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生活飲用水中的微生物指標(biāo)
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項(xiàng)目 |
單位 |
限值 |
說(shuō)明 |
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總大腸菌群 |
MPN/100mL或 CFU/100mL |
不得檢出 |
一般性污染 |
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大腸埃希氏菌 |
MPN/100mL或 CFU/100mL |
不得檢出 |
指示糞便污染 |
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菌落總數(shù) |
MPN/100mL或 CFU/100mL |
100 |
一般性污染 |
菌落總數(shù)
lmL水樣在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上,在有氧條件下36℃士l℃培養(yǎng)48h后,所得lml水樣中的菌落總數(shù).
檢測(cè)意義:作為一般性污染的指標(biāo),即評(píng)價(jià)被檢樣品的微生物污染程度和安全性。水樣菌落總數(shù)越多,說(shuō)明水被微生物污染程度越嚴(yán)重,病原微生物存在的可能性越大,但不能說(shuō)明污染的來(lái)源。
指一群在36℃士1℃培養(yǎng)24h能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。
檢測(cè)意義:作為糞便污染的指標(biāo)。水樣總大腸菌群的含量,表明水被糞便污染的程度，而且間接地表明有腸道致病菌存在的可能。
微生物指標(biāo)常規(guī)檢驗(yàn)流程圖
一、水樣采集
采樣原則：所采集的樣品具有代表性。
采樣容器:不能是新的污染源:不吸收或吸附某些待測(cè)組分不與待測(cè)組分發(fā)生反應(yīng)。保證從采樣到分析期間樣品各組分的濃度不發(fā)生改變。
微生物樣品必須按一般無(wú)菌操作的基本要求采集,并保證在運(yùn)送、貯存過(guò)程中不受污染。
注意事項(xiàng)
1.嚴(yán)格無(wú)菌操作。
2.做好標(biāo)記:采得水樣后應(yīng)立即記錄水樣名稱、地點(diǎn)、時(shí)間等內(nèi)容。
3.從速送檢。水樣從采集到檢驗(yàn)不應(yīng)超過(guò)2h,在0~4℃下保存不應(yīng)超過(guò)24h。
二、菌落總數(shù)測(cè)定-平皿計(jì)數(shù)法
所需培養(yǎng)基和試劑：營(yíng)養(yǎng)瓊脂、9ml無(wú)菌生理鹽水管。
自來(lái)水水樣檢測(cè)
操作步驟：
1.以無(wú)菌操作方法用滅菌吸管吸取1mL充分混勻的水樣,注入滅菌平皿中。
2.傾注約15mL已融化井冷卻到45℃左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,并立即旋搖平皿,使水與培養(yǎng)基充分混勻（每次檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)做一平行接種,同時(shí)另用一個(gè)平只傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂養(yǎng)基作為空白對(duì)照）
3.待冷卻凝固后,翻轉(zhuǎn)平皿,使底面向上,置于36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h±2h,進(jìn)行菌落計(jì)數(shù),即為水樣1mL中的菌落總數(shù)。
4.培養(yǎng)完成后，用眼睛直接觀察,必要時(shí)用放大鏡檢查,以防遺漏。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理:
若菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)按實(shí)有數(shù)報(bào)告,大于100時(shí),采用兩位有效數(shù)字,在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值,以四舍五入方法計(jì)算,為了縮短數(shù)字后面零的個(gè)數(shù)也可用10的指數(shù)來(lái)表示(見表1)。
國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB5749-2022)規(guī)定生活飲用水菌落總數(shù)每毫升不得超過(guò)100個(gè)。
水源水檢測(cè)
操作步驟：
1.以無(wú)操作方法吸取1mL充分混勻的水,注入盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中,混勻成1:10稀釋液。
2.吸取1:10的稀釋液1ml，注入盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中,混勻成1:100稀師液,按同法依次稀釋成1:1000,1:1000釋液等備用（如此遞增稀釋一次,必須更換一支1m滅菌管）。
3.然后用無(wú)菌極管取稀釋的水樣和2個(gè)~3個(gè)適釋度的水樣1mL,分別注入滅菌平皿內(nèi)。之后操作同自來(lái)水水樣的檢驗(yàn)步驟。
試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理:
計(jì)算平均菌落數(shù)，首先選擇平均菌落在30~300之間者進(jìn)行計(jì)算。
計(jì)算方法和報(bào)告方式：
一般水源水中菌落總數(shù)與水清潔程度的關(guān)系：
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水的類別 |
最清潔水 |
清潔水 |
不太清潔水 |
不清潔水 |
極不清潔水 |
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菌落總數(shù)CFU/100mL |
10-100 |
100 -1000 |
1000 -10000 |
10000 -100000 |
> 100000 |
注意事項(xiàng)
1.菌落總數(shù)測(cè)定中,應(yīng)選擇合適的稀釋度進(jìn)行(生活飲用水,國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每毫升不得超過(guò)100個(gè),因此以直接吸取1毫升到平板進(jìn)行培養(yǎng))
2.各稀釋管、相應(yīng)半皿做好標(biāo)記。包括:水樣名稱、稀釋度、時(shí)間、小組。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作進(jìn)行水樣稀釋時(shí),每一稀釋度均需更換吸管。
4.傾注時(shí),要注意營(yíng)養(yǎng)瓊脂的溫度。
5.傾入瓊脂后要混勻,待瓊脂凝固后倒置培養(yǎng)。
三、總大腸菌群測(cè)定
所需培養(yǎng)基和試劑：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基。
多管發(fā)酵法步驟:
初步發(fā)酵試驗(yàn):采用乳糖蛋白培養(yǎng)液36℃±1℃培養(yǎng)18-24h觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。
平板分離:
將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，于36 ℃士1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18 h~24 h,觀察菌落形態(tài),挑取符合下列特征的菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢:
--深紫黑色.具有金屬光澤的菌落﹔
--紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落﹔
--淡紫紅色、中心較深的菌落。
復(fù)發(fā)酵證實(shí)試驗(yàn):
經(jīng)上述染色鏡檢為革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌,同時(shí)接種乳糖蛋白豚培養(yǎng)液,置36 ℃士1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h士2h,有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者,即證實(shí)有總大腸菌群存在。
結(jié)果報(bào)告(MPN):根據(jù) GB5750.12-2022 所附檢索表報(bào)告結(jié)果。
四、耐熱大腸菌群測(cè)定
所需培養(yǎng)基和試劑：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、EC肉湯、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基
多管發(fā)酵法步驟:
初步發(fā)酵試驗(yàn):采用乳糖蛋白培養(yǎng)液36℃±1℃培養(yǎng)24h觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。
耐熱培養(yǎng):陽(yáng)性管接種在EC肉湯管中，44.5℃培養(yǎng)24h觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。
平板培養(yǎng):陽(yáng)性管接種在EMB平板上，36℃±1℃培養(yǎng)24h。
結(jié)果報(bào)告(MPN):根據(jù) GB5750.12-2023 所附檢索表報(bào)告結(jié)果。
不同細(xì)菌在EC肉湯中的生長(zhǎng)特征
五、大腸埃希氏菌測(cè)定
所需培養(yǎng)基和試劑：EC-MUG培養(yǎng)基
多管發(fā)酵法步驟:
耐熱培養(yǎng):將總大腸菌群初發(fā)酵中產(chǎn)酸或產(chǎn)氣的管進(jìn)行大腸埃希氏菌檢測(cè)，接種此類試管中的液體到EC-MUG管中，在培養(yǎng)箱或恒溫水浴中44.5℃培養(yǎng)24h。如使用恒溫水浴，在接種后30min內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，使水浴液面超過(guò)EC-MUG管的液面。
結(jié)果報(bào)告(MPN):
將培養(yǎng)后的EC-MUG管在暗處用366nm紫外燈照射，如有藍(lán)色熒光，則表明水樣中含有大腸埃希氏菌。
計(jì)算EC-MUG陽(yáng)性管數(shù)，根據(jù) GB5750.12-2023 所附檢索表報(bào)告結(jié)果。
生活飲用水中微生物檢測(cè)方法總結(jié)
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