手機(jī)版
如何提高HPLC柱效
要提高液相色譜的效率可從以下幾方面入手。 以下介紹了幾種國(guó)際上流行的測(cè)量和計(jì)算柱效值的方法。
1、提高液相色譜柱柱效的方法
要提高液相色譜的效率可從以下幾方面入手。
（1）降低移動(dòng)相的流速,但會(huì)使分析時(shí)間延長(zhǎng)。
（2）減少固定相的量,但色譜柱中樣品的負(fù)載量也隨之減小。
（3）減小固定相的顆粒度,但不能過分,過分后色譜柱的滲透率也會(huì)減小。
（4）選用低粘度的移動(dòng)相,以利于快速傳質(zhì),但卻不利于多組份分析。
（5）適當(dāng)提高柱溫,可降低移動(dòng)相的粘度,但柱效和分離度也隨之降低。
（6）盡量減小停滯移動(dòng)相的體積,但卻加快了移動(dòng)相的流速。
從以上介紹可看出,在色譜分析過程中,各種因素是互相聯(lián)系和制約的。只有通過對(duì)柱效值的跟蹤測(cè)算，對(duì)自己分析方法不斷的研究和實(shí)踐，才能找到最佳的工作條件。
2、對(duì)柱效值進(jìn)行跟蹤測(cè)算應(yīng)注意的問題
我們也應(yīng)記住柱效值并不足以預(yù)測(cè)在所有條件下的柱性能，對(duì)大多數(shù)色譜工作者來(lái)說，柱性能指的是色譜柱用于特定分離的能力，而僅僅有高柱效并不能保證這種分離能力。
不管用什么特定的測(cè)試方法,都會(huì)有幾個(gè)參數(shù)影響柱效的測(cè)定。這些參數(shù)包括：洗脫液的成分和粘度及其線流速，測(cè)定塔板數(shù)所用的溶質(zhì)、溫度、柱長(zhǎng)、填料裝填方式、顆粒度、還有所選用的測(cè)量和計(jì)算方法。而測(cè)量和計(jì)算方法對(duì)柱效值的確定起著極大的作用。
3、幾種測(cè)量和計(jì)算柱效值的方法
因?yàn)樯V峰是假定樣品濃度在移動(dòng)相和固定相中呈正態(tài)分布而得到的樣品譜帶分布,故常常把色譜峰型看作正態(tài)曲線來(lái)計(jì)算理論塔板數(shù)。因此計(jì)算柱效（以理論塔板數(shù)n為單位）的公式習(xí)慣上定義為:
式中tR為色譜峰的保留時(shí)間；
σ2是以時(shí)間為單位測(cè)量色譜峰的偏差；
a是和峰高（從測(cè)峰寬的基線量起）有關(guān)的常數(shù)；
ωb是峰寬，表示由色譜峰頂點(diǎn)與色譜峰兩側(cè)拐點(diǎn)處做切線與峰底基線相交兩點(diǎn)間的距離。
假如一個(gè)色譜峰真是正態(tài)峰型，那么每種計(jì)算方法都會(huì)得到同樣的結(jié)果。然而即使一些比較理想的儀器和傾向于得到對(duì)稱峰型的溶質(zhì),由于柱內(nèi)的槽或空隙,也會(huì)出現(xiàn)非正態(tài)峰型。所以不同的計(jì)算方法將會(huì)得到相差較大的n值。通常偏離正態(tài)模型的峰型表示為“前延”或“拖尾”。對(duì)于這些峰型，越在峰的高處測(cè)量,計(jì)算的理論塔板數(shù)值就越大（準(zhǔn)確性越低）。
在許多情況下,色譜工作者需要能反映整個(gè)峰型（包括拖尾）的柱效值，同時(shí)為了保證定量的重復(fù)性,也需要色譜峰很好的對(duì)稱性。這時(shí)對(duì)色譜峰非對(duì)稱性最敏感的計(jì)算方法最適合。如果目的僅僅是要監(jiān)測(cè)色譜柱從第一次使用到使用壽命結(jié)束這一過程中的柱效，那么以上任何一種方法都可以，應(yīng)選擇最簡(jiǎn)便的方法。
如何提GC柱效
在實(shí)際工作中，我們通過對(duì)載氣流速、進(jìn)樣技術(shù)、氣化室溫度、色譜柱、柱溫、檢測(cè)器溫度這六個(gè)方面的選擇，有效地提高了柱效率，使分析出的色譜峰峰形正常，無(wú)峰形擴(kuò)張、拖尾、峰漏檢等不良現(xiàn)象出現(xiàn)，分離度高，從而提高了分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。
所為柱效就是在較短的時(shí)間內(nèi)，用較短的柱子達(dá)到滿意的分析結(jié)果。為了提高色譜柱的柱效率，減少色譜峰擴(kuò)張、拖尾及峰漏檢等現(xiàn)象，在實(shí)際工作中，我們從以下六個(gè)方面入手，對(duì)柱操作條件的選擇進(jìn)行了探討。
1、載氣流速的選擇
氣相色譜最常用的載氣是：氫氣、氮?dú)�、氬氣、氦氣�?/font>
由速率理論可知，載氣流速慢有利于傳質(zhì)，有利于組分的分離，但分析時(shí)間會(huì)加長(zhǎng)；如果載氣流速快有利于加快分析速度，減少分了擴(kuò)散，但分離度降低。有時(shí)為了縮短分析時(shí)間，加大流量，但此時(shí)分離效果并不好。可見載氣流速的快慢都會(huì)降低柱效。
2、進(jìn)樣技術(shù)的選擇
