（4-氨基安替比林分光光度法）

一、原理

酚類(lèi)化合物于pH10.0±0.2介質(zhì)中，在鐵氰化鉀存在下，與4-氨基安替比林反應(yīng)，生成橙紅色的吲哚酚氨基安替比林染料，其水溶液在510nm波長(zhǎng)處有最大吸收。

用光程長(zhǎng)為20mm比色皿測(cè)量時(shí)，酚的最低檢出濃度為0.1mg/L。

二、儀器

1．500mL全玻璃蒸餾器。

2．分光光度計(jì)。

三、試劑

實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)為無(wú)酚水。

1．無(wú)酚水：于1L水中加入0.2g經(jīng)200℃活化0.5h的活性炭粉末，充分振搖后，放置過(guò)夜。用雙層中速濾紙過(guò)濾，或加入氫氧化鈉使水呈強(qiáng)堿性，并滴加高錳酸鉀溶液至紫紅色，移入蒸餾瓶中加熱蒸餾，收集餾出液備用。

注：無(wú)酚水應(yīng)貯于玻璃瓶中，取用時(shí)應(yīng)避免與橡膠制品（橡皮塞或乳膠管）接觸。

2．硫酸銅溶液：稱(chēng)取50g硫酸銅（CuSO₄·5H₂O）溶于水，稀釋至500mL。

3．磷酸溶液：量取50mL磷酸（密度_20℃=1.69g/mL），用水稀釋至500mL。

4．甲基橙指示液：稱(chēng)取0.05g甲基橙溶于100mL水中。

苯酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液： 稱(chēng)取1.00g無(wú)色苯酚溶于水，移入1000mL容量瓶中，稀釋至標(biāo)線。至冰箱內(nèi)保存，至少穩(wěn)定一個(gè)月。

標(biāo)定方法：

(1)吸10.00mL酚貯備液于250mL碘量瓶中，加水稀釋至100mL，加10.0mL0.1mol/L溴酸鉀-溴化鉀溶液，立即加入5mL鹽酸，蓋好瓶蓋，輕輕搖勻，于暗處放置10min。加入1g碘化鉀，密塞，再輕輕搖勻，放置暗處5min。用0.0125mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至淡黃色，加入1mL淀粉溶液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色剛好褪去，記錄用量。

(2)同時(shí)以水代替苯酚貯備液作空白試驗(yàn)，記錄硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定溶液用量。

(3)苯酚貯備液濃度由下式計(jì)算：

               苯酚（mg/mL）=15.68×c×(V₁-V₂)/V

式中：V₁——空白實(shí)驗(yàn)中硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液用量(mL)；

V₂——滴定苯酚貯備液時(shí)，硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定溶液用量（mL）;

V——取用苯酚貯備液體積(mL)；

c——硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液濃度(mol/L)；

15.68——1/6C₆H₅OH摩爾質(zhì)量(g/mol)。

6．苯酚標(biāo)準(zhǔn)中間液：取適量苯酚貯備液，用水稀釋至每毫升含0.010mg苯酚。使用時(shí)當(dāng)天配制。

7．溴酸鉀-溴化鉀標(biāo)準(zhǔn)參考溶液(c_1/6KBrO3=0.1mol/L)：稱(chēng)取2.784g溴酸鉀(KBrO₃)溶于水，加入10g溴化鉀(KBr),使其溶解，移入1000mL容量瓶中，稀釋至標(biāo)線。

8．碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)參考溶液(c_1/6KIO3=0.0125mol/L)：稱(chēng)取預(yù)先經(jīng)180℃烘干的碘酸鉀0.4458g溶于水，移入1000mL容量瓶中，稀釋至標(biāo)線。

9．硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(c_{Na2S2O3·5H2O}≈0.0125mol/L)：稱(chēng)取3.1g硫代硫酸鈉溶于煮沸放冷的水中，加入0.2g碳酸鈉，稀釋至1000mL，臨用前，用碘酸鉀溶液標(biāo)定。

