★植物組織培養(yǎng)(Plant Tissue Culture):是指通過無菌操作分離植物體的一部分(外植體explant),接種到培養(yǎng)基上,在人工控制的條件下(包括營(yíng)養(yǎng)、激素、溫度、光照、濕度)進(jìn)行培養(yǎng),使其產(chǎn)生完整植株的過程。(主要有原生質(zhì)體(Protoplast),懸浮細(xì)胞,組織(愈傷組織Callus、莖尖分生組織),器官(胚,花藥,子房,根和莖)的培養(yǎng)。其中最常見的是愈傷組織培養(yǎng)。)
★愈傷組織(Callus):原指植物在受傷之后于傷口表面形成的一團(tuán)薄壁細(xì)胞,在組培中則指人工培養(yǎng)基上由外植體長(zhǎng)出來的一團(tuán)無序生長(zhǎng)的薄壁細(xì)胞。
★植物細(xì)胞全能性(Cellular totipotency):任何具有完整細(xì)胞核的植物細(xì)胞,都擁有形成一個(gè)完整植珠所必須的全部遺傳信息和發(fā)育成完整植株的能力。(Haberlandt, 1902)
★微(快)繁步驟(micropropagation):
母株(完整)→外植體(母株的一小部分,種子亦可)→接種到培養(yǎng)基上→長(zhǎng)芽(繼代增殖)→長(zhǎng)根(試管外生根亦可)→練苗,馴化→完整植株
★組培發(fā)展簡(jiǎn)史:細(xì)胞學(xué)說:Schleiden和Schwann。1.探索:20世紀(jì)初,Haberlandt提出“細(xì)胞全能性” (1902);1904年,Hanning培養(yǎng)蘿卜和辣根菜的胚成功;Laibach(1925,1929)亞麻種間雜種胚培養(yǎng)成功,證明胚培養(yǎng)在植物遠(yuǎn)緣雜交上可利用;1922年,Robiins(美)和Kotte(德)離體根尖培養(yǎng)成功。2.奠基:Gautheret,White和Nobecourt,組培奠基人。White和Gautheret發(fā)現(xiàn)了 B族維生素和生長(zhǎng)素;Skoog(1944)和Skoog和崔 (1951)等發(fā)現(xiàn)腺嘌呤和生長(zhǎng)素的比例控制芽和根的形成,Overbeek等(1941)首次將椰子汁(CM)作為添加劑,Steward等在胡蘿卜組培也使用CM;1952年,Morel和Martin首次證實(shí)通過莖尖離體培養(yǎng)可獲無病毒植株;1953-1954年,Muir單倍體培養(yǎng)獲得成功;1955年,Miller分離出激動(dòng)素(KT);1957年,Skoog和Miller提出植物激素控制器官形成的概念;1958年,Steward首次證實(shí)Haberlandt的細(xì)胞全能性設(shè)想;Wickson和Thimann指出CTK打破腋芽休眠;Murashige發(fā)展快繁技術(shù);1958-1959年,Reinert和Steward胡蘿卜愈傷組培中形成體細(xì)胞胚。3.迅速發(fā)展:1971年,Takebe首次由煙草原生質(zhì)體獲得再生植株;1972年,Carlson獲得煙草的第一個(gè)體細(xì)胞雜種;1964年,Guha和Maheshwari由毛曼佗羅離體花藥培養(yǎng)胚;1960年,Morel提出離體無性繁殖蘭花。……(具體see see書本或課件)
★組培意義:1、基礎(chǔ)理論研究(試驗(yàn)體系的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性,廣泛用于細(xì)胞、組織的代謝生理及其它生化等方面的研究(如分化問題))。2、應(yīng)用研究(無性繁殖系快速繁殖的生產(chǎn)、試管苗的商品化,遺傳育種,種質(zhì)保存,克服遠(yuǎn)緣雜交,種質(zhì)資源創(chuàng)新,獲得轉(zhuǎn)基因植株)。
