方法一
1.收集細(xì)胞(1~5)×106個,500~1000r/min離心5min,棄去培養(yǎng)液。
2.3ml PBS洗一次。
3.離心去PBS,加入冰預(yù)冷的70%的乙醇固定,4℃,1h。
4.離心棄去固定液,3ml PBS重懸5min。
5.400目的篩網(wǎng)過濾1次,500~1000r/min離心5min,棄去PBS。
6.用1ml PI染液,4℃避光30min。
7.流式細(xì)胞儀檢測:PI用氬離子激發(fā)熒光,激發(fā)光波波長為488nm,發(fā)射光波波長大于630nm,產(chǎn)生紅色熒光,可分析前散射光對側(cè)散射光的散點圖及PI熒光的直方圖。
方法二
1.收集細(xì)胞(1×106個),500~1000r/min離心5min,棄去培養(yǎng)液。
2.1ml PBS/FCS洗一次。
3.500~1000r/min離心5min去PBS/FCS,加入500μl PBS/FCS和500μl的多聚甲醛固定液,輕輕混勻,在4℃下固定4min。
4.500~1000r/min離心5min棄去固定液,室溫加入含0.2% Tween的PBS 1ml,37℃孵育15min。
5.1ml PBS/FCS洗3次,每次5min。
6.400目的篩網(wǎng)過濾1次。
7.500~1000r/min離心5min去PBS/FCS,用1.0ml PI染液,4℃避光至少30min。染色在24h之內(nèi)皆可行,流式細(xì)胞儀分析。