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影響ELISA試驗(yàn)效果常見問題原因分析及解決辦法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27
ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
操作步驟
可能原因
解決辦法
選擇試劑
選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
加 樣
1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2.手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時);
3.加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
1.標(biāo)本為血清:最好將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2.加樣后及時放入孵箱。
3.加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4.如果采用AT或其他全自動加樣,最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5.標(biāo)本較多時,請分批操作。
孵 育
1.孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗徹底;
2.孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗徹底。
1.貼封片或加蓋;
2.按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
洗 板
1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2.采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不徹底;洗板針堵塞,抽吸不完全;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3.反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
1.保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后最好在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2.合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
顯 色
1. 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2. 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
1. 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用;
2. 加樣時保持顯色劑不外流;
3.A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
終 止
加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。
加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
讀 板
讀板時板底不清潔。
應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
全過程
1.整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸;
2.實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
 

 

 
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