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1 取樣前準(zhǔn)備工作
1.1 依據(jù)檢測(cè)區(qū)域的取樣點(diǎn)數(shù)，按照《培養(yǎng)基配制、滅菌標(biāo)準(zhǔn)操作程序》制備適量的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。
1.2 在超凈工作臺(tái)內(nèi)，以無菌操作法將配制好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基以每皿約15ml的裝量分裝，待培養(yǎng)基凝固后移出潔凈區(qū)。
1.3 將制備的營養(yǎng)瓊脂平皿倒置于隔水式恒溫水浴培養(yǎng)箱內(nèi)于30～35℃培養(yǎng)48小時(shí)。取出逐個(gè)檢查，確認(rèn)無菌落數(shù)后即可使用。
1.4 采樣：將上述制備好的營養(yǎng)瓊脂平皿交與QA人員取樣。
2 儀器、設(shè)備和培養(yǎng)基
2.1 所用的儀器、設(shè)備和培養(yǎng)基 2.1.2 浮游菌采樣器 2.1.3 培養(yǎng)皿（φ90mm×15mm） 2.1.4 培養(yǎng)基（營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基） 2.1.5 恒溫培養(yǎng)箱
2.2 儀器、設(shè)備、培養(yǎng)基的要求
2.2.1 浮游菌采樣器 2.2.1.1 浮游菌采樣器必須要有流量計(jì)和定時(shí)器。 2.2.1.2 應(yīng)嚴(yán)格按儀器說明書的要求進(jìn)行操作。 2.2.1.3 采樣器必須按儀器的檢定周期，定期對(duì)儀器作檢定，以保證測(cè)試數(shù)據(jù)的可靠性，檢驗(yàn)項(xiàng)目有：定時(shí)器，轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速，流量計(jì)。 2.2.1.4 每次測(cè)試前應(yīng)先接通電源，啟動(dòng)真空抽氣泵，然后調(diào)節(jié)流量計(jì)和定時(shí)器。 2.2.1.5 空氣采樣量根據(jù)需要選定，已知采樣器的流量（L/min）,設(shè)定采樣時(shí)間（min）兩者相乘即得采樣量（L）。 2.2.1.6 采樣口必須用便于消毒及化學(xué)性能穩(wěn)定的材料制造，采樣管嚴(yán)禁滲漏，內(nèi)壁應(yīng)光滑，采樣管的長度應(yīng)根據(jù)測(cè)定點(diǎn)的高度定，盡量減少彎曲。
3 測(cè)試方法
3.1 測(cè)試用儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。 3.1.1 采樣器進(jìn)入被測(cè)房間前先用消毒劑滅菌。 3.1.2 用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。 3.1.3 采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂盤、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面，采樣結(jié)束再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。 3.1.4 采樣口及采樣管使用前必須高溫滅菌，如用消毒劑對(duì)采樣管的外壁、內(nèi)壁進(jìn)行消毒，應(yīng)將管中的殘留液倒掉并晾干。 3.1.5 采樣者應(yīng)穿戴與被測(cè)潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒。
3.2 采樣程序 3.2.1 儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開動(dòng)真空泵抽氣，使儀器的殘余消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于5min，并調(diào)好流量、轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速。 3.2.2 關(guān)閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采樣品縫隙高度。 3.2.3 置采樣器于采樣點(diǎn)后，開啟采樣器、轉(zhuǎn)動(dòng)定時(shí)器，根據(jù)采樣量設(shè)定 采樣時(shí)間。
4 測(cè)試規(guī)則
4.1 測(cè)試狀態(tài) 4.1.1 浮游菌測(cè)試前微生物限度檢查室已經(jīng)消毒過。 4.1.2 測(cè)試狀態(tài)為靜態(tài)測(cè)試，并在報(bào)告中注明測(cè)試狀態(tài)。
4.2 測(cè)試人員 4.2.1 測(cè)試人員必須穿戴符和被測(cè)環(huán)境級(jí)別的工作服。 4.2.2 靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)人員不得多于2人。
4.3 測(cè)試時(shí)間 4.3.1 對(duì)單向流，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10min后開始。 4.3.2 對(duì)非單向流，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30min后開始。
4.4 最少采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置，最小采樣量，見下表：
4.4.1 工作區(qū)測(cè)點(diǎn)位置離地0.8m～1.5m左右，送風(fēng)口測(cè)點(diǎn)位置離開送風(fēng)面30cm左右；可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)。 4.4.2 每個(gè)采樣點(diǎn)一般采樣一次。 4.4.3 對(duì)于單向流或送風(fēng)口，采樣器采樣管口朝向應(yīng)正對(duì)氣流方向；對(duì)于非單向流，采樣管口向上。 4.4.4 布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應(yīng)離開塵粒較集中的回風(fēng)口1m以上。 4.4.5 采樣時(shí)，測(cè)試人員應(yīng)站在采樣口的下風(fēng)側(cè)。
5 培養(yǎng) 取樣結(jié)束后將平皿復(fù)倒置隔水式恒溫水浴培養(yǎng)箱內(nèi)于30～35℃培養(yǎng)48小時(shí)。并以未采樣的營養(yǎng)瓊脂平皿作對(duì)照皿。
6 菌落計(jì)數(shù)
6.1 用肉眼直接計(jì)數(shù)，然后用5-10倍放大鏡檢查，是否遺漏。
6.2 若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上菌落重疊，可分辨時(shí)，仍以2個(gè)或2個(gè)以上的菌落計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)：培養(yǎng)結(jié)束，將上述培養(yǎng)后的平皿取出，逐個(gè)點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)，必要時(shí)用放大鏡檢查，并記錄。
7 結(jié)果計(jì)算
7.1 平均菌落數(shù)的計(jì)算見下式：
式中：m 為該房間（或區(qū)域）的平均菌落數(shù)； m1、m2‥‥‥mn 為該房間（或區(qū)域）各取樣點(diǎn)的菌落數(shù)； N 為培養(yǎng)皿總數(shù)。
8 結(jié)論
8.1 潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。
8.2 若某潔凈室（區(qū)）的平均菌落數(shù)超過評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對(duì)此區(qū)域先行消毒，然后重新測(cè)試兩次，測(cè)試結(jié)果必須合格。
