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免疫金電鏡分析

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27
免疫金電鏡技術現(xiàn)已在免疫化學和組織化學研究中得到了廣泛應用、其所以能成為電鏡下較為理想的免疫標記物主要有如下優(yōu)勢:(1)膠體金顆粒在電鏡下具有很高的電子密度,大小顆粒清晰可辨,且不影響對原有超微結構的觀察.(2)通過計量被檢部分金顆粒,可以對被檢抗原或抗體進行免疫定量研究.(3)采用不同直徑的金標抗體進行免疫雙重或多重標記染色,能在一張電鏡圖片上同時顯示兩種或多種被檢測物質(zhì)的組織或細胞的超微結構.
常用的膠體金探針可以是金標記的第一抗體(McAb或PcAb)、第二抗體、SPA及生物素。根據(jù)需要,有時也應用植物血凝素和酶類. 金標技術在電鏡水平的應用,主要方法包括:包埋前染色、包埋后染色、免疫負染色、雙標記技術和原位雜交技術等。
實驗證明,該法樣本用量少、檢測速度快、對比明顯、操作簡便、敏感性和特異性高,既可用于抗原檢測,也可用于抗體檢測。因此,可同時適用于科研和診斷.
以下是一些近年來免疫金電鏡方面的研究進展:
(1)免疫不育研究的關鍵,是尋找與不育相關的精子抗原及其抗體.有人應用免疫金標記法對51KD精于膜抗原的抗體在精子上的定位進行了超微結構觀察,免疫電鏡染色采用包埋前染色法.電鏡觀察見精子的頭、頸、體及尾部結構清晰,細胞器豐富.經(jīng)含有抗51KD抗體(AsAb)陽性血清標記的精子,在其頂體、頂體后區(qū)、胞膜和胞漿部位均見有金顆粒存在;而不含抗51KD抗體(AsAb)陽性血清標記的精子,除精于頂體、胞膜和胞漿部位有金顆粒外,其余部位均未見金顆粒標記。電鏡觀察結果顯示,含抗51KD抗體的陽性血清作用于精子后,經(jīng)免疫金探針標記,精子頂體后區(qū)出現(xiàn)金顆粒,說明51KD精子抗原定位于頂體后區(qū),而頂體后區(qū)是精子十分重要的功能區(qū),該區(qū)域抗原很少,提示此抗體可能與不育關系密切.該研究應用免疫金標記法,進行了抗51KD抗體在精子的免疫電鏡定位,并獲得較為滿意的結果.為與男性不育相關的精子抗原及其抗體的研究提供了可行方法,對男性不育癥患者的診斷及治療提供了可靠依據(jù)。
(2)通過免疫電子顯微鏡可以觀察到,喹啉衍生物(QUIN)在人體細胞代謝中的重要作用.銀增強的膠體金方法結合電鏡用于免疫分析測定細胞中的QUIN可獲得很好的效果,金顆粒的數(shù)目代表了QUIN免疫活性.隨著QUIN濃度水平的提高,金顆粒的標記位置不變而數(shù)目相應的增加.
(3)Annexin VI是一種在老鼠肝臟細胞中對肝生理活動起重要作用的蛋白質(zhì),經(jīng)過雙重膠體金標記老鼠肝臟超薄切片上的抗annexin VI抗體可定量檢測annexin VI,標記效率是80%.這樣annexin VI成為第一個已知的參與肝細胞受體循環(huán)和轉運的結構蛋白質(zhì).
(4)通過膠體金免疫電鏡分析兔子十二指腸上皮細胞不同位置處的胃動素和血液中的復合胺表明,與復合胺反應的膠體金集中在分泌腺的顆粒上,而與胃動素反應的膠體金在顆粒外部,表明這兩種物質(zhì)不是處在同一位置.
(5)免疫金電鏡分析進行蛋白質(zhì)定位研究,例如青蛙卵母細胞核酸包膜中端粒結合蛋白質(zhì)的定位研究.
(6)BSP(Bone sialoprotein)和OPN(osteopontin)是膠原礦化組織中兩種主要的非膠狀蛋白質(zhì),可利用膠體金對細胞進行包埋處理,來跟蹤上述物質(zhì),來分析其在生命活動中的作用.
(7)膠體金標記、高分辨掃描電子顯微鏡研究皰疹病毒和被感染細胞表面的病毒單一糖蛋白,發(fā)現(xiàn)用非包層的方法來標記的觀察效果要優(yōu)于傳統(tǒng)的包層方法.
(8)膠體金不但可以測定血清中的免疫球蛋白,還可以測定鳥類蛋黃中的免疫球蛋白,已經(jīng)實驗過的抗原有乙肝表面抗原、馬鈴薯病毒和細菌多聚糖等.

 

 

 

 
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