各種已被命名和經(jīng)過(guò)細(xì)胞生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系或細(xì)胞株，都是一些形態(tài)比較均一、生長(zhǎng)增殖比較穩(wěn)定的和生物性狀清楚的細(xì)胞群。因此凡符合上述情況的細(xì)胞群也可給以相應(yīng)的名稱，即文獻(xiàn)中常稱之為已鑒定的細(xì)胞（Certified Cells）。已鑒定的細(xì)胞可用于各種實(shí)驗(yàn)研究和生產(chǎn)生物制品。當(dāng)前世界上已建的各種細(xì)胞系（株）已難勝數(shù)，我國(guó)也建有百種以上，并在不斷增長(zhǎng)中。
一、體外培養(yǎng)細(xì)胞的種類和命名
體外培養(yǎng)細(xì)胞的名稱，隨培養(yǎng)細(xì)胞技術(shù)的發(fā)展和細(xì)胞種類的增多而演變。最早采用的名稱為細(xì)胞株（Cell strain），以后又出現(xiàn)細(xì)胞系（Cell Line）一詞，兩者曾一度混用致概念不明確，導(dǎo)致文獻(xiàn)中也很混亂。我國(guó)也曾有類似情況，在我國(guó)尚未制定出統(tǒng)一名詞前，本書用的名詞基本參考Schaeffer，W.I.（1979）和國(guó)內(nèi)有關(guān)會(huì)議、以及國(guó)內(nèi)外雜志常用名詞為準(zhǔn)。
（一）初代培養(yǎng)
初代培養(yǎng)又稱原代培養(yǎng)，即直接從體內(nèi)取出的細(xì)胞、組織和器官進(jìn)行的第一次的培養(yǎng)物。一旦已進(jìn)行傳代培養(yǎng)（Subculture）的細(xì)胞，便不再稱為初代培養(yǎng)，而改稱為細(xì)胞系。
（二）細(xì)胞系
初代培養(yǎng)物開始第一次傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞，即稱之為細(xì)胞系。如細(xì)胞系的生存期有限，則稱之為有限細(xì)胞系（Finite Cell Line）；已獲無(wú)限繁殖能力能持續(xù)生存的細(xì)胞系，稱連續(xù)細(xì)胞系或無(wú)限細(xì)胞系（Infinite Cell Line）。無(wú)限細(xì)胞系大多已發(fā)生異倍化，具異倍體核型，有的可能已成為惡性細(xì)胞，因此本質(zhì)上已是發(fā)生轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系。無(wú)限細(xì)胞系有的只有永生性（或不死性），但仍保留接觸抑制和無(wú)異體接種致癌性；有的不僅有永生性，異體接種也有致瘤性，說(shuō)明已惡性化。這兩種不同性質(zhì)的無(wú)限細(xì)胞系，在國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中對(duì)這些名詞的應(yīng)用上也常不十分嚴(yán)格。為概念上的明確，對(duì)有惡性的無(wú)限細(xì)胞系采用“惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞系”一詞表示可能更妥。而對(duì)那些只具永生性而無(wú)惡性的細(xì)胞系，則用無(wú)限細(xì)胞系或轉(zhuǎn)化細(xì)胞系即可。當(dāng)前流傳的NIH3T3、Rat-1、10T1/2等均屬這類細(xì)胞系。
由某一細(xì)胞系分離出來(lái)的、在性狀上與原細(xì)胞系不同的細(xì)胞系，稱該細(xì)胞系的亞系（Subline）。
（三）克隆細(xì)胞株
從一個(gè)經(jīng)過(guò)生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群，稱細(xì)胞株。再由原細(xì)胞株進(jìn)一步分離培養(yǎng)出與原株性狀不同的細(xì)胞群，亦可稱之為亞株（Substrain）
（四）二倍體細(xì)胞