在氣相色譜分析中，一般采用注射器或六通閥門進(jìn)樣。在考慮進(jìn)樣技術(shù)的時(shí)候，以注射器進(jìn)樣為主來(lái)研究。
進(jìn)樣量：如果在進(jìn)樣過程中進(jìn)樣量大會(huì)導(dǎo)致：分離度��；保留值變化難于定性；峰高和峰面積與進(jìn)樣量不成線性關(guān)系，不能定量。進(jìn)樣量與氣化溫度、柱容量和儀器的線性響應(yīng)范圍等因素有關(guān)。進(jìn)樣量應(yīng)控制在瞬間氣化，達(dá)到規(guī)定分離要求和線性響應(yīng)的允許范圍內(nèi)。
注射器里空氣的排除：用微量注射器抽取液體樣品,只要重復(fù)地把液體抽入注射器又迅速把其排回樣品瓶,就可以將空氣排除。還有一種更好的方法,那就是用計(jì)劃注射量的約2倍的樣品置換注射器3～5次,每次取到樣品后,垂直拿起注射器,針尖朝上，留在注射器里的空氣都應(yīng)當(dāng)跑到針管頂部，推進(jìn)注射器塞子,空氣就會(huì)全部被排掉。
保證進(jìn)樣量的準(zhǔn)確：用經(jīng)置換過的注射器取約計(jì)劃進(jìn)樣量2倍左右的樣品,垂直拿起注射器,針尖朝上,讓針穿過一層紗布,這樣可用紗布吸收從針尖排出的液體。推進(jìn)注射器塞子,直到讀出所需要的數(shù)值。用紗布擦干針尖。至此準(zhǔn)確的液體體積已經(jīng)測(cè)得,需要再抽若于空氣到注射器里。如果不慎推動(dòng)柱塞,空氣可以保護(hù)液體使之不被排走。
進(jìn)樣手法：雙手拿注射器。用一只手(通常是左手)扶針插入墊片,注射大體積樣品(即氣體樣品)或柱前壓力極高時(shí),要防止從氣相色譜儀注樣器來(lái)的壓力把注射器活塞彈出(即用右手的大拇指按壓住活塞頂部)。讓針尖穿過墊片盡可能深的進(jìn)入進(jìn)樣口,壓下注射器活塞停留1秒鐘,然后盡可能快而穩(wěn)地抽出針尖（抽出的同時(shí)繼續(xù)壓住注射器活塞)。
進(jìn)樣時(shí)間：進(jìn)樣時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)柱效率影響很大。若進(jìn)樣時(shí)間過長(zhǎng)，遇使色譜區(qū)域加寬而降低柱效率。因此,對(duì)于沖洗法色譜而言，進(jìn)樣時(shí)間越短越好。
3、氣化室溫度的選擇
氣化室溫度取決于樣品的化學(xué)和熱穩(wěn)定性、沸程范圍、進(jìn)樣口類型等。合適的氣化室溫度即能保持樣品瞬間完全氣化，又不引起樣品分解。溫度過低，氣化速度比較慢，使峰形不規(guī)則，出現(xiàn)平頭峰或伸舌峰；溫度過高使出峰數(shù)目變化，產(chǎn)生前延峰，甚至樣品分解。為選擇合適的氣化室溫度，在多次的進(jìn)樣中我們發(fā)現(xiàn)，氣化室溫度比柱溫高50-100℃或比樣品組分中最高沸點(diǎn)高50-70℃較為合適。溫度過高過低都會(huì)影響柱效。
網(wǎng)友支招：提高柱效的最有效途徑有哪些?
1、一般柱效不好，先排除其他問題，都沒有問題的話就是柱子不行了。
2、如果柱子比較老，可以反過來(lái)小流速?zèng)_洗一下，我做過效果很好�。▋H適用舊柱子啊，有點(diǎn)風(fēng)險(xiǎn)）。
3、把柱頭變色的填料挖掉，用同類新的填料填充好，效果很好。
4、正向沖洗色譜柱、反向沖洗色譜柱、超聲清洗色譜柱篩板、如果是柱內(nèi)死體積增加則需更換新柱。
5、色譜柱是消耗品，理論來(lái)說，柱效很低的色譜柱是沒得救的，但是有一招，也就是當(dāng)你發(fā)現(xiàn)色譜柱沒得救的時(shí)候可以用一下，就是反沖色譜柱，但是你要注意的是，流速不要設(shè)置太大，這樣的話還能再堅(jiān)持一會(huì)。如果這樣也沒用的話，你就重新買吧。
6、如果柱子真的很老舊了，就反相沖洗試試，可能還能用一段時(shí)間，但不會(huì)太久。在然后就只能換填料了，或換新的柱子。
7、我們前段時(shí)間也是柱效不好，其他都比較正常。后來(lái)把柱子重新活化了一下，柱效由原來(lái)的兩千升到四千多了。不過維持了一個(gè)月又不行了。
思考與討論
提高色譜柱柱效，請(qǐng)記住一個(gè)口訣：
第一柱子溫度能調(diào)高，
第二可選柱子內(nèi)徑小。
第三柱外體積小更妙，
第四使用超純的硅膠。
第五氘燈要選能量高，
第六采用中空透光燈。
第七改變有機(jī)相比率，
第八流動(dòng)相pH可鼓搗。
第九可把鍵合相選挑，
第十改變有機(jī)添加劑。
十一改變流動(dòng)相配比，
十二縮短檢測(cè)響應(yīng)時(shí)間。
文章內(nèi)容來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)，轉(zhuǎn)載僅為分享知識(shí)，如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系刪除。
