北京時間1月25日凌晨消息,新西蘭牛奶中發(fā)現了有害物質——雙氰胺。雙氰胺又名二氰二胺,縮寫DICY或DCD。雖然國際標準未對食品中的雙氰胺限量,但高劑量的雙氰胺對人體是有毒的。
本文采用Cleanert® MAS-QuChERS-雙氰胺凈化管(貨號:MS-DI5001)和Venusil® HILIC液相色譜柱,建立了奶粉中雙氰胺的MAS-QuEChERS快速前處理方法和LC-UV以及LC-MS/MS檢測方法。
實驗部分
儀器和試劑
高效液相色譜儀,渦旋振蕩器,超聲波清洗機,氮吹儀。
雙氰胺標準品,Cleanert® MAS-QuChERS-雙氰胺凈化管,Venusil® HILIC液相色譜柱,微孔濾膜,乙酸銨、乙酸、乙腈為色譜純,實驗用水為超純水。
實驗方法
提取、凈化
稱取1g試樣于50ml具塞離心管中,加入2ml水溶解后,加乙腈定容至10ml,超聲10min,8000r/min離心5min,取2ml上清液加Cleanert® MAS-QuChERS-雙氰胺凈化管中,,渦旋0.5min,8000r/min離心5min,取上清液過0.22um濾膜,待測。
HPLC法:
色譜條件:
色譜柱:Venusil® HILIC 5μm 100Å 4.6*250mm;
流動相:A:10mmol/L乙酸銨(pH=4.0);
B:乙腈;
A:B=10:90;
檢測波長:220nm;
進樣量:10µl;
柱溫:30℃;
流速:1ml/min。
實驗結果:
線性關系和檢出限
準確稱取雙氰胺標準品50mg于50ml容量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度,作為標準貯備液;
分別量取一定量的標準貯備液,用乙腈稀釋,配置成濃度為0.1µg/ml,0.5µg/ml,1.0µg/ml,2.0µg/ml,5.0µg/ml和10.0µg/ml的標準溶液,按照上述色譜條件,依次進樣檢測。以標準溶液濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標,擬合線性方程,結果見表2:
名稱 | 保留時間 | 線性方程 | 相關系數 | 最低定量限(S/N=10) |
雙氰胺 | 4.92min | Y=116.44X+3.2699 | 0.9997 | 0.1µg/ml |
檢測方法穩(wěn)定性考察
選用10.0µg/ml的標準溶液連續(xù)進樣6針,計算其保留時間和峰面積的RSD值,結果見表3:
標號 | 保留時間,min | 峰面積 |
1 | 4.930 | 1061.7 |
2 | 4.933 | 1072.2 |
3 | 4.930 | 1064.4 |
4 | 4.929 | 1079.7 |
5 | 4.930 | 1067.3 |
6 | 4.934 | 1073.6 |
RSD,% | 0.04 | 0.62 |
準確度和精密度
選取市售某品牌奶粉試樣,進行添加回收實驗,結果見表4
平行1,% | 平行2,% | 平行3,% | 平均值,% | RSD,% |
98.6 | 88.4 | 89.8 | 92.3 | 5.99 |
LC-MS/MS法:
色譜條件:
色譜柱:Venusil® HILIC 5μm 100Å 2.1*150mm;
流動相:A:0.5mmol/L乙酸銨(pH=4.0)
B:乙腈
A:B=10:90
進樣量:10µl;
柱溫:30℃;
流速:0.2 ml/min。
質譜條件
質譜儀:API 4000+;
離子源:電噴霧離子源;
掃描方式:正離子掃描;
檢測方式:多反應監(jiān)測;
CAD:8.00;
CUR:10.00;
GS1:60.00;
GS2:50.00;
IS:5500.00;
TEM:500.00。
藥物名稱 | 監(jiān)測離子對 | DP | EP | CE | CXP |
雙氰胺 | 85/68 | 71 | 10 | 41 | 6 |
85/43 | 71 | 10 | 41 | 6 |
實驗結果
線性關系和檢出限
準確稱取雙氰胺標準品50mg于50ml容量瓶中,加水溶液并稀釋至刻度,作為標準貯備液;
分別量取一定量的標準貯備液,用乙腈稀釋,配置成濃度為5ng/ml,10ng/ml,20ng/ml,50ng/ml,100ng/ml和500ng/ml的標準溶液,按照上述液質方法,依次進樣檢測。以標準溶液濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標,擬合線性方程,結果見下表6:
名稱 | 保留時間 | 線性方程 | 相關系數 | 最低定量限(S/N=10) |
雙氰胺 | 3.15min | Y=8777.2X+7435.9 | 0.9993 | 5ng/ml |
檢測方法穩(wěn)定性考察
選用50.0ng/ml的標準溶液連續(xù)進樣6針,計算其保留時間和峰面積的RSD值,結果見表7:
標號 | 保留時間,min | 峰面積 |
1 | 3.29 | 382950 |
2 | 3.30 | 387950 |
3 | 3.25 | 382840 |
4 | 3.31 | 399820 |
5 | 3.30 | 378580 |
6 | 3.30 | 383810 |
RSD,% | 0.65 | 1.92 |
準確度和精密度
選取市售某品牌奶粉試樣,進行添加回收實驗,結果見表8。采用空白樣品稀釋法判斷檢測方法的基質效應影響。空白凈化液稀釋和乙腈稀釋的標準溶液,雙氰胺峰面積和相對豐度比無明顯變化,故判斷該方法無基質效應的影響。
平行1,% | 平行2,% | 平行3,% | 平均值,% | RSD,% |
84.6 | 80.7 | 90.2 | 85.2 | 5.61 |
圖1 定性定量穩(wěn)定性考察譜圖(HPLC法)
圖2 雙氰胺0.5μg/ml標準溶液譜圖(HPLC法)
圖3 奶粉空白譜圖(HPLC法)
圖4 奶粉10μg/g空白譜圖(HPLC法)
圖 5 10ng/ml雙氰胺標準溶液質譜圖
圖 6 奶粉空白質譜圖
剛在網上看見的,不知道靠譜不。
大家都用過哪些方法呢?給個您親身經歷過的真實案例吧。
年底了,還讓這個鬧得人心惶惶。!