★組培應(yīng)用前景:1、作物育種上的應(yīng)用(1、花藥和花粉培養(yǎng)2、胚胎培養(yǎng)3、細(xì)胞融合4、基因工程5、培養(yǎng)細(xì)胞突變體6、種質(zhì)保存)2、作物脫毒和快繁上的應(yīng)用(馬鈴薯,蘭花)3、在植物有用產(chǎn)物生產(chǎn)上的應(yīng)用4、在遺傳、生理、生化和病理研究上的應(yīng)用。
★植物激素調(diào)控:auxin/CTK >1(促進(jìn)生根) ;=1(愈傷組織) ;<1(促進(jìn)發(fā)芽)
★脫分化(dedifferentiation):在組織培養(yǎng)中,不分裂的靜止細(xì)胞,放在一定的培養(yǎng)基上后,細(xì)胞重新進(jìn)入分裂狀態(tài)。一個(gè)成熟的細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚鸂顟B(tài)的過程叫脫分化。
★再分化(redifferentiation):一個(gè)成熟的植物細(xì)胞經(jīng)歷了脫分化后,能再分化而形成完整植株的過程。
★再分化途徑:1、器官發(fā)生方式(是指在外植體或愈傷組織的不同部位分別獨(dú)立形成莖、芽和根,它們?yōu)閱螛O性結(jié)構(gòu),各有維管束與外植體或愈傷組織相連,但在不定芽和不定根之間沒有共同的維管束將兩者連在一起。)2、胚胎發(fā)生方式(外植體直接或通過愈傷組織或懸浮培養(yǎng)產(chǎn)生胚狀體。)
★胚狀體(embryoid):是指在組織培養(yǎng)中起源于一個(gè)非合子細(xì)胞,經(jīng)過胚胎發(fā)生和胚胎發(fā)育過程形成的具有雙極性的胚狀結(jié)構(gòu)。其特點(diǎn)有:1、不同于合子胚,因?yàn)樗皇莾尚约?xì)胞融合產(chǎn)生。2、不同于孤雌/雄胚,因?yàn)樗皇菬o融合生殖的產(chǎn)物。3、不同于器官發(fā)生方式形成的莖芽和根,因?yàn)樗?jīng)歷了與合子胚相似的發(fā)育過程且成熟的胚狀體是雙極性結(jié)構(gòu)。
★器官發(fā)生途徑:1、莖尖或莖段培養(yǎng)產(chǎn)生腋芽。2、直接不定芽發(fā)生:器官的小塊組織在培養(yǎng)基上培養(yǎng)直接誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽。3、間接不定芽發(fā)生:器官的小塊組織在培養(yǎng)基上培養(yǎng)后先去分化形成愈傷組織,再經(jīng)分化誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽或不定根。
★胚胎發(fā)生方式:1、直接胚胎發(fā)生(從培養(yǎng)物中的器官組織,細(xì)胞或原生質(zhì)體直接分化成胚,中間不經(jīng)過愈傷組織)2、間接胚胎發(fā)生(外植體先愈傷化,然后由愈傷組織細(xì)胞分化成熟)
球型胚(global embryo)→心型胚(heart-stage embryo)→魚雷型胚(torpedo-stage embryo)→子葉型胚(cytoledon-stage embryo)
★人工種子:是指利用細(xì)胞的全能性將離體培養(yǎng)所產(chǎn)生的體細(xì)胞或具有發(fā)育成完整植株能力的分生組織(胚狀體,莖和莖段)包裹在一層含有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)并具有保護(hù)功能的外膜內(nèi)形成在適宜條件下能夠發(fā)育成完整植株的小顆粒。
結(jié)構(gòu)包括人工種皮,胚狀體(分生組織),人工胚乳。
★植物組織培養(yǎng)應(yīng)用步驟:1、獲得無菌外植體,建立起無菌培養(yǎng)體系。2、進(jìn)行增殖,不斷產(chǎn)生不定芽或胚狀體。3、生根培養(yǎng)。4、試管苗移栽。
★外植體選擇的原則:1、必須含有活細(xì)胞。2、幼嫩組織所含活躍分裂的細(xì)胞比例高。3、母珠必須健康并且無任何腐爛或生病的跡象。4、母珠必須活躍生長(zhǎng)并且不會(huì)立即進(jìn)入休眠。
