1. 布氏桿菌屬

布氏桿菌屬是一類革蘭陰性細(xì)小桿菌，牛、羊、豬等動(dòng)物最易感染。人類接觸帶菌動(dòng)物或食用病畜及其乳制品，均可被感染。布氏桿菌病廣泛分布世界各地，我國(guó)部分地區(qū)曾有流行。布氏桿菌屬分為羊、牛、豬、鼠、綿羊及犬布氏桿菌6個(gè)種，20個(gè)生物型。中國(guó)流行的主要是羊、牛、豬三種布氏桿菌，其中以羊布氏桿菌病最為多見(jiàn)。
布氏桿菌屬細(xì)菌為非抗酸性，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，無(wú)鞭毛，呈球桿狀(見(jiàn)圖1)。血瓊脂(BAP)上為透明或半透明、光滑且有光澤菌落。此細(xì)菌不在麥康凱瓊脂上生長(zhǎng)。布氏桿菌屬細(xì)菌尿素陽(yáng)性，觸酶、氧化酶陽(yáng)性，而吲哚陰性。由于該菌屬細(xì)菌具有強(qiáng)的傳染性，因此一旦懷疑應(yīng)送往LRN B級(jí)參考實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。

2. 空腸彎曲菌

空腸彎曲菌是一種人畜共患病病原菌，可以引起人和動(dòng)物發(fā)生多種疾病，并且是一種食物源性病原菌，認(rèn)為是引起全世界人類細(xì)菌性腹瀉的主要原因。其致病因素包括粘附、侵襲、產(chǎn)生毒素和分子模擬機(jī)制等四個(gè)方面，通過(guò)分子模擬機(jī)制可以引起最嚴(yán)重的并發(fā)癥一格林一巴利綜合征�？漳c彎曲菌可以通過(guò)產(chǎn)生細(xì)胞緊張性腸毒素、細(xì)胞毒素和細(xì)胞致死性膨脹毒素而致病�？漳c彎曲菌對(duì)紅霉素、新霉素、慶大霉素、四環(huán)素、氯霉素、卡那霉素等抗生素敏感，但近年發(fā)現(xiàn)了不少耐藥菌株及多重耐藥性菌株。

空腸彎曲菌菌體輕度彎曲似逗點(diǎn)狀。菌體一端或兩端有鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑，在暗視野鏡下觀察似飛蠅。有莢膜，不形成芽胞。微需氧菌，在含2.5～5%氧和10% CO2的環(huán)境中生長(zhǎng)最好，在正常大氣或無(wú)氧環(huán)境中均不能生長(zhǎng)，最適溫度為37～42℃。本菌在普通培養(yǎng)基上難以生長(zhǎng)，在凝固血清和血瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)36小時(shí)可見(jiàn)無(wú)色半透明毛玻璃樣小菌落，單個(gè)菌落呈中心凸起，周邊不規(guī)則，無(wú)溶血現(xiàn)象。空腸彎曲生化反應(yīng)不活潑，不發(fā)酵糖類，不分解尿素�？蛇�原硝酸鹽，氧化酶和觸酶為陽(yáng)性。能產(chǎn)生微量或不產(chǎn)生硫化氫，甲基紅和v-p試驗(yàn)陰性，枸椽酸鹽培養(yǎng)基中不生長(zhǎng),在彎曲菌中馬尿酸呈陽(yáng)性反應(yīng)具有重要鑒定價(jià)值。

3.“HACEK”群細(xì)菌

HACEK是指一組革蘭陰性桿菌：嗜血桿菌屬(H)、放線桿菌屬(A)、人心桿菌屬(C)、艾肯菌屬(E)、金氏桿菌屬(K)。這組微生物的共同特征是易導(dǎo)致心內(nèi)膜感染，約占全部感染性心內(nèi)膜炎的5-10%，它們是導(dǎo)致正常人群(非靜脈藥物濫用者)心內(nèi)膜炎的常見(jiàn)原因之一。所有這些微生物都是口咽部正常菌群的一部分，生長(zhǎng)緩慢、喜好富二氧化碳環(huán)境。除心臟瓣膜感染，HACEK菌還導(dǎo)致其他感染：菌血癥、各類膿腫、腹膜炎、中耳炎、結(jié)膜炎、肺炎、化膿性關(guān)節(jié)炎、骨髓炎、尿路感染、傷口感染、腦膿腫、牙周感染。

