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染色體CBG標本制備

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08
一、原理
異染色質(zhì)在整個分裂間期及分裂期都是濃縮的,因而其大小較為恒定。它們通常位于著絲粒附近,或在染色體臂上呈現(xiàn)“團塊”,這些染色質(zhì)主要由C顯帶技術呈現(xiàn),故稱為C帶。CBG即C帶、Ba(OH)2、Giemsa的簡寫。C帶的根本特征是選擇性地從染色體臂抽取DNA,但在C帶區(qū)有很強抗性,仍保留大部分DNA,Giemsa染色后可見效果良好的C帶。抽取DNA的過程由三個連續(xù)操作形成。首先,酸處理可使DNA脫嘌呤,但未使DNA骨架斷裂;其次熱堿處理可使DNA變性,促進繼發(fā)的DNA溶解;最后,熱鹽溶液使DNA骨架斷開并使碎片溶解進入溶液中。因此,最終以Giemsa染料顯示出DNA的不同分布。在優(yōu)良的C帶標本中,常染色質(zhì)只呈現(xiàn)中期染色體的一般外貌,結構異染色質(zhì)區(qū)著色很深。
C帶在檢查1、9、16特別是Y染色體的異質(zhì)區(qū)時尤為重要。
二、用品和試劑
0.2N HCl,5% Ba(OH)2,2×SSC,Giemsa染色液。恒溫水浴箱,染色缸。其余同外周血染色體制備。
三、操作步驟
(一)方法一
l.酸處理:常規(guī)制作的染色體標本(未染色)置0.2N HCl(室溫)處理15—30分鐘。水洗。
2.堿處理:浸入已預溫至56℃的5% Ba(OH)2水溶液10分鐘。水洗。
3.熱鹽處理:置2×SSC溶液(67℃)處理60—90分鐘。水洗。
4.染色:l∶10 Giemsa染色液染色10—5分鐘。水洗。氣干。
5.鏡檢。
(二)方法二
l.酸處理:常規(guī)制作的染色體標本(未染色)置0.2N HCl(室溫)處理60分鐘。水洗。
2.堿處理:浸入1% Ba(OH)2水溶液(50℃)中15—20秒。水洗。
3.熱鹽處理:置2×SSC溶液(60℃)90分鐘。水洗三次。
4.染色:l∶10 Giemsa染色液染色10分鐘。水洗。氣干。
5.鏡檢。
 

 

 
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