中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院綜合檢測(cè)中心 王芳 王凱 樊赟

北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司 劉沛 王磊

      近年來(lái)，我國(guó)食品安全事故頻發(fā)，痛定思痛，人們已經(jīng)越來(lái)越重視飲食安全。而由微生物引起的食品污染問(wèn)題作為食品安全的重要內(nèi)容也受到了廣泛關(guān)注。在食品生產(chǎn)過(guò)程中，從生產(chǎn)加工到運(yùn)輸銷售，各個(gè)環(huán)節(jié)都有可能被微生物污染，因此對(duì)食品進(jìn)行微生物檢測(cè)必不可少。另外，隨著經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展，社會(huì)商品的流通量和流通速度大大增加，食品將面臨很大的微生物污染風(fēng)險(xiǎn)，但傳統(tǒng)微生物檢測(cè)方法不僅操作繁瑣，檢測(cè)周期長(zhǎng)，而且對(duì)檢測(cè)人員要求高，很難滿足現(xiàn)代商品快速流通的發(fā)展要求，甚至影響到整個(gè)食品行業(yè)的發(fā)展。因此，人們開始尋找一種快速、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確的微生物檢測(cè)方法，北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司推出了一種可滿足該要求的Easy TestTM測(cè)試片（在圖中簡(jiǎn)稱“ET測(cè)試片”）。

      Easy TestTM測(cè)試片利用了特異性酶與特異性顯色底物反應(yīng)的原理，使目標(biāo)菌與非目標(biāo)菌呈現(xiàn)可明顯區(qū)別的不同特異性顏色；Easy TestTM測(cè)試片的培養(yǎng)載體采用了無(wú)紡布和水溶性營(yíng)養(yǎng)底物的設(shè)計(jì)，具有良好的吸水性，可快速吸收測(cè)試液，使微生物自動(dòng)均勻分布于無(wú)紡布上，為測(cè)試液和營(yíng)養(yǎng)底物創(chuàng)造了一個(gè)固定的混合區(qū)域；Easy TestTM測(cè)試片為一次性即用產(chǎn)品，操作簡(jiǎn)便、無(wú)需耗費(fèi)大量人力配制培養(yǎng)基和高壓滅菌、后續(xù)廢棄物的處理工作簡(jiǎn)單、環(huán)保，并且最重要的是可以有效縮短檢測(cè)時(shí)間、提高檢測(cè)效率，非常適用于食品微生物檢測(cè)和環(huán)境衛(wèi)生監(jiān)測(cè)。

      為驗(yàn)證Easy TestTM測(cè)試片的準(zhǔn)確性和適用性，本文將Easy TestTM測(cè)試片與3M PetrifilmTM測(cè)試片（在圖中簡(jiǎn)稱3M測(cè)試片）和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中的傳統(tǒng)培養(yǎng)法進(jìn)行樣品比對(duì)試驗(yàn)。檢測(cè)項(xiàng)目包括菌落總數(shù)、大腸桿菌計(jì)數(shù)和大腸菌群計(jì)數(shù)，具體試驗(yàn)過(guò)程與試驗(yàn)結(jié)果如下。

      試驗(yàn)方法

      選取100份食品樣品，包括肉制品、乳制品、蔬菜、豆制品、水果、油炸食品、面點(diǎn)、飲料、水產(chǎn)品、速凍食品和調(diào)味品，以國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法GB 4789-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)》為檢測(cè)依據(jù)，采用Easy TestTM測(cè)試片、3M PetrifilmTM測(cè)試片和國(guó)標(biāo)的傳統(tǒng)培養(yǎng)基法分別測(cè)定各個(gè)樣品的菌落總數(shù)、大腸桿菌數(shù)和大腸菌群數(shù)，再將Easy TestTM測(cè)試片的結(jié)果分別與3M PetrifilmTM測(cè)試片和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中的傳統(tǒng)培養(yǎng)法得到的結(jié)果進(jìn)行比較，然后根據(jù)相關(guān)性判斷Easy TestTM測(cè)試片的準(zhǔn)確度和適用性。 

      試驗(yàn)結(jié)果與分析

      菌落總數(shù)試驗(yàn)

      Easy TestTM菌落總數(shù)測(cè)試片以TTC（氯化三苯四氮唑，一種氧化還原指示劑）為顯色物質(zhì)，TTC接受微生物呼吸鏈產(chǎn)生的氫后可形成非水溶性的紅色三苯甲脂，紅色三苯甲脂經(jīng)微生物作用會(huì)在Easy TestTM測(cè)試片的無(wú)紡布上形成紅色點(diǎn)狀物（Easy TestTM測(cè)試片上的菌落分布情況見圖3），通過(guò)計(jì)數(shù)紅點(diǎn)，即可獲得菌落總數(shù)。Easy TestTM菌落總數(shù)測(cè)試片的培養(yǎng)條件為36±1℃，48±3h。

