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植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)功能成分

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08
從低等的藻類(lèi)到苔蘚、蕨類(lèi)、種子植物等高等植物的各類(lèi)、各部分都可采用作為組織培養(yǎng)的材料,一般裸子植物多采用幼苗、芽、韌皮部細(xì)胞,被子植物采用胚、胚乳、子葉、幼苗、莖尖、根、莖、葉、花藥、花粉、子房和胚珠等各個(gè)部分。
  由于植物在自然條件下,表面常被霉菌和細(xì)菌污染,故材料必須進(jìn)行滅菌處理。一般用漂白粉溶液(1~10%)、次氯酸鈉溶液(0.5~10%)、升汞溶液(0.01%)、乙醇(70%)或過(guò)氧化氫(3~10%)等處理后,再用無(wú)菌水反復(fù)沖洗至凈,然后在無(wú)菌室內(nèi),將所取的組織迅速培養(yǎng)在固體培養(yǎng)基上。在適宜的條件下,受傷組織切口表面不久即能長(zhǎng)出一種脫分化的組織堆塊,稱(chēng)為愈傷組織(Callus),此種愈傷組織在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上經(jīng)一定時(shí)間即能誘導(dǎo)生長(zhǎng)成整株植物,因此愈傷組織既可是某種植物代謝產(chǎn)物的來(lái)源,又是誘導(dǎo)成株的主要途徑之一。
  在適宜的培養(yǎng)條件下,還可使愈傷組織長(zhǎng)期傳代生存下去,這種培養(yǎng)稱(chēng)為繼代培養(yǎng)。但在繼代培養(yǎng)中,不少植物培養(yǎng)的組織或細(xì)胞隨著再培養(yǎng)代數(shù)的增加,分化能力就逐漸降低甚至喪失,其原因可能是由于在培養(yǎng)過(guò)程中原有母體中存在的、與器官形成有關(guān)的特殊物質(zhì)被逐漸消耗所致,因此可以用激素或改善營(yíng)養(yǎng)條件使之恢復(fù),也有認(rèn)為是組織和細(xì)胞在長(zhǎng)期培養(yǎng)中遺傳往的改變,主要是染色體的變化,出現(xiàn)大量多倍性或非整倍性細(xì)胞,這種改變恢復(fù)的可能住較小。不同的培養(yǎng)基可以使愈傷組織具有不同的生長(zhǎng)速度,結(jié)構(gòu)也可松可緊,利用這些特性可使之分散成為單細(xì)胞或很小的細(xì)胞團(tuán)。要形成單細(xì)胞培養(yǎng)宜在較高鹽分、高生長(zhǎng)素及高水解酪蛋白的培養(yǎng)基中進(jìn)行,然后移入液體并經(jīng)攪拌而分散成單細(xì)胞。也有用加入一些果膠酶的辦法,但一般來(lái)說(shuō)要得到純一的單細(xì)胞是很少的。
  在培養(yǎng)藥用植物選材時(shí),還應(yīng)考慮到所需要的次生物質(zhì)在植物體中的合成部位,如果選材和培養(yǎng)方法適當(dāng),可使原植物內(nèi)所產(chǎn)主的代謝物通過(guò)細(xì)胞或組織培養(yǎng)發(fā)生生化轉(zhuǎn)變而獲得。
  通過(guò)組織培養(yǎng)可獲得有效成分,但實(shí)際上只有大量培養(yǎng)成功才有經(jīng)濟(jì)價(jià)值。因此在生產(chǎn)上常采用懸浮培養(yǎng)法來(lái)代替含有瓊脂的固體培養(yǎng)基。愈傷組織懸浮培養(yǎng)的生長(zhǎng)通常比靜止培養(yǎng)快,這是由于懸浮培養(yǎng)時(shí)營(yíng)養(yǎng)成分可較快地滲入細(xì)胞,抑制生長(zhǎng)的代謝廢物可較快地除去,同時(shí)供氧情況也較好,在進(jìn)行這種培養(yǎng)時(shí)要注意通氣與定期更新?tīng)I(yíng)養(yǎng)液,這是保證生長(zhǎng)穩(wěn)定,次生物質(zhì)產(chǎn)量高的關(guān)鍵之一。
利用組織培養(yǎng)方法產(chǎn)生藥用成分,已漸漸成為藥物生產(chǎn)的新方向之一。六十年代以來(lái),有些國(guó)家已經(jīng)開(kāi)展了薯蕷及其他有關(guān)科屬植物的組織培養(yǎng),研究薯蕷皂甙元的形成,探討其生物合成機(jī)制;已知有7種薯蕷屬植物經(jīng)組織培養(yǎng)后,可獲得薯蕷皂甙元或其它甾體化合物,其中三角葉薯蕷Dioscorea deltoides Wal1。經(jīng)組織培養(yǎng)得到薯蕷皂甙元的含量為0.3~2.5%,此外尚有魚(yú)藤酮、甘草甜素,菸堿等,例如從煙草根尖細(xì)胞懸浮培養(yǎng)可產(chǎn)生2.9%(干重)菸堿。
  在通常應(yīng)用的基本培養(yǎng)基中適當(dāng)添加生長(zhǎng)激素、維生素或其他化學(xué)藥品有時(shí)能使代謝物增加,如白花曼陀羅組織培養(yǎng)時(shí),在培養(yǎng)基中加進(jìn)0.1%酪氨酸可使阿托品的產(chǎn)量增加7倍多,蕓香組織培養(yǎng)時(shí)在培養(yǎng)基中添加4一羥基-2喹啉酚,可促進(jìn)白蘚堿的合成和積累,在這兩例中的添加物被認(rèn)為是生物合成的前體。又如培養(yǎng)三分三愈傷組織時(shí),在生長(zhǎng)后期供給1my/1激動(dòng)素,可使東莨菪堿的含量達(dá)到0.495%,比原植物中的含量提高很多。
  除了培養(yǎng)基的組成外,環(huán)境因素也影響次生物質(zhì)的產(chǎn)生。例如石芹的組織培養(yǎng)在黑暗中雖也增殖,但不形成黃酮類(lèi),而當(dāng)暴露于光線(xiàn)中時(shí),就能測(cè)出芹菜甙。組織培養(yǎng)應(yīng)用在藥學(xué)方面的工作雖然歷史不長(zhǎng),但發(fā)展很迅速,它具有如下一些優(yōu)點(diǎn):
  1.利用組織培養(yǎng)代替原植物的栽培以獲得所需的有效成分,達(dá)到產(chǎn)量高,成本低的目的,還可節(jié)約土地。
  2.除了應(yīng)用于產(chǎn)生次生物質(zhì)外,還可應(yīng)用于生物轉(zhuǎn)化。例如煙草組織培養(yǎng)中蒂巴因去甲基后可能生成嗎啡。
  3.從組織培養(yǎng)的定性分析中發(fā)現(xiàn)新化合物。例如在蕓香組織培養(yǎng)中,合成和積累了蕓香素(Rutacultin),它是一個(gè)至今尚未能從原植物或其他植物的呋喃香豆精中檢測(cè)到的化合物。因而,組織培養(yǎng)將是獲得新的生物活性化合物的一個(gè)來(lái)源。
  4.一般情況下,組織培養(yǎng)是異養(yǎng)的,但也有自養(yǎng)的細(xì)胞系株,它們具有光合作用的能力而不依賴(lài)外界的糖類(lèi)供應(yīng)。這種特性將使細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)優(yōu)越于全植物,并更為經(jīng)濟(jì)。
 

 

 
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