滅菌（sterilization）系指用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活的微生物殺滅或除去的過程。

無菌物品

無菌物品是指物品中不含任何活的微生物。

非無菌概率

對于任何一批無菌物品而言，絕對無菌既無法保證也無法用試驗來證實。一批物品的無菌特性只能通過物品中活微生物的概率來表述，即非無菌概率（Probability of a Nonsterile Unit，PNSU）或無菌保證水平（Sterility Assurance Level，SAL）。已滅菌物品達(dá)到的非無菌概率可通過驗證確定。

無菌物品的無菌保證不能依賴于最終產(chǎn)品的無菌檢驗，而是取決于生產(chǎn)過程中采用經(jīng)過驗證的滅菌工藝、嚴(yán)格的GMP管理和良好的無菌保證體系。

滅菌工藝的開發(fā)

（1）滅菌工藝的開發(fā)應(yīng)綜合考慮被滅菌物品的性質(zhì)、滅菌方法的有效性、滅菌后物品的完整性和穩(wěn)定性，并兼顧經(jīng)濟(jì)性等因素。

只要物品允許，應(yīng)盡可能選用最終滅菌工藝滅菌。

若物品不適合采用最終滅菌工藝，應(yīng)選用無菌生產(chǎn)工藝達(dá)到無菌保證要求。

（2）綜合考慮滅菌工藝的滅菌能力和對滅菌物品的影響，滅菌工藝可以分為過度殺滅法、生物負(fù)載/生物指示劑法（也被稱為殘存概率法）和生物負(fù)載法。

（3）對耐受的滅菌物品，通常選用過度殺滅法。

（4）物品的無菌保證與滅菌工藝、滅菌前物品的生物負(fù)載相關(guān)。

（5）滅菌工藝開發(fā)時，需要對物品污染的微生物種類、數(shù)目及其耐受性進(jìn)行綜合評估。

滅菌工藝的日常監(jiān)控

（1）日常生產(chǎn)中，應(yīng)對滅菌工藝的運行情況進(jìn)行監(jiān)控，確認(rèn)關(guān)鍵參數(shù)（如溫度、壓力、時間、濕度、滅菌氣體濃度及吸收的輻射劑量等）均在驗證確定的范圍內(nèi)。

（2）應(yīng)持續(xù)評估滅菌工藝的有效性及被滅菌物品的安全性和穩(wěn)定性，并建立相應(yīng)的變更和偏差控制程序，確保滅菌工藝持續(xù)處于受控狀態(tài)。

（2）滅菌工藝應(yīng)定期進(jìn)行再驗證。

（3）當(dāng)滅菌設(shè)備或程序發(fā)生變更（包括滅菌物品裝載方式和數(shù)量的改變）時，應(yīng)進(jìn)行重新驗證。

（4）驗證及日常監(jiān)控階段，可根據(jù)風(fēng)險評估的結(jié)果對微生物的種類、數(shù)目及耐受性進(jìn)行監(jiān)控。

（5）在生產(chǎn)的各個環(huán)節(jié)應(yīng)采取各種措施降低生物負(fù)載，確保生物負(fù)載控制在規(guī)定的限度內(nèi)。

（6）滅菌結(jié)束后，應(yīng)采取措施防止已滅菌物品被再次污染。

（7）任何情況下，都應(yīng)要求容器及其密封系統(tǒng)確保物品在有效期內(nèi)符合無菌要求。

滅菌方法

常用的滅菌方法有濕熱滅菌法、干熱滅菌法、輻射滅菌法、氣體滅菌法、過濾除菌法、汽相滅菌法、液相滅菌法�？筛鶕�(jù)被滅菌物品的特性采用一種或多種方法組合滅菌。

濕熱滅菌法

濕熱滅菌法指將物品置于滅菌設(shè)備內(nèi)利用飽和蒸汽、蒸汽-空氣混合物、蒸汽-空氣-水混合物、過熱水等手段使微生物菌體中的蛋白質(zhì)、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物的方法。該法滅菌能力強(qiáng)，為熱力滅菌中最有效、應(yīng)用最廣泛的滅菌方法。藥品、容器、培養(yǎng)基、無菌衣、膠塞以及其他遇高溫和潮濕性能穩(wěn)定的物品，均可采用本法滅菌。流通蒸汽不能有效殺滅細(xì)菌孢子，一般可作為不耐熱無菌產(chǎn)品的輔助處理手段。

（1）濕熱滅菌工藝的開發(fā)應(yīng)考慮被滅菌物品的熱穩(wěn)定性、熱穿透性、生物負(fù)載等因素。

（2）濕熱滅菌通常采用溫度-時間參數(shù)或者結(jié)合F0值（F0值為標(biāo)準(zhǔn)滅菌時間，是滅菌過程賦予被滅菌物品121℃下的等效滅菌時間）綜合考慮，無論采用何種控制參數(shù)，都必須證明所采用的滅菌工藝和監(jiān)控措施在日常運行過程中能確保物品滅菌后的PNSU≤10-6。