      由圖1和圖2可以看出，Easy TestTM菌落總數(shù)測(cè)試片與3M PetrifilmTM測(cè)試片所得菌落總數(shù)值的相關(guān)系數(shù)為0.9913，而Easy TestTM菌落總數(shù)測(cè)試片與PCA平板所得菌落總數(shù)值的相關(guān)系數(shù)為0.9967。可見，Easy TestTM測(cè)試片與PCA平板法具有良好的一致性，而Easy TestTM測(cè)試片與3M測(cè)試片一致性要低于Easy TestTM測(cè)試片與PCA平板法的一致性。通過(guò)分析，我們發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)此種結(jié)果的原因?yàn)槟承�樣品�?st1:chmetcnv w:st="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="3" unitname="m">3M測(cè)試片上出現(xiàn)液化現(xiàn)象，使測(cè)試片無(wú)法準(zhǔn)確計(jì)數(shù)，而Easy TestTM測(cè)試片采用了無(wú)紡布設(shè)計(jì)，可以完全避免液化現(xiàn)象，從而得到更真實(shí)、更準(zhǔn)確的數(shù)值，適用性也更廣。

     圖1 ET測(cè)試片與3M測(cè)試片的相關(guān)性                 圖2 ET測(cè)試片與PCA平板的相關(guān)性

圖3 Easy TestTM測(cè)試片上的菌落分布情況

      大腸桿菌/大腸菌群試驗(yàn)

      Easy TestTM大腸桿菌/大腸菌群測(cè)試片測(cè)試原理為：大腸桿菌和大腸菌群中的特異性酶降解顯色底物，打破底物原有結(jié)構(gòu)，釋放出顯色因子，從而使大腸桿菌顯示為靛藍(lán)色或紫色菌落，其他大腸菌群顯示為藍(lán)綠色菌落，然后進(jìn)行計(jì)數(shù)。Easy TestTM大腸桿菌/大腸菌群測(cè)試片的培養(yǎng)條件為36±1℃，24±1h。

      100份試驗(yàn)樣品中僅有7份樣品檢出大腸桿菌，結(jié)果見表1，Easy TestTM測(cè)試片與3M測(cè)試片和GB/T 4789.38-2008平板計(jì)數(shù)法的檢測(cè)結(jié)果都具有較好的一致性。

      表1 大腸桿菌檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果

      大腸菌群計(jì)數(shù)傳統(tǒng)方法采用GB 4789.3-2010《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)》中第二法平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行，圖6為大腸桿菌和大腸菌群在Easy TestTM測(cè)試片上的生長(zhǎng)情況。由圖4、圖5可以看出，Easy TestTM大腸桿菌/大腸菌群測(cè)試片和3M測(cè)試片所得出的數(shù)值相關(guān)系數(shù)為0.9522，而Easy TestTM大腸桿菌/大腸菌群測(cè)試片與傳統(tǒng)方法的相關(guān)系數(shù)為0.9648。Easy TestTM測(cè)試片與傳統(tǒng)方法的相關(guān)性要略高于和3M測(cè)試片的相關(guān)性，原因可能是3M測(cè)試片在壓片過(guò)程中會(huì)有部分樣液被壓出計(jì)數(shù)范圍，從而使整個(gè)計(jì)數(shù)結(jié)果產(chǎn)生偏差。而Easy TestTM測(cè)試片由于有無(wú)紡布作為固定培養(yǎng)區(qū)域，且吸水性良好，故可避免此問(wèn)題。

圖6 大腸桿菌和大腸菌群在ET測(cè)試片上的生長(zhǎng)情況

      目前，測(cè)試片作為一種微生物快速檢測(cè)產(chǎn)品已經(jīng)逐步被廣大檢測(cè)工作者所接受，測(cè)試片法所利用的特異性酶與特異性顯色底物的反應(yīng)原理也被大家所信任。Easy TestTM測(cè)試片采用無(wú)紡布為載體，不僅可以快速自動(dòng)吸收測(cè)試液，省卻壓片操作，還可有效避免人為操作對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。此外，使用Easy TestTM測(cè)試片進(jìn)行測(cè)試時(shí)，測(cè)試液在一個(gè)固定的區(qū)域內(nèi)，不會(huì)外溢，這使計(jì)數(shù)結(jié)果更加準(zhǔn)確，同時(shí)也避免了樣液污染。也正是因?yàn)榫哂辛艘陨媳姸鄡?yōu)點(diǎn)，Easy TestTM測(cè)試片已經(jīng)廣泛應(yīng)用于食品檢測(cè)領(lǐng)域。