★外植體的確定選擇:1、莖尖(園藝植物組織培養(yǎng)中應(yīng)用最多,繁殖率高,不易發(fā)生遺傳變異,但取材有限);2、莖段(采用嫩莖的切段促進(jìn)腋芽萌發(fā),取材容易);3、葉(幼嫩葉片組織通過愈傷組織或不定芽分化產(chǎn)生植株,取材容易,操作方便,但易發(fā)生變異);4、花球和花蕾;5、種子、根、塊根、塊莖、花瓣等。
★消毒的原則:消毒劑與外植體應(yīng)接觸足夠長(zhǎng)的時(shí)間以除去外植體表面的微生物,但應(yīng)盡量減少對(duì)外植體細(xì)胞的破壞。
★消毒方法:沖洗植物材料除去泥土等大的顆粒→浸入70-75%乙醇,有利于植物表面的浸濕→用5-20%NaClO溶液(加1滴表面活性劑)表面消毒5-10min→用無菌水沖洗至少3遍→與消毒劑接觸過的切面在轉(zhuǎn)移到無菌培養(yǎng)基前應(yīng)切去,因?yàn)橄緞⿻?huì)殺死外露的細(xì)胞從而影響營(yíng)養(yǎng)吸收→切取外植體,通常為10mm的莖段和直徑10mm的葉片部分(太大激素作用減弱,太小則不易成活)。
★消毒注意事項(xiàng):1、表面消毒劑對(duì)植物組織是有害的,應(yīng)正確選擇消毒劑的濃度和處理時(shí)間,以減少組織的死亡。2、在表面消毒后,必須用無菌水漂洗材料3次以上以除去殘留殺菌劑,但若用酒精消毒,則不必漂洗。3、與消毒劑接觸過的切面在轉(zhuǎn)移到無菌基質(zhì)前需將其切除,因?yàn)橄緞⿻?huì)阻礙植物細(xì)胞對(duì)基質(zhì)中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。4、若外植體污染嚴(yán)重則應(yīng)先用流水漂洗1小時(shí)以上或先種子培養(yǎng)得到無菌種苗,然后用其各個(gè)部分建立組織培養(yǎng)。5、HgCl2效果最好,但對(duì)人的危害最大,用后要用水沖洗至少5次。
★莖尖培養(yǎng):切取莖的先端部分或莖的分生組織部分進(jìn)行無菌培養(yǎng)。
步驟:無菌培養(yǎng)的建立→芽的誘導(dǎo)→生根培養(yǎng)→試管苗的移栽(遺傳變異)
注意點(diǎn):試管苗移栽過程中,由異養(yǎng)→自養(yǎng),恒溫→溫差,無菌→有菌,光弱→光強(qiáng),濕度高→濕度低,應(yīng)該保持苗的水分平衡(加塑料薄膜和使用噴霧機(jī)),選擇適當(dāng)?shù)幕|(zhì),注意光、溫的條件。
★安祖花:葉片→誘導(dǎo)愈傷組織→誘導(dǎo)芽→誘導(dǎo)根 生根
↓ ↑
增殖→切根→芽的增殖→再培養(yǎng)→壯苗→生根之前
不定胚的誘導(dǎo):組織片→含有2,4-D的培養(yǎng)基上→產(chǎn)生不定胚→去除2,4-D的培養(yǎng)基上→球型胚→心型胚→魚雷型胚→植物體。
不定芽的誘導(dǎo):用BA誘導(dǎo),在球、心、魚雷時(shí)要去除BA。
★胚胎培養(yǎng)的意義:1、對(duì)于胚乳發(fā)育不良或胚與胚乳間不親和的材料進(jìn)行離體胚培養(yǎng),有助于遠(yuǎn)緣雜交獲得成功。2、為研究胚在各個(gè)發(fā)育時(shí)期的營(yíng)養(yǎng)需要提供了一個(gè)很好的機(jī)會(huì)。3、能對(duì)整個(gè)胚及其各部分的再生潛力進(jìn)行研究。
★胚培養(yǎng)中的兩個(gè)重要問題:1、胚剝離的方法:剝離的最佳時(shí)間是授粉后13-15天。2、培養(yǎng)基的成分:找到合適的培養(yǎng)基,在胚培養(yǎng)中加入蔗糖(能源、保持適當(dāng)滲透壓)。
★花藥培養(yǎng)方法:
取材地點(diǎn):大田和溫室
取材:大多采用單核期的花粉培養(yǎng),因誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織或胚狀體的頻率較高。
花粉時(shí)期的確定:常采用醋酸洋紅-碘化鉀染色,再壓片鏡檢。實(shí)際操作中常根據(jù)花蕾長(zhǎng)度、大小與花粉年齡的相關(guān)性確定。
