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性別鑒定的方法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

生殖細(xì)胞的性別鑒定,可以藉由精子與著床前的胚來(lái)著手。精子的性別鑒定,可利用精子分離儀來(lái)篩選帶有Y或X染色體的精子。其原理是帶有X染色體的精子所含的去氧核糖核酸(DNA)較帶Y染色體的精子為多,利用能夠與精子頭部DNA結(jié)合的熒光染色劑處理后,藉由產(chǎn)生的熒光量高低差異而加以分離篩選。目前已應(yīng)用在體外受精系統(tǒng)中,雖然精子分離儀的分離效率每秒可達(dá)五千只精蟲(chóng)(每小時(shí)約一千八百萬(wàn)只),分離的準(zhǔn)確性亦達(dá)90%以上,然而其分離效率尚有極大的改進(jìn)空間,特別是在可提升分離速度的高速?lài)婎^方面的改良。在國(guó)外,目前精子的分離仍局限于研究測(cè)試及小規(guī)模的動(dòng)物試驗(yàn)階段,將來(lái)如果能改良精子分離儀的效能,進(jìn)而大幅降低分析成本,在畜產(chǎn)動(dòng)物領(lǐng)域?qū)O具應(yīng)用潛力。

著床前動(dòng)物胚的性別鑒定方法有數(shù)種,包括:染色體圖譜分析、存在于雄性動(dòng)物胚表面H-Y抗體的測(cè)定、X染色體酵素量的測(cè)定及利用Y染色體特異探針進(jìn)行雜交反應(yīng)等。這些方法在實(shí)際應(yīng)用時(shí),卻面臨了試驗(yàn)步驟繁瑣、準(zhǔn)確性及敏感度不足、需要特殊技術(shù)及儀器設(shè)備等因素而不易實(shí)際應(yīng)用。近年來(lái),因?yàn)榉肿由锛夹g(shù)的快速進(jìn)展,加上聚合酶連鎖反應(yīng)技術(shù)的發(fā)明,使原本極為微量的DNA樣品,能夠在數(shù)小時(shí)的反應(yīng)時(shí)間內(nèi)大量的克隆,因此只要應(yīng)用顯微操作技術(shù),抽取少許的胚葉細(xì)胞進(jìn)行聚合酶連鎖反應(yīng),即可快速準(zhǔn)確地分析出胚的性別,達(dá)到控制家畜后代性別的目的。

染色體圖譜分析──染色體圖譜分析是根據(jù)雄性動(dòng)物的性染色體是XY,雌性動(dòng)物的性染色體則是XX。采集部分的胚葉組織,經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后固定有絲分裂的細(xì)胞,進(jìn)行細(xì)胞核的染色體標(biāo)本制備,再根據(jù)呈現(xiàn)的XX、XY染色體組合來(lái)判定胚的性別。

H-Y抗體的測(cè)定──H-Y抗原是雄性哺乳動(dòng)物細(xì)胞膜所特有的蛋白質(zhì),雌性動(dòng)物的細(xì)胞膜上沒(méi)有這種抗原。檢測(cè)胚的細(xì)胞膜上是否存在H-Y抗原,即可鑒定胚的性別。利用這種免疫學(xué)方法進(jìn)行性別鑒定又可分為:

細(xì)胞毒性法──將胚培養(yǎng)于添加補(bǔ)體和H-Y抗體的培養(yǎng)液中,觀察胚能否存活。如果胚含有H-Y抗原,會(huì)產(chǎn)生免疫反應(yīng),使胚的發(fā)育受阻或發(fā)生溶解死亡,此即為雄性胚。如果不含有H-Y抗原,則胚可以持續(xù)發(fā)育,此即為雌性胚。此方法的缺點(diǎn)是雄性胚將受到破壞而致死,無(wú)法保留有價(jià)值的雄性胚。

間接免疫熒光法──由于上述細(xì)胞毒性法的缺點(diǎn),科學(xué)家研發(fā)使用熒光染色劑來(lái)標(biāo)定檢測(cè)的抗體。首先將包覆在胚外圍的透明帶去除,將胚葉細(xì)胞與H-Y抗體一起培養(yǎng),然后再與熒光染色劑標(biāo)記的第二抗體共同培養(yǎng),最后利用熒光顯微鏡檢查熒光的產(chǎn)生與否。會(huì)產(chǎn)生熒光的胚是雄性胚,反之則為雌性胚。本法的優(yōu)點(diǎn)是不會(huì)破壞雄性胚,也不會(huì)影響胚的存活。

X染色體酵素量的測(cè)定──X染色體酵素量的測(cè)定是雌性胚的性染色體組合為XX,較雄性胚多一個(gè)X染色體。因此測(cè)定在X染色體上特定酵素的含量差異,即可判定胚的性別。

部分的研究指出,哺乳動(dòng)物胚的發(fā)育速率具有性別的差異性。利用體外培育技術(shù)生產(chǎn)的試管牛胚,發(fā)現(xiàn)在胚發(fā)育早期階段雄性胚的發(fā)育速率比雌性胚快。而體外培育的小鼠胚也發(fā)現(xiàn)有相同的現(xiàn)象。為增加母牛排卵數(shù)目先以促進(jìn)卵巢排卵的激濾泡素荷爾蒙處理,進(jìn)行配種授精后第七天再將這些胚沖洗出來(lái),結(jié)果發(fā)現(xiàn)發(fā)育較快的胚中約有 70%是雄性胚,而發(fā)育最慢的胚中約有 70%是雌性胚。

Y染色體特異探針──在哺乳動(dòng)物已發(fā)現(xiàn)一些僅存在于Y染色體上的DNA序列,例如Sry基因,是睪丸決定因子。這些DNA序列可以做為胚性別鑒定時(shí)雜交反應(yīng)的探針。利用顯微操作技術(shù)抽取少許胚葉細(xì)胞,與經(jīng)過(guò)標(biāo)定的探針進(jìn)行雜交反應(yīng),最后由有無(wú)呈現(xiàn)雜交訊號(hào)來(lái)判定胚的性別。

 

 

 
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