應(yīng)用已越來越廣,但世上無十全十美之物,膠體金也有其缺點。
(1)、配體固定于膠體金主要依賴物理吸附作用,而并非各種生物學(xué)活性分子都可被吸附。因此膠體金適用性雖廣,但并非適用于各種物質(zhì)的測定。
(2)、配體與膠體金結(jié)合的機理至今尚不甚明了,因此制備試劑的操作、產(chǎn)品質(zhì)量等相當(dāng)程度上有賴于經(jīng)驗。
(3)、膠體金在制備和使用時對水質(zhì)及器具的清潔度要求甚高,各種污染可使試劑自凝或產(chǎn)生非特異的IGSS反應(yīng)。
(4)、膠體金先包以牛血清白蛋白等惰性蛋白質(zhì),經(jīng)活化后再與配體化學(xué)交聯(lián)結(jié)合,從而可結(jié)合不能被吸附的配體,并使之保持良好的定向和穩(wěn)定性,但操作麻煩,產(chǎn)品得率低。

 

 

 

 
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