預(yù)處理:低溫、高溫或交叉處理
培養(yǎng)基:有MS,Nitsch,Miller,B5和N6。低濃度的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素相結(jié)合,高濃度的蔗糖對(duì)花粉的誘導(dǎo)生長(zhǎng)有一定作用。培養(yǎng)基中加入活性炭對(duì)提高誘導(dǎo)頻率也有一定效果。
消毒、接種和培養(yǎng):花藥→在燒杯中研碎(有溶劑)→過濾→濃度梯度離心→收集中間層→離心
單倍體的鑒定和加倍處理:?jiǎn)伪扼w用2%秋水仙素處理24小時(shí),愈傷組織細(xì)胞自然加倍。
★花粉花藥培養(yǎng)的意義:1、在單倍體細(xì)胞中只有一個(gè)染色體組,表現(xiàn)型和基因型一致,一旦發(fā)生突變,無論是顯性還是隱性,在當(dāng)代就可表現(xiàn)出來,因此單倍體是體細(xì)胞遺傳研究和突變育種的理想材料。2、在品種間雜交育種過程中,通過F1代花藥培養(yǎng)得到單倍體后,經(jīng)染色體加倍立即成為純合二倍體,從雜交到獲得不分離的雜種后代單株只需要2個(gè)世代和常規(guī)育種相比,顯著縮短了育種年限。
★花藥培養(yǎng)步驟(用改良的NLN培養(yǎng)基):
F1代花藥→形成小孢子→分離小孢子→形成愈傷組織→形成胚→單倍體植株→純合二倍體
↓
形成胚→單倍體植株→染色體加倍形成純合二倍體
★原生質(zhì)分離:酶(纖維素酶,離析酶)
步驟:葉片表面消毒→去除表皮→葉碎片漂浮在含有酶和滲透壓穩(wěn)定劑的溶液中→培育→原生質(zhì)體沉到培養(yǎng)皿底部→除去酶溶液→將原生質(zhì)體移入CPW清洗→離心→清洗基質(zhì)兩次→重懸浮于培養(yǎng)基→除去小的個(gè)體,用血球計(jì)計(jì)數(shù)→調(diào)整到合適的密度重懸浮于培養(yǎng)基。
★原生質(zhì)體的培養(yǎng):
培養(yǎng)基:MS+NAA 2.0ppm+BA 0.5ppm+3%蔗糖+9%甘露醇
注意:1、原生質(zhì)體分離后,非常脆弱,需要滲透壓保護(hù)劑的保護(hù)直到細(xì)胞壁形成。
2、針對(duì)不同的研究對(duì)象,培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的水平要做適當(dāng)調(diào)整。
影響原生質(zhì)體培養(yǎng)的因素:營(yíng)養(yǎng)需求(NH4+不能過多),滲壓劑,培養(yǎng)密度(105/mL),
貯藏條件(通常在黑暗處)。
培養(yǎng)方法:液體基質(zhì)培養(yǎng)法,半液體基質(zhì)培養(yǎng)法,固體基質(zhì)培養(yǎng)法,看護(hù)培養(yǎng)。
固體培養(yǎng)的步驟:原生質(zhì)體移入培養(yǎng)基→1體積含原生質(zhì)體的培養(yǎng)基與1體積含瓊脂糖(40℃)的培養(yǎng)基混和→倒轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿在25℃下培養(yǎng)→原生質(zhì)體重新產(chǎn)生細(xì)胞壁并分裂成細(xì)
胞團(tuán)→細(xì)胞團(tuán)于瓊脂糖基質(zhì)中傳代培養(yǎng),培養(yǎng)基中應(yīng)減少滲壓劑以利于愈傷組織的形成→誘導(dǎo)分化成植物的根,莖。
★原生質(zhì)體分離培養(yǎng)的意義:1、除去了細(xì)胞壁為植物細(xì)胞之間的融合掃平了障礙,同時(shí)葉為制造新雜種開辟了道路。2、原生質(zhì)體可攝入外源DNA,細(xì)胞器、細(xì)菌或病毒顆粒,這些特性與植物全能性相結(jié)合為高等植物的遺傳飾變打下基礎(chǔ)。3、獲得細(xì)胞無性系和選育突變體的優(yōu)良起始材料。
