一.提取
常用溶劑有:水和乙醇,在提取糖類時(shí),先將樣品磨碎浸泡成溶液,若有脂肪的樣品用石油醚提取,撤去其中的脂肪和葉綠素。
1. 水作提取劑
用水作提取劑,溫度控制在45-50℃,利用水作提取劑時(shí),還有pro、氨基酸、多糖、色素干擾,影響過(guò)濾時(shí)間,所
以用水作提取劑應(yīng)注意三個(gè)的
注意:
1)溫度過(guò)高:是可溶性淀粉及糊精提取出來(lái) 。
2)酸性樣品:酸性使糖水解(轉(zhuǎn)化),所以酸性樣品用碳酸鈣中和,提取但應(yīng)控制在中性。
3)萃取的液體:有酶活性時(shí),同樣是使糖水解,加二氯化汞可防止(二氯化汞可抑制酶活性)
2. 乙醇(水溶液)作提取液
乙醇作提取液適用于含酶多的樣品 ,這樣避免唐被水解。乙醇的濃度70-80%。濃度過(guò)高,糖溶在乙醇中,用乙醇的目的,降低酶的作用,避免糖被酶水解。
二.澄清劑
1. 作用:
使沉淀一些干擾物質(zhì),是提取液清亮透明,達(dá)到準(zhǔn)確的測(cè)量糖類。(常用澄清劑來(lái)澄清)
2. 對(duì)澄清劑的要求:
1)除干擾物質(zhì)完全,不吸附被側(cè)物質(zhì)糖
2)過(guò)量澄清劑不影響糖的測(cè)量
3)沉淀顆粒要小,操作簡(jiǎn)便
4)不改變糖類的比旋光度及理化性質(zhì)
3. 實(shí)驗(yàn)室常用的澄清劑
1)中性醋酸鉛:適用于植物性的萃取液,它可除去蛋白質(zhì)、丹寧、有機(jī)酸、果膠。
缺點(diǎn):脫色力差,不能用于深色糖液的澄清,否則加活性炭處理。
2)堿性醋酸鉛
適用深色的蔗糖溶液,可除色素,有機(jī)酸,蛋白質(zhì)
缺點(diǎn):沉淀顆粒大,可帶走果糖。
(3)醋酸鋅和亞鐵氰化鉀
用于富含蛋白質(zhì)的提取液,常用于沉淀蛋白質(zhì),對(duì)乳制品最理想。主要是生成的亞鐵氰酸鋅(白色沉淀)與蛋白質(zhì)共同沉淀。所以使動(dòng)物性樣品的沉淀劑。
(4)AL(OH)3乳劑是輔助澄清劑。
(5)CuSO4-NaOH這種澄清劑用于牛乳等樣品。
4.澄清劑的用量。
以上的澄清劑用于較少的中性硅酸鋁和硅酸鋅和亞鐵氰化鉀。在一般操作時(shí),加澄清劑量多少一定要恰當(dāng),用量太少,達(dá)不到澄清的目的,用量太多使分析結(jié)果產(chǎn)生誤差,不同的物質(zhì),因干擾物質(zhì)種類和含量的不同,
所以添加量也不同。過(guò)量以后,糖液中有Zn2+, Pb2+, 等。
過(guò)量的Pb+還原糖(果糖)生成鉛糖。這樣使測(cè)得糖量降低。所以要加除鉛劑,防止生成鉛糖,降低糖的濃度。
三. 常用的除鉛劑
K2CrO4(苯酸鉀);Na2CrO4(苯酸鈉);Na2HPO4(磷酸氫二鈉);Na2SO4(硫酸鈉);[使用時(shí)可加少量固體即可]