引言：
 

  阪崎腸桿菌（又稱(chēng)阪崎氏腸桿菌）是一種周身無(wú)鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，無(wú)芽孢的兼性厭氧菌，革蘭氏陰性桿菌。1980年由黃色陰溝腸桿菌更名為阪崎腸桿菌。阪崎腸桿菌能引起嚴(yán)重的新生兒腦膜炎、小腸結(jié)腸炎和菌血癥，致死率可達(dá)40％～80%，自1961年首次由阪崎腸桿菌引起的新生兒腦膜炎之后，全球范圍陸續(xù)出現(xiàn)感染事件，丹麥、希臘、英國(guó)、荷蘭、冰島等國(guó)均有報(bào)道。其嚴(yán)重性已引起世界多國(guó)相關(guān)部門(mén)的重視，阪崎腸桿菌已被世界衛(wèi)生組織和許多國(guó)家確定為引起嬰兒死亡的重要條件致病菌。我國(guó)也于2005年5月20日通過(guò)了《奶粉中阪崎腸桿菌檢測(cè)方法》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，并于同年10月實(shí)施，我國(guó)《嬰兒配方食品》和《幼兒配方食品》相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定嬰幼兒配方奶粉、食品中禁止檢出阪崎腸桿菌等致病菌。
 

一、阪崎桿菌的生物學(xué)特性
 

1 形態(tài)染色
  阪崎腸桿菌屬腸桿菌科腸桿菌屬 , 因此本菌具備腸桿菌基本形態(tài)特征 : 革蘭陰性粗短桿菌，有周身菌毛 , 無(wú)芽胞, 有動(dòng)力[1] 。

2 培養(yǎng)特性

  能在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂、血平板、麥康凱(MAC) 瓊脂、伊紅美蘭 (EMB) 瓊脂、脫氧膽酸瓊脂等多種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖。培養(yǎng)最佳溫度 25 ～ 36 ℃ , 在 6～ 45 ℃下都能生長(zhǎng) , 某些菌株可在 47 ℃下生長(zhǎng)

[8] 。在胰蛋白胨瓊脂 (TSA) 、腦心浸液瓊脂(BH I) 及血平板上經(jīng) 25 ～ 36 ℃培養(yǎng) 24 h 后 , 形成 1. 5 ～ 2. 5mm, 黃色菌落。在結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂 (VRBG) 能產(chǎn)生紫紅色菌落[2]。
 

二、阪崎桿菌的傳統(tǒng)檢測(cè)方法
 

阪崎腸桿菌檢驗(yàn)程序見(jiàn)圖 1。 

  

1 基本步驟如下：

  取檢樣100g（mL）加入已預(yù)熱至44℃裝有900mL緩沖蛋白胨水的錐形瓶中，用手緩緩地?fù)u動(dòng)至充分溶解，36℃±1℃培養(yǎng)18 h±2h。移取1mL轉(zhuǎn)種于10mL mLST-Vm肉湯，44℃±0.5 ℃培養(yǎng)24 h±2h。 

  輕輕混勻mLST-Vm 肉湯培養(yǎng)物，各取增菌培養(yǎng)物1環(huán)，分別劃線接種于兩個(gè)阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基平板，36℃±1℃培養(yǎng)18 h±2 h。 

  挑取1 個(gè)～5 個(gè)可疑菌落，劃線接種于TSA平板。25℃±1℃培養(yǎng)48 h±4 h。 自TSA 平板上直接挑取黃色可疑菌落，進(jìn)行生化鑒定。阪崎腸桿菌的主要生化特征見(jiàn)表 1�？蛇x擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)。 

2 結(jié)果與報(bào)告 

  綜合菌落形態(tài)和生化特征，報(bào)告每100g（mL）樣品中檢出或未檢出阪崎腸桿菌。 

3 注意事項(xiàng)

（1）取樣前應(yīng)對(duì)樣品包裝的開(kāi)啟處和取樣勺進(jìn)行消毒

（2）檢測(cè)樣品不能低于333g
 

三、檢測(cè)新技術(shù)簡(jiǎn)介
 

1 熒光法選擇性培養(yǎng)基法

  該方法也是利用α-葡萄糖苷酶活性的檢測(cè)方法[3]。在營(yíng)養(yǎng)瓊脂基礎(chǔ)上添加4 -甲基-傘形酮-α- D -葡萄糖苷 (α-MUG) 。阪崎腸桿菌在該培養(yǎng)基上形成黃色菌落 , 在紫外光照射下發(fā)生熒光。該法靈敏度和特異性都比較好 , 已在多個(gè)國(guó)家開(kāi)展使用 , 均取得穩(wěn)定可靠的結(jié)果。

2 對(duì)硝基酚光電比色法

  利用阪崎腸桿菌的α-葡萄糖苷酶活性 , 分解對(duì)硝基酚-α- D -葡萄糖苷底物 , 釋放黃色的對(duì)硝基酚 , 在 405 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度 , 根據(jù)吸光度的大小 , 確定樣品中阪崎腸桿菌是否存在。方法是常規(guī)增菌 , 在 VRBG 或 TSA 平板上挑取可疑菌落 , 制備成一定濃度的菌懸液與底物混勻 , 37 ℃ 4 h 后進(jìn)行比色測(cè)定[4]。

3 熒光定量 PCR 方法 　

  熒光定量 PCR 技術(shù)的基本原理是在PCR 反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán) , 該基團(tuán)是一對(duì)合適的熒光物質(zhì) , 可以構(gòu)成一個(gè)能量供體和能量受體對(duì) , 其中供體的發(fā)射光譜和受體的吸收光譜重疊 , 在 PCR 反應(yīng)基因擴(kuò)增時(shí) , 激發(fā)供體而釋放的熒光能量正好被受體吸收 , 使得供體的熒光強(qiáng)度減弱而受體熒光強(qiáng)度增強(qiáng) , 利用熒光信號(hào)強(qiáng)弱變化積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè) PCR 反應(yīng)過(guò)程 , 最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析。

  實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)已廣泛應(yīng)用于多種食品微生物污染的檢測(cè)。 SEO 等利用阪崎腸桿菌部分大分子合成(MMS) 操縱子基因序列建立了奶粉中阪崎腸桿菌的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 方法 , 能檢測(cè)到 

  0.6-1g 奶粉中的阪崎腸桿菌 , 且比傳統(tǒng)培養(yǎng)法檢測(cè)時(shí)間從 6 ～ 7 天縮短至 2 天內(nèi)完成。對(duì) 68株阪崎腸桿菌和 55 株非阪崎菌進(jìn)行檢測(cè) , 未出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性 , 具有很好的特異性。
 

結(jié)語(yǔ)：
 

  傳統(tǒng)的檢測(cè)方法存在操作繁瑣，時(shí)間長(zhǎng)等缺點(diǎn),很難滿足現(xiàn)代臨床快速診斷和治療的需求。要了解更準(zhǔn)確，快速，簡(jiǎn)便，可靠的方法和技術(shù)，科學(xué)為此已作了大量的研究，試驗(yàn)方法和識(shí)別技術(shù)正在不斷發(fā)展和完善，并在實(shí)踐中不斷取得新的進(jìn)展。