（3）多孔或堅硬物品等可采用飽和蒸汽直接接觸的方式進(jìn)行滅菌，滅菌過程中應(yīng)充分去除腔體和待滅菌物品中的空氣和冷凝水，以避免殘留空氣阻止蒸汽到達(dá)所有暴露的表面，從而破壞飽和蒸汽的溫度-壓力關(guān)系。

（4）對裝有液體的密閉容器進(jìn)行滅菌，滅菌介質(zhì)先將熱傳遞到容器表面，再通過傳導(dǎo)和對流的方式來實現(xiàn)內(nèi)部液體的滅菌，必要時可采用空氣過壓的方式平衡容器內(nèi)部和滅菌設(shè)備腔體之間的壓差，避免影響容器的密閉完整性。

（5）被滅菌物品應(yīng)有適當(dāng)?shù)难b載方式。裝載方式的確認(rèn)應(yīng)考慮被滅菌物品最大、最小和生產(chǎn)過程中典型的裝載量和排列方式等，確保滅菌的有效性和重現(xiàn)性。

（6）裝載熱分布試驗應(yīng)盡可能使用被滅菌物品，如果采用類似物替代，應(yīng)結(jié)合物品的熱力學(xué)性質(zhì)等進(jìn)行適當(dāng)?shù)娘L(fēng)險評估。

（7）熱穿透試驗應(yīng)將足夠數(shù)量的溫度探頭置于被滅菌物品內(nèi)部的冷點。如有數(shù)據(jù)支持或有證據(jù)表明將探頭置于物品外部也能反映出物品的熱穿透情況，也可以考慮將探頭置于物品外部。

（8）微生物挑戰(zhàn)試驗用來進(jìn)一步確認(rèn)滅菌效果，生物指示劑的放置位置應(yīng)結(jié)合被滅菌物品的特點、裝載熱分布以及熱穿透試驗結(jié)果來確定。

（9）應(yīng)根據(jù)滅菌工藝選擇適宜的生物指示劑。過度殺滅法常用的生物指示劑為嗜熱脂肪地芽孢桿菌，熱不穩(wěn)定性物品滅菌常用的生物指示劑為生孢梭菌，枯草芽孢桿菌和凝結(jié)芽孢桿菌。

（10）對于采用生物負(fù)載/生物指示劑法和生物負(fù)載法的滅菌工藝，日常生產(chǎn)全過程應(yīng)對物品中污染的微生物進(jìn)行連續(xù)地、嚴(yán)格地監(jiān)控，并采取各種措施降低微生物污染水平，特別是防止耐熱菌的污染。

（11）濕熱滅菌在冷卻階段應(yīng)采取措施防止已滅菌物品被再次污染。

干熱滅菌法

干熱滅菌法是指將物品置于干熱滅菌柜、隧道滅菌器等設(shè)備中，利用干熱空氣達(dá)到殺滅微生物或消除熱原物質(zhì)的方法。適用于耐高溫但不宜用濕熱滅菌法滅菌的物品滅菌，如玻璃器具、金屬制容器、纖維制品、陶瓷制品、固體試藥、液狀石蠟等均可采用本法滅菌。

（1）干熱滅菌法的工藝開發(fā)應(yīng)考慮被滅菌物品的熱穩(wěn)定性、熱穿透力、生物負(fù)載(或內(nèi)毒素污染水平)等因素。

（2）干熱滅菌條件采用溫度-時間參數(shù)或者結(jié)合FH值(FH值為標(biāo)準(zhǔn)滅菌時間，是滅菌過程賦予被滅菌物品160℃下的等效滅菌時間)綜合考慮。干熱滅菌溫度范圍一般為160～190℃，當(dāng)用于除熱原時，溫度范圍一般為170～400℃，無論采用何種滅菌條件，均應(yīng)保證滅菌后的物品的PNSU≤10-6。

（3）裝載方式的確認(rèn)應(yīng)考慮被滅菌物品最大和最小的裝載量和排列方式等。

對于連續(xù)干熱滅菌設(shè)備還應(yīng)考慮傳送帶運轉(zhuǎn)時不同位置可能產(chǎn)生的溫度差異，同時應(yīng)關(guān)注熱力難以穿透的物品，以保證滅菌的有效性和重現(xiàn)性。

（4）由于干熱滅菌法空氣熱導(dǎo)性較差，應(yīng)通過熱分布和熱穿透試驗確認(rèn)冷點能夠達(dá)到預(yù)期的滅菌效果。

（5）微生物挑戰(zhàn)試驗用生物指示劑通常選擇萎縮芽孢桿菌（Bacillus astrophaeus）。

（6）細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗證試驗是證明除熱原過程有效性的試驗。一般將不小于1000單位的細(xì)菌內(nèi)毒素加入待去熱原的物品中，證明該去熱原工藝能使內(nèi)毒素至少下降3個對數(shù)單位。