標(biāo)定方法：

取10.00mL碘酸鉀溶液置250mL容量瓶中，加水稀釋至100mL，加1g碘化鉀，再加5mL(1+5)硫酸，加塞，輕輕搖勻。置暗處放置5min，用硫代硫酸鈉溶液滴定至淡黃色，加1mL淀粉溶液， 繼續(xù)滴定至藍(lán)色剛褪去為止，記錄硫代硫酸鈉溶液用量。按下式計(jì)算硫代硫酸鈉溶液濃度(mol/L)：

c(Na₂S₂O₃·5H₂O)=0.0125×V₄÷V₃

式中：V3——硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液消耗量(mL)；

V4——移取碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)參考溶液量(mL)；

0.0125——碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)參考溶液濃度(mol/L)。

10．淀粉溶液：稱(chēng)取1g可溶性淀粉，用少量水調(diào)成糊狀，加沸水至100mL，冷后，置冰箱內(nèi)保存。

11．緩沖溶液(pH約為10)：稱(chēng)取20g氯化銨(NH₄Cl)溶于100mL氨水中，加塞，置冰箱中保存。

注：應(yīng)避免氨揮發(fā)所引起pH值的改變，注意在低溫下保存和取用后立即加塞蓋嚴(yán)，并根據(jù)使用情況適量配置。

12． 2%(m/V)4-氨基安替比林溶液：稱(chēng)取4-氨基安替比林(C₁₁H₁₃N₃O)2g溶于水，稀釋至100mL，置于冰箱中保存。可使用一周。

注：固體試劑易潮解、氧化，宜保存在干燥器中。

13． 8%(m/V)鐵氰化鉀溶液：稱(chēng)取8g鐵氰化鉀{K₃[Fe(CN)₆]}溶于水，稀釋至100mL，置于冰箱內(nèi)保存�？墒褂靡恢堋�

四、測(cè)定步驟

1．水樣預(yù)處理

(1)量取250mL水樣置蒸餾瓶中，加數(shù)粒小玻璃珠以防暴沸，再加二滴甲基橙指示液，用磷酸溶液調(diào)節(jié)至pH4（溶液呈橙紅色），加5.0mL硫酸銅溶液(如采樣時(shí)已加過(guò)硫酸銅，則補(bǔ)加適量)。

如加入硫酸銅溶液后產(chǎn)生較多量的黑色硫化銅沉淀，則應(yīng)搖勻后放置片刻，待沉淀后，再滴加硫酸銅溶液，至不產(chǎn)生沉淀為止。

(2)連接冷凝器，加熱蒸餾，至蒸餾出約225mL時(shí)，停止加熱，放冷。向蒸餾瓶中加入25mL水，繼續(xù)蒸餾至餾出液為250mL為止。

蒸餾過(guò)程中，如發(fā)現(xiàn)甲基橙的紅色褪去，應(yīng)在蒸餾結(jié)束后，再加1滴甲基橙指示液。如發(fā)現(xiàn)蒸餾后殘液不呈酸性，則應(yīng)重新取樣，增加磷酸加入量，進(jìn)行蒸餾。

2．標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：于一組8支50mL比色管中，分別加入0、0.50、1.00、3.00、5.00、7.00、10.00、12.50mL酚標(biāo)準(zhǔn)中間液，加水至50mL標(biāo)線。加0.5mL緩沖溶液，混勻，此時(shí)pH值為10.0±0.2，加4-氨基安替比林1mL，混勻。再加1mL鐵氰化鉀，充分混勻后，放置10min立即于510nm波長(zhǎng)，用光程為20mm比色皿，以水為參比，測(cè)量吸光度。經(jīng)空白校正后，繪制吸光度對(duì)苯酚含量(mg)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3．水樣的測(cè)定：分取適量的餾出液放入50mL比色管中，稀釋至50mL標(biāo)線。用與繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的步驟測(cè)定吸光度，最后減去空白實(shí)驗(yàn)所得吸光度。

4．空白試驗(yàn)：以水代替水樣，經(jīng)蒸餾后，按水樣測(cè)定步驟進(jìn)行測(cè)定，以其結(jié)果作為水樣測(cè)定的空白校正值。

五、計(jì)算

揮發(fā)酚(以苯酚計(jì)，mg/L)=1000×m/V

式中：m——由水樣的校正吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的苯酚含量（mg）；

V——移取餾出液體積(mL)。

注意事項(xiàng)

如水樣含揮發(fā)酚較高，移取適量水樣并加至250mL進(jìn)行蒸餾，則在計(jì)算時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。