嗜血桿菌屬因在生長(zhǎng)過(guò)程中需含有生長(zhǎng)因子X(氯化高鐵血紅素)和(或)V(輔酶Ⅰ)的血液瓊脂而得名。本屬細(xì)菌為革蘭陰性小桿菌，無(wú)動(dòng)力，具有明顯的多型性，不形成芽胞，需氧或兼性厭氧。流感嗜血桿菌是嗜血桿菌屬最重要的病原菌，鏡下呈球桿狀、長(zhǎng)桿狀、少數(shù)為絲狀。粘液型菌株有莢膜，毒力較強(qiáng)。菌落一般為光滑型，若與金黃色葡萄球菌在BAP上共同孵育，則在葡萄球菌菌落周圍生長(zhǎng)的流感嗜血桿菌菌落較大，這叫做“衛(wèi)星現(xiàn)象”。原因是金黃色葡萄球菌能合成較多的V因子，促進(jìn)流感嗜血桿菌的生長(zhǎng)。

放線桿菌屬為革蘭陰性桿菌，有時(shí)呈球形、橢圓形(見(jiàn)圖3)。兼性厭氧菌，無(wú)動(dòng)力，無(wú)莢膜，在含血清或血液的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，37℃培養(yǎng)2～3天后形成直徑約1mm的菌落。在肉湯培養(yǎng)液中生長(zhǎng)呈顆粒狀。對(duì)人或動(dòng)物致病的有伴放線放線桿菌、林氏放線桿菌和馬駒放線桿菌。伴放線放線桿菌因常見(jiàn)于人類的某些放線菌病的病灶中而得名。但也可單獨(dú)致病，如一些亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎是由本菌引起的。本屬細(xì)菌能還原硝酸鹽，不產(chǎn)生吲哚，尿素陽(yáng)性。

人心桿菌是心桿菌屬內(nèi)唯一的種，是人的鼻腔和咽喉部的正常菌群，可引起心內(nèi)膜炎、尿路感染、腦膿腫和牙周炎等疾病。大部分菌株可從血液中分離而來(lái)，有的菌株也可從腦脊液中分離而來(lái)。人心桿菌為無(wú)鞭毛、無(wú)莢膜、無(wú)芽孢，并具有多形性的革蘭陰性桿菌(見(jiàn)圖4)。革蘭染色不易被脫色，單個(gè)存在或成對(duì)排列，有時(shí)形成短鏈或呈葡萄狀排列。該菌為兼性厭氧菌，某些菌株在初代分離時(shí)需要CO2，在生長(zhǎng)過(guò)程中要有一定濕度，在干燥環(huán)境中不生長(zhǎng)；在35～37 ℃均可生長(zhǎng)，但在22 ℃或42 ℃均不生長(zhǎng)。該菌在BAP上不溶血，經(jīng)24h 培養(yǎng)后菌落很小，48h 后可達(dá)1mm，菌落為圓形、凸起、光滑、有光澤而邊緣整齊，某些菌株的菌落可長(zhǎng)入培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基表面瓊脂凹陷。麥康凱瓊脂上不生長(zhǎng)。人心桿菌氧化酶陽(yáng)性，觸酶陰性，吲哚陽(yáng)性，不還原硝酸鹽。

嚙蝕艾肯菌是革蘭陰性多形性球桿菌(見(jiàn)圖5)，有一種漂白劑的氣味，兼性厭氧，是口腔和許多其他粘膜表面的正常菌群。嚙蝕艾肯菌是人咬傷后發(fā)生的蜂窩織炎的病原體，它也是已發(fā)現(xiàn)靜脈藥物濫用者軟組織感染和心內(nèi)膜炎主要病原體。它也能導(dǎo)致各種各樣的肺部感染(如膿胸、肺炎、敗血癥栓子)，類似嚴(yán)格偏性厭氣菌。

大多數(shù)嚙蝕艾肯菌性心內(nèi)膜炎患者有潛在的生物瓣膜病變。與其他HACEK菌不同，大多數(shù)嚙蝕艾肯菌性心內(nèi)膜炎與靜脈藥物濫用有關(guān)。嚙蝕艾肯菌在培養(yǎng)基上凹陷生長(zhǎng)，吲哚陰性，鳥氨酸陽(yáng)性。