★原生質(zhì)的融合概念:從同一個(gè)種或不同種分離得到的原生質(zhì)體在適當(dāng)?shù)臈l件下融合得到細(xì)胞核物質(zhì)和細(xì)胞質(zhì)物質(zhì)的混和。
★體細(xì)胞雜交:完全不經(jīng)過有性過程,只通過體細(xì)胞融合制造雜種的方法稱為體細(xì)胞雜交。
★原生質(zhì)體融合方法:自發(fā)融合,誘發(fā)融合(NaNO3處理,高PH-高濃度鈣離子處理,PEG處理,電融合)
PEG法:
取材(1、從綠色葉片上分離得到的原生質(zhì)體。2、來源于同種或不同種的細(xì)胞懸浮培養(yǎng)物上分離出的無色原生質(zhì)體)-這樣異核體和母體就可分辨開。
→分別取在含有13%甘露醇的CPW上懸浮培養(yǎng)的原生質(zhì)體(密度2×105)4mL,混和在100g的轉(zhuǎn)速下離心10min,將原生質(zhì)體放入0.5%基質(zhì)→加入30%(w/v)PEG 2mL,使原生質(zhì)體的外膜不穩(wěn)定,放置10min→每隔5min加入原生質(zhì)體培養(yǎng)基稀釋PEG以促進(jìn)原生質(zhì)體融合。每次稀釋后輕微搖動(dòng)原生質(zhì)體就會(huì)重懸浮→混和物在100g下離心10min,離心后在不含PEG的培養(yǎng)基中清洗→離心,在相同的培養(yǎng)基上重懸浮。
PEG法的缺點(diǎn):有毒,融合率低:不超過1%
對(duì)稱融合:父母均未處理,對(duì)后代貢獻(xiàn)一樣。
不對(duì)稱融合:父母本在后代中貢獻(xiàn)不同,射線處理,化學(xué)處理
IOA(不影響核的分裂而影響細(xì)胞質(zhì)分裂)
★胞質(zhì)雜種:利用原生質(zhì)體融合技術(shù),使兩種不同來源的核外遺傳成分(細(xì)胞器)與一個(gè)特定的核基因組結(jié)合在一起,就形成胞質(zhì)雜種。
體細(xì)胞雜種和胞質(zhì)雜種的鑒定方法:形態(tài)學(xué),細(xì)胞學(xué),分子遺傳學(xué)。
★園藝植物脫毒:
熱處理脫毒:
原理:在高于正常溫度下,植物組織中的很多病毒可被部分或完全鈍化,而很
少傷害甚至不傷害寄主組織。
方法:熱水處理(對(duì)休眠芽效果好),熱空氣處理(對(duì)活躍生長(zhǎng)的莖尖效果好)
熱空氣處理方法:空氣溫度35-40℃,持續(xù)時(shí)間:隨處理對(duì)象不同而變化,幾分鐘-幾星期。
注意點(diǎn):不能一下子放入高溫中,要逐步加溫使之適應(yīng)。并保持濕度和光照。
局限性:1、并不是所有的病毒都對(duì)熱處理敏感
2、對(duì)等徑和線狀的病毒及類菌質(zhì)體引起的病害是有效的。
3、熱處理后只有一小部分植株能夠存活
★莖尖分生組織:指莖的最幼齡葉原基上方的一部分,最大直徑約100μm,最大長(zhǎng)度為
250μm。
★莖尖:由頂端分生組織及其下方的1-3個(gè)葉原基一起構(gòu)成的。
★莖尖培養(yǎng)脫毒:
原理:病毒在植物體內(nèi)的分布是不均勻的,在受感染的植物中頂端分生組織通常不含或僅含低濃度的病毒,其它的植物組織離莖尖的距離越遠(yuǎn)則病毒含量越高。
影響莖尖培養(yǎng)脫毒效果的因素:培養(yǎng)基,外植體大。摱拘Ч庵搀w大小呈負(fù)相關(guān),莖尖的成活率與莖尖大小呈正相關(guān)),貯存條件(光照培養(yǎng)優(yōu)于暗培養(yǎng)),外植體的生理狀態(tài)(活躍生長(zhǎng)的芽,頂芽的效果比腋芽好,切割芽的時(shí)間)
★通過愈傷組織培養(yǎng)脫毒:
原理:在由受感染的組織形成的愈傷組織中,并非所有的細(xì)胞都均勻一致地帶有該種病原體。
產(chǎn)生原因:1、病毒的復(fù)制速度跟不上細(xì)胞的增殖速度
2、有些細(xì)胞通過突變獲得了抗病毒的特征。
★脫毒植物的鑒定:外觀判斷法,指示植物法(接種鑒定法),抗血清鑒定法,電鏡檢查法,
分光光度法,酶聯(lián)血清免疫吸附反應(yīng)鑒定法。
指示植物法:利用病毒在其它植物上產(chǎn)生的枯斑作為鑒別病毒的標(biāo)準(zhǔn)。