細(xì)胞群染色體數(shù)目具有與原供體二倍細(xì)胞染色體數(shù)相同或基本相同（2n細(xì)胞占75％或80％以上）的細(xì)胞群，稱二倍體細(xì)胞培養(yǎng)。如僅數(shù)目相同，而核型不同的即染色體形態(tài)有改變者為假二倍體。二倍體細(xì)胞在正常情況下具有限生命期，故屬有限細(xì)胞系。但隨供體年齡和組織細(xì)胞的不同，二倍體細(xì)胞的壽命長(zhǎng)短各異。人胚肺成纖維細(xì)胞可傳50代土10代，人胚腎只有8～10代，人胚神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞15～30代；如從老齡個(gè)體取可傳50則細(xì)胞生存期更短。由不同年齡供體取材建立的二倍體細(xì)胞系可供研究衰老之用。為保持二倍體細(xì)胞能長(zhǎng)期被利用，一般在初代或2～5代即大量?jī)龃孀鳛樵�種（Stook Cells），用時(shí)再進(jìn)行繁殖，用后再繼續(xù)凍存，可供長(zhǎng)期使用或延緩細(xì)胞的衰老。
（五）遺傳缺陷細(xì)胞
從有先天遺傳缺陷者取材（主要為成纖維細(xì)胞）培養(yǎng)的細(xì)胞，或用人工方法誘發(fā)突變的細(xì)胞，都屬遺傳缺欠細(xì)胞。這類細(xì)胞可能具有二倍體核型，也可呈異倍體。
（六）腫瘤細(xì)胞系或株
這是現(xiàn)有細(xì)胞系中最多的一類，我國(guó)已建細(xì)胞系主要為這類細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞系多由癌瘤建成，多呈類上皮型細(xì)胞，常已傳幾十代或百代以上，并具有不死性和異體接種致瘤性。
對(duì)已建成的各種細(xì)胞系或細(xì)胞株習(xí)慣上都給以名稱；細(xì)胞的命名無(wú)嚴(yán)格統(tǒng)一規(guī)定，大多采用有一定意義縮寫字或代號(hào)表示。但不論什么形式，均不宜太長(zhǎng)，以便記憶和了解，今別舉以下幾種代表性的細(xì)胞名稱供參考：
HeLa：為供體患者的姓名（來(lái)源于宮頸癌）
CHO：中國(guó)地鼠卵巢細(xì)胞（Chinese Hamster Ovary）
宮-743：宮頸癌上皮細(xì)胞，1974年3月建立
NIH3T3：美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究所（National Institute of Health）建立；每3天傳代，每次接種3×105細(xì)胞／毫升。
二、建立細(xì)胞系（或株）的要求
關(guān)于什么樣的體外培養(yǎng)細(xì)胞群，可被確認(rèn)為是已被鑒定的細(xì)胞（Certified Cells），國(guó)際上也尚無(wú)統(tǒng)一的規(guī)定，一般依具體情況而定。在只用作初代培養(yǎng)細(xì)胞，只要供體性別、年齡等均一，取材部位及組織種類等條件穩(wěn)定，做鑒定的項(xiàng)目無(wú)需很多，有幾項(xiàng)能說(shuō)明細(xì)胞的相關(guān)性狀的即可。如能長(zhǎng)期保存并可供其它研究室使用，特別是做反復(fù)傳代的細(xì)胞，習(xí)慣上有以下一些要求，并在刊物上報(bào)道時(shí)應(yīng)加以說(shuō)明。
（－）組織來(lái)源
應(yīng)說(shuō)明細(xì)胞供體所屬物種，來(lái)自人體，動(dòng)物或其它；供體的年齡、性別、取材的器官或組織；如系腫瘤組織，應(yīng)說(shuō)明臨床病理診斷，組織來(lái)源，以及病例號(hào)等。
（二）細(xì)胞生物學(xué)檢測(cè)
應(yīng)了解細(xì)胞一般和特殊的生物學(xué)性狀，如細(xì)胞的一般形態(tài)、特異結(jié)構(gòu)、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線和分裂指數(shù)、倍增時(shí)間、接種率；特異性，如為腺細(xì)胞有否特殊產(chǎn)物包括分泌蛋白或激素等；如為腫瘤細(xì)胞，應(yīng)力求證明細(xì)胞確系來(lái)源于原腫瘤組織而非其它，并仍保持性性，為此需做軟瓊脂培養(yǎng)、異體動(dòng)物接種致瘤性和對(duì)正常組織浸潤(rùn)力等實(shí)驗(yàn)。