金氏桿菌屬是革蘭陰性球桿菌，有3個(gè)種：

金氏金氏桿菌、產(chǎn)吲哚金氏桿菌、去硝化金氏桿菌，只有金氏金氏桿菌引起心內(nèi)膜炎。與其他HACEK菌不同，金氏桿菌感染進(jìn)展相當(dāng)迅速。金氏金氏桿菌在BAP呈大的、光滑、不透明、白色或米色、β-溶血菌落，與腸桿菌科細(xì)菌相似，但在麥康凱瓊脂上不生長(zhǎng)。金氏金氏桿菌觸酶陰性，氧化酶陽(yáng)性，通常分離自無(wú)菌組織和體液。

4. 土拉熱弗朗西斯氏菌

土拉熱弗朗西斯氏菌簡(jiǎn)稱土拉弗氏菌，是引起土拉弗氏菌病(野兔熱)的病原菌。人類感染此病多因接觸患病動(dòng)物而致，或攝食污染食物和吸入污染空氣所致。土拉桿菌是革蘭陰性多形性細(xì)菌，鏡下呈球狀、桿狀、豆?fàn)詈徒z狀等，無(wú)芽胞、無(wú)動(dòng)力、有莢膜。該菌營(yíng)養(yǎng)要求較高，在普通瓊脂培養(yǎng)基和肉湯中均不生長(zhǎng)，只在加入
胱氨酸、半胱氨酸、血液或卵黃的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，形成圓形、光滑、灰色、凸起、有粘性的菌落，在雞胚絨尿膜上也能生長(zhǎng)，在卵黃囊中生長(zhǎng)尤為茂盛，最適生長(zhǎng)溫度35℃ ～37℃ 。若從動(dòng)物或人體初次分離，一般需要3—5天。常用培養(yǎng)基主要有半胱氨酸葡萄糖血液瓊脂平板(Francis培養(yǎng)基)、卵黃瓊脂平板和半胱氨酸巧克力瓊脂。土拉熱弗朗西斯氏菌氧化酶陰性，觸酶陰性或弱陽(yáng)性，β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性。由于該菌具有強(qiáng)傳染性，必須在生物安全柜中處理，一旦懷疑需送往LRN參考實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。

5. 卡他莫拉菌

卡他莫拉菌為革蘭陰性雙球菌。過(guò)去一直認(rèn)為卡他莫拉菌是對(duì)人體無(wú)致病性的上呼吸道正常寄居菌，但是，近20多年的研究發(fā)現(xiàn)，該菌不僅可以引起兒童和老年人的上呼吸道感染，而且還是引起成人下呼吸道感染的重要病原菌，是兒童上頜竇炎、中耳炎、肺炎以及成人的慢性下呼吸道感染的第3位最常見(jiàn)致病菌，僅次于流感嗜血桿菌和肺炎鏈球菌�？ㄋ�莫拉菌在BAP上不溶血，整個(gè)菌落可推動(dòng)，氧化酶、觸酶陽(yáng)性，丁酸鹽、吲哚酚醋酸鹽陽(yáng)性。

6. 奈瑟菌屬

奈瑟菌屬細(xì)菌為革蘭陰性球菌，單個(gè)或成雙排列，無(wú)芽孢、無(wú)鞭毛、有菌毛，觸酶、氧化酶陽(yáng)性，包括腦膜炎奈瑟菌(見(jiàn)圖7)、淋病奈瑟菌等9種，其中有臨床意義的致病菌為腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。BAP上呈透亮不溶血菌落，氧化酶、γ-谷氨酰氨肽酶陽(yáng)性為腦膜炎奈瑟菌。BAP上呈淺灰色不溶血菌落，氧化酶、β-半乳糖苷酶陽(yáng)性為乳糖奈瑟菌。淋病奈瑟菌在巧克力瓊脂上呈小的、有光澤的菌落，通常在BAP、MH和胰大豆瓊脂上生長(zhǎng)，氧化酶陽(yáng)性，觸酶強(qiáng)陽(yáng)性(30%過(guò)氧化氫)，而γ-谷氨酰氨肽酶、β-半乳糖苷酶陰性。

