一、原理
非顯帶染色體除可根據(jù)形態(tài)分辨部分染色體,其他多數(shù)染色體難以確認,而顯帶技術則可使染色體縱向長度上出現(xiàn)不同帶紋,以辨認全部染色體。GTG即G帶,Trypsin(胰酶),Giemsa的簡寫。Giemsa染料是噻嗪--曙紅染料,染色體的著色有賴于在原位形成噻嗪--曙紅(2∶1)的沉淀物。著色首先取決于二個噻嗪分子同DNA結合,在此基礎上再結合一個曙紅分子,其次取決于一個疏水環(huán)境,以利于染料沉淀而著色。通過胰酶的顯帶預處理可除去陰性G帶區(qū)的疏水蛋白,或使它們的結構變成更疏水狀態(tài)。由此可知,在G顯帶中抽取的蛋白往往是疏水的,且主要來自陰性G帶區(qū)。
二、用品和試劑
0.25%胰酶(0.85%NaCl配制,pH為7.2—7.4),余同實驗一。
三、操作步驟
1.標本老化:
按常規(guī)制備人外周血淋巴細胞染色體標本(未染色)氣干后,經(jīng)78℃烘箱2—3小時。 取出置37℃恒溫箱3天后預處理。
2.胰酶預處理:
將染色體標本浸入胰酶溶液(已置4℃冰箱穩(wěn)1小時以上)中40—50秒,取出立即水洗去多余胰酶。
3.Giemsa染色:
1∶10 Giemsa染色液染色5—10分鐘,洗去多余染料,氣干。
4.鏡檢:油鏡下可見分散良好的染色體縱軸上呈現(xiàn)深淺不同帶紋,即為可讀標本。
四、注意事項
1.常規(guī)制備的染色體標本,要有較多分裂相,分散良好,染色體長度適中。
2.GTG帶的關鍵在于胰酶處理的時間。若染色體仍著色較深,帶紋不明,則預處理時間不足,應延長預處理時間;若染色體變粗并顯出毛糙邊緣,甚至呈糊狀,則為預處理過度,應適當縮短處理時間。
3.Giemsa染色時間要適中,時間短,著色不夠,深淺帶反差;時間過長,著色深,亦影響帶紋反差,不易識別。