（三）培養(yǎng)條件和方法
各種細(xì)胞都有自己比較適應(yīng)的生存環(huán)境，因此應(yīng)指明使用的培養(yǎng)基、血清種類、用量以及細(xì)胞生存的適宜pH等。

三、若干細(xì)胞建株的要點(diǎn)及基本過(guò)程
（一）腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)要點(diǎn)
1、取材：材料主要來(lái)源于外科手術(shù)或活檢瘤組織，取材時(shí)避免用壞死組織，要挑選瘤細(xì)胞集中和活力較好的部位，瘤性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料。取材后盡快培養(yǎng)，因故不能立即培養(yǎng)者，可凍存。其培養(yǎng)方法及凍存方法同前述正常組織。
2、成纖維細(xì)胞排除：在腫瘤組織中�；祀s有一些成纖維細(xì)胞，培養(yǎng)時(shí)能與瘤細(xì)胞同時(shí)生長(zhǎng)，并常壓過(guò)癌細(xì)胞，導(dǎo)致癌細(xì)胞生長(zhǎng)受阻以至消失，應(yīng)仔細(xì)排除。
排除方法常有：機(jī)械刮除法、反復(fù)貼壁法、消化排除法、膠原酶消化法等。
3、提高腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)存活率和生長(zhǎng)率
根據(jù)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，腫瘤細(xì)胞在體外不易培養(yǎng)，建立能傳代的腫瘤細(xì)胞系更為困難。一般當(dāng)腫瘤組成或細(xì)胞被原代培養(yǎng)后，要經(jīng)過(guò)對(duì)新環(huán)境的適應(yīng)才能生長(zhǎng)，因此不能局限于一般培養(yǎng)法，須采用一些特殊措施。如：用適宜底物，鼠尾膠原底層及飼細(xì)胞底層等。用細(xì)胞生長(zhǎng)因子，根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子，如胰島素、氫化可的松，雌激素等。也可以考慮動(dòng)物媒介培養(yǎng)。
（二）人類淋巴母細(xì)胞建株方法
l、4ml肝素抗凝血于離心管中，加入2ml RPMI 1640。
2、混勻后沿管壁緩慢加到預(yù)置有4ml淋巴細(xì)胞分離液的液面上靜置30min。
3、1500rpm，15min，吸取白細(xì)胞層（第二層）于另一離心管中。
4、加RPMI 1640 5ml洗滌白細(xì)胞兩次。
5、將白細(xì)胞接種至1ml RPMI 1640培養(yǎng)基中，加入10μl環(huán)胞霉素和100μl的EBV（EB病毒）液，混勻。
6、水浴搖床，40次/分，37℃，3hr。
7、1500rpm，15min。將細(xì)胞接種至1ml培養(yǎng)基中（內(nèi)含谷氨酰胺1mM／ml）加入10μl環(huán)胞霉素，輕輕混勻，37℃培養(yǎng)。
8、5天后觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)化和生長(zhǎng)情況，決定是否半量換液。一般半量換液l—2次，并維持環(huán)胞霉素的濃度。
9、待轉(zhuǎn)化細(xì)胞數(shù)量明顯上升，并出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)塊后，可轉(zhuǎn)入25ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，加1—2ml培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)10—15天，一般每隔3—4天觀察一次，決定是否換液，傳代。