不常見(jiàn)革蘭陰性菌的快速鑒定方法

二. 不常見(jiàn)革蘭陽(yáng)性菌

1．產(chǎn)單核李斯特菌

李斯特菌是一種典型的胞內(nèi)寄生的革蘭陽(yáng)性短桿菌，共分為2個(gè)群，7個(gè)種。第一群包括產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌、伊氏李斯特菌、無(wú)害李斯特菌(又名英洛克李斯特菌) 、韋氏李斯特菌及西爾李斯特菌；第二群為較少見(jiàn)的格氏李斯特菌和莫氏李斯特菌。其中產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌和伊氏李斯特菌具有致病性，且產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌是惟一能引起人類疾病的，是一種人獸共患病的病原菌，能引起人、畜的李斯特菌病，感染后主要表現(xiàn)為敗血癥、腦膜炎、流產(chǎn)和單核細(xì)胞增多。這種病菌在自然界廣泛存在，食品中存在的產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌對(duì)人類的安全具有危險(xiǎn)，世界衛(wèi)生組織(WHO)指出，水產(chǎn)品、奶及奶制品、肉制品均有不同程度的污染，并曾將其列為20世紀(jì)90年代食品中四大致病菌之一。
產(chǎn)單核李斯特菌是一種革蘭陽(yáng)性短小桿菌，通常成雙排列，偶爾可見(jiàn)雙球狀(見(jiàn)圖8)。有鞭毛，但僅在18~20℃有動(dòng)力，在37℃動(dòng)力緩慢。無(wú)芽胞，一般不形成莢膜，但在含有血清的葡萄糖蛋白胨水中能形成粘多糖莢膜。兼性厭氧，對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基上可生長(zhǎng)，在血平板上會(huì)形成β-溶血。最適的生長(zhǎng)溫度是30~37℃，并可在4℃條件下進(jìn)行冷增菌。本菌耐堿不耐酸，對(duì)熱較為敏感，加熱50℃10min即可死亡同時(shí)該菌對(duì)多種抗生素敏感，以氨芐青霉素為首選，尚有青霉素、鏈霉素、四環(huán)素、氯霉素和紅霉素等敏感。但該菌對(duì)磺胺、桿菌肽和多粘菌素耐藥。產(chǎn)單核李斯特菌觸酶陽(yáng)性，馬尿酸鹽陽(yáng)性。

2．鏈球菌屬

鏈球菌屬細(xì)菌廣泛分布于自然界、人和動(dòng)物腸道、健康人鼻咽部等，致病鏈球菌可引起各種化膿性炎癥、猩紅熱、風(fēng)濕熱等疾病。本屬細(xì)菌為革蘭陽(yáng)性球菌，鏈狀排列，無(wú)鞭毛，無(wú)芽孢，可形成莢膜，在液體培養(yǎng)基中易形成長(zhǎng)鏈，致病性強(qiáng)的菌株多為長(zhǎng)鏈，在膿汁標(biāo)本中多為短鏈。本屬細(xì)菌為需氧或兼性厭氧菌，部分為厭氧菌。營(yíng)養(yǎng)要求較高，需在加有血液、血清等成分的培養(yǎng)基生長(zhǎng)良好。根據(jù)鏈球菌在血液瓊脂平板上菌落周圍溶血情況，有草綠色溶血環(huán)的稱為α型溶血，如草綠色鏈球菌；呈透明溶血環(huán)的稱為β型溶血，稱β溶血性鏈球菌或化膿性鏈球菌；也有不溶血的，稱為γ型溶血，如腸球菌。根據(jù)族特異性抗原將鏈球菌分A－T 18個(gè)族。鏈球菌屬細(xì)菌觸酶陰性。化膿鏈球菌(A群) PYR陽(yáng)性。無(wú)乳鏈球菌(B群) 馬尿酸鹽陽(yáng)性，CAMP陽(yáng)性。草綠色鏈球菌PYR陰性，LAP陽(yáng)性，膽汁溶菌試驗(yàn)陰性。肺炎鏈球菌鏡下為革蘭陽(yáng)性球菌，矛尖狀，成雙排列，在人和動(dòng)物體內(nèi)形成莢膜，菌落細(xì)小、周圍有草綠色溶血環(huán)，48小時(shí)后，由于菌落自溶，呈現(xiàn)“臍窩狀”，Optochin敏感試驗(yàn)陽(yáng)性，膽汁溶菌試驗(yàn)陽(yáng)性，菊糖分解試驗(yàn)陽(yáng)性。

                    表2 不常見(jiàn)革蘭陽(yáng)性菌快速鑒定方法