指示植物:專門選用以產(chǎn)生局部病斑的寄主稱為指示植物。
★無毒原種的保存:種在溫室或防蟲罩內(nèi)滅過菌的土壤中,隔離區(qū)內(nèi),通過組織培養(yǎng)繁殖。
組培常見英漢對(duì)照
abortion(敗育)adenine(腺嘌呤)agar (瓊脂)anther(花粉)apical(頂端的)aseptic(無菌的) auxin(生長(zhǎng)素)axillary bud (腋芽)callus,calli(愈傷組織)cellular totipotency(細(xì)胞全能性) cellulase(纖維素酶)cellulose(纖維素)centrifuge(離心)chloroplast(葉綠體) chromosome doubling(染色體加倍)colony(細(xì)胞團(tuán),菌落)cybrid(cytoplasmic hybrid,胞質(zhì)雜種) cytokinin(細(xì)胞分裂素) cytoplasm(細(xì)胞質(zhì))degeneration (敗育)dedifferentiation (脫分化)redifferentiation(再分化)dicotyledonous(雙子葉的)dihaploid(二單倍體)diploid(二倍體)dissect(剝離)dormancy(休眠)eliminate (除去) embryo(胚胎)embryoid(胚狀體)embryogenesis(胚胎發(fā)生方式)epidermis(表皮,上表皮)excise(切除)explant (外植體)filter paper(濾紙) gelose(瓊脂糖)genetype(基因型)germplasm(種質(zhì)) global embryo (球型胚) haploid(單倍體)heterokaryon(異核體)homozygous(純合的)hormone (激素)interspecific(種間的)intraspecific(種內(nèi)的)in vitro(體外)in vivo(活體)kinetin(激動(dòng)素)macerozyme(離析酶)male sterile(雄性不育)medium(培養(yǎng)基)membrane(膜)meristem(分生組織)meristem culture(莖尖培養(yǎng))micropropagation(微繁)microspore(小孢子)monocotyledon/moncots(單子葉植物) nod culture (莖段培養(yǎng))organelle(細(xì)胞器)organgenesis(器官發(fā)生方式)osmotic(滲透的)pith(髓)plantlet(小植株,苗)pollen culture(花粉培養(yǎng))pollinate(授粉)protocorm(PLB)原球莖protoplast fusion(原生質(zhì)體融合)rapid propagation(快繁)regeneration(再生)self-incompatibility (自交不親和) shoot tip(莖尖) sodium hypochlorite(NaClO)somatic embryo(體細(xì)胞胚)somatic hybridization(體細(xì)胞雜交)somatic hybrid(體細(xì)胞雜種)stem(莖)stem tip culture(莖尖培養(yǎng))sterilant(消毒劑)sterile distilled water(蒸餾水)sterilization(消毒)stock plant (母株)subculture (繼代) sucrose(蔗糖) terminal bud(頂芽)transfer (轉(zhuǎn)移)virus eradication(脫毒)
常用縮略語(yǔ)
ABA(脫落酸) CM(椰子汁) CPW(細(xì)胞-原生質(zhì)體清洗液)
DMSO(二甲基亞砜) IAA(吲哚乙酸) IBA(吲哚丁酸)
KT(激動(dòng)素) NAA(萘乙酸) PEG(聚乙二醇)
LH(液氮) CH(水解酪蛋白) GA3(赤霉素)