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RT-PCR就是逆轉錄PCR（reverse transcription PCR）或者稱反轉錄PCR（reverse transcription-PCR, RT-PCR），是聚合酶鏈式反應（PCR）的一種廣泛應用的變形。在RT-PCR中，一條 RNA 鏈被逆轉錄成為互補DNA，再以此為模板通過PCR進行DNA擴增。逆轉錄（reverse transcription）是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導下的DNA合成，逆轉錄實驗包括3大要素，分別是引物、逆轉錄酶和RNA模板：
1. 引物：逆轉錄引物主要有3種，包括 Oligo（dT）、Random Primers和基因特異性引物（GSP）。其中Oligo（dT)具有12-20個T堿基，并且與真核生物mRNA的3’Poly A尾配對，可合成全長的cDNA，但僅擴增有polyA尾的mRNA ，對模板質量要求高，較適合克隆實驗。而Random Primers具有6-9個堿基，可隨機識別模板并結合，適合復雜結構和微量模板，但特異性低，小片段多，適合后續(xù)qPCR實驗�；蛱禺愋砸锟梢宰R別特定模板序列，具有特異性強，靈敏度高的特點，但需合成特定的序列。所以根據(jù)不同實驗需求可進行相應引物的選擇。
2. 逆轉錄酶：一種是來自純化的禽成髓細胞瘤病毒（AMV），由兩條肽鏈組成，具有聚合酶活性和很強的RNaseH活性，它最適溫度是42℃，最適pH8.3，在高反應溫度時可消除 mRNA的二級結構對逆轉錄的阻礙，然而高水平的RNaseH的活性既抑制cDNA產生也限制其長度。另一種來源于鼠白血病病毒（M-MLV），是單肽鏈的，有RNA聚合酶活性和相對較弱的 RNaseH活性，最適溫度37℃，最適pH7.6，較弱的RNaseH活性對獲得2-3kb的mRNA的全長cDNA有很大好處。
3.RNA模板：通常利用紫外分光光度計檢測純度，要求A260/280=1.9~2.1,A260/230=2.0~2.2。利用瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA的完整度，完整的總RNA在進行瓊脂糖凝膠電泳時會產生清晰的28S和18S rRNA條帶（真核樣品），28S rRNA條帶的強度應當大致為18S rRNA條帶的兩倍，并且無gDNA和蛋白殘留。
1. 引物：逆轉錄引物主要有3種，包括 Oligo（dT）、Random Primers和基因特異性引物（GSP）。其中Oligo（dT)具有12-20個T堿基，并且與真核生物mRNA的3’Poly A尾配對，可合成全長的cDNA，但僅擴增有polyA尾的mRNA ，對模板質量要求高，較適合克隆實驗。而Random Primers具有6-9個堿基，可隨機識別模板并結合，適合復雜結構和微量模板，但特異性低，小片段多，適合后續(xù)qPCR實驗�；蛱禺愋砸锟梢宰R別特定模板序列，具有特異性強，靈敏度高的特點，但需合成特定的序列。所以根據(jù)不同實驗需求可進行相應引物的選擇。
2. 逆轉錄酶：一種是來自純化的禽成髓細胞瘤病毒（AMV），由兩條肽鏈組成，具有聚合酶活性和很強的RNaseH活性，它最適溫度是42℃，最適pH8.3，在高反應溫度時可消除 mRNA的二級結構對逆轉錄的阻礙，然而高水平的RNaseH的活性既抑制cDNA產生也限制其長度。另一種來源于鼠白血病病毒（M-MLV），是單肽鏈的，有RNA聚合酶活性和相對較弱的 RNaseH活性，最適溫度37℃，最適pH7.6，較弱的RNaseH活性對獲得2-3kb的mRNA的全長cDNA有很大好處。
3.RNA模板：通常利用紫外分光光度計檢測純度，要求A260/280=1.9~2.1,A260/230=2.0~2.2。利用瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA的完整度，完整的總RNA在進行瓊脂糖凝膠電泳時會產生清晰的28S和18S rRNA條帶（真核樣品），28S rRNA條帶的強度應當大致為18S rRNA條帶的兩倍，并且無gDNA和蛋白殘留。