10、細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)一定數(shù)量后凍存，凍存前應(yīng)進(jìn)行核型分析和存檔。

四、已建立細(xì)胞系或株的鑒定、管理和使用
近些年，當(dāng)一個(gè)細(xì)胞系或細(xì)胞林建成后，我國(guó)常通過(guò)組織專家開鑒定會(huì)的形式予以鑒定，從學(xué)術(shù)角度考慮，此舉實(shí)非必要。按國(guó)際慣例，只要研究認(rèn)真負(fù)責(zé)地把有關(guān)資料在雜志或刊物上報(bào)道，詳細(xì)介紹上述各項(xiàng)目即可。
以前因未建立統(tǒng)一的細(xì)胞庫(kù)時(shí)，對(duì)已建立的細(xì)胞系（株）多由作者單位自行保管，有浪費(fèi)人力、交流使用不便、細(xì)胞易污染和丟失等弊病。我國(guó)已初建成小規(guī)模貯存細(xì)胞機(jī)構(gòu)，待獲進(jìn)一步發(fā)展，這對(duì)我國(guó)細(xì)胞培養(yǎng)必將有更大促進(jìn)作用。
國(guó)際上美、英和日本等國(guó)已建有細(xì)胞庫(kù)；美國(guó)已有美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞庫(kù)或細(xì)胞銀行（ATCC）和人遺傳突變細(xì)胞庫(kù)（HGMR）、細(xì)胞衰老細(xì)胞庫(kù)（CAR）等，其中ATCC不僅是美國(guó)也世界最大的細(xì)胞庫(kù)。ATCC下屬有一組協(xié)作實(shí)驗(yàn)室和一個(gè)由眾多專家組成的咨詢委員會(huì)。ATCC也是美國(guó)國(guó)立癌癥研究所（NCI）和美國(guó)衛(wèi)生研究所中（NIH）的資源庫(kù)，尤與NCI有密切的關(guān)系。ATCC也是世界衛(wèi)生組織WHO的國(guó)際培養(yǎng)細(xì)胞文獻(xiàn)中心。ATCC現(xiàn)液氮凍存有3200個(gè)已經(jīng)過(guò)鑒定的細(xì)胞系（1992），其中包括來(lái)自正常人和各種疾病患者的皮膚成纖維細(xì)胞系；和來(lái)自不同物種的近75個(gè)雜交瘤細(xì)胞株。ATCC接納來(lái)自世界各國(guó)已經(jīng)鑒定的細(xì)胞予以貯存，同時(shí)也向世界各國(guó)的研究者或?qū)嶒?yàn)室免費(fèi)提供研究用細(xì)胞（做盈利性研究時(shí)收費(fèi)。） ATCC接納入庫(kù)細(xì)胞時(shí)，必須符合其入庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)， ATCC入庫(kù)細(xì)胞要求檢測(cè)項(xiàng)目如下：
培養(yǎng)簡(jiǎn)歷：組織來(lái)源日期、物種、組織起源、性別、年齡、供體正�；虍惓＝】禒顟B(tài)、細(xì)胞已傳代數(shù)等
凍 存 液：培養(yǎng)基和防凍液名稱
細(xì)胞活力：融解前后細(xì)胞接種存活率和生長(zhǎng)特性
培 養(yǎng) 液：培養(yǎng)基種類和名稱（一般要求不含抗生素）、血清來(lái)源和含量
細(xì)胞形態(tài)：類型，如為上皮或成纖維細(xì)胞等，融解后細(xì)胞生長(zhǎng)特性
核 型：二倍體或多倍體，標(biāo)記染色體的有無(wú)
無(wú)污染檢測(cè)：包括細(xì)菌、真菌、支原體、原蟲和病毒等
物種檢測(cè)：檢測(cè)同工酶，主要為G6PD和LDH，以證明細(xì)胞有否交叉污染以及反轉(zhuǎn)錄酶檢測(cè)
免疫檢測(cè)：一兩種血清學(xué)檢測(cè)
細(xì)胞建立者：建立者姓名；檢測(cè)者姓名
以上為ATCC入庫(kù)基本要求，雜交瘤入庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)尚有所不同，詳細(xì)情況請(qǐng)參閱ATCC的“Catalogue of Cell Lines and Hybridomas”。