（7）細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗證試驗所用的細(xì)菌內(nèi)毒素一般為大腸埃希菌內(nèi)毒素(Escherichia coli endoxin)。

（8）滅菌設(shè)備內(nèi)的空氣應(yīng)當(dāng)循環(huán)并保持正壓。

（9）進(jìn)入干熱滅菌生產(chǎn)設(shè)備的空氣應(yīng)當(dāng)經(jīng)過高效過濾器過濾，高效過濾器應(yīng)定期進(jìn)行檢漏測試以確認(rèn)其完整性。

輻射滅菌法

輻射滅菌法是指利用電離輻射殺滅微生物的方法。常用的輻射射線有60Co或137Cs衰變產(chǎn)生的γ射線、電子加速器產(chǎn)生的電子束和X射線裝置產(chǎn)生的X射線。

（1）能夠耐輻射的醫(yī)療器械、生產(chǎn)輔助用品、藥品包裝材料、原料藥及成品等均可用本法滅菌。

（2）輻射滅菌工藝的開發(fā)應(yīng)考慮被滅菌物品對電離輻射的耐受性以及生物負(fù)載等因素。

（3）為保證滅菌過程不影響被滅菌物品的安全性、有效性及穩(wěn)定性，應(yīng)確定最大可接受劑量。

（4）輻射滅菌控制的參數(shù)主要是輻射劑量(指滅菌物品的吸收劑量)，滅菌劑量的建立應(yīng)確保物品滅菌后的PNSU≤10-6。

（5）輻射滅菌應(yīng)盡可能采用低輻射劑量。

（6）輻射滅菌驗證的關(guān)鍵在于劑量分布測試，在開展劑量分布測試前，應(yīng)規(guī)定滅菌物品的包裝形式、密度以及裝載模式等。通過劑量分布測試，確定滅菌過程的最大和最小劑量值及其位置，如果日常監(jiān)測使用參照計量位置，還需確定其劑量值與最大和最小劑量值之間的關(guān)系。

（7）輻射滅菌一般不采用生物指示劑進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)試驗。

（8）日常使用中，應(yīng)進(jìn)行生物負(fù)載監(jiān)控和定期劑量審核，確保輻射滅菌效果及劑量的持續(xù)有效。

（9）滅菌時，應(yīng)采用劑量計對滅菌物品吸收的輻射劑量進(jìn)行監(jiān)控，劑量計放置的位置應(yīng)經(jīng)驗證確定，以充分證實滅菌物品吸收的劑量是在規(guī)定的限度內(nèi)。

（10）劑量測量應(yīng)溯源到國家標(biāo)準(zhǔn)或是國際標(biāo)準(zhǔn)。

氣體滅菌法

氣體滅菌法是指用化學(xué)滅菌劑形成的氣體殺滅微生物的方法。本法最常用的化學(xué)滅菌劑是環(huán)氧乙烷，一般與80%～90%的惰性氣體混合使用，在充有滅菌氣體的高壓腔室內(nèi)進(jìn)行。

（1）采用氣體滅菌法時，應(yīng)注意滅菌氣體的可燃可爆性、致畸性和殘留毒性。

（2）該法適用于不耐高溫、不耐輻射物品的滅菌，如醫(yī)療器械、塑料制品和藥品包裝材料等，干粉類產(chǎn)品不建議采用本法滅菌。

（3）采用本法滅菌需確認(rèn)經(jīng)過解析工藝后，滅菌氣體和反應(yīng)產(chǎn)物殘留量不會影響被滅菌物品的安全性、有效性和穩(wěn)定性。

（4）采用環(huán)氧乙烷滅菌時，腔室內(nèi)的溫度、濕度、滅菌氣體濃度、滅菌時間是影響滅菌效果的重要因素。

（5）氣體滅菌工藝的驗證，應(yīng)考慮物品包裝材料和滅菌腔室中物品的排列方式對滅菌氣體的擴(kuò)散和滲透的影響。

（6）環(huán)氧乙烷氣體滅菌的生物指示劑一般采用萎縮芽孢桿菌(Bacillus atrophaeus)。

（7）采用環(huán)氧乙烷滅菌時，應(yīng)進(jìn)行泄漏試驗，以確認(rèn)滅菌腔室的密閉性。

（8）滅菌后，可通過經(jīng)驗證的解析步驟，使殘留環(huán)氧乙烷和其他易揮發(fā)性殘留物消散，并對滅菌物品中的環(huán)氧乙烷殘留物和反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行監(jiān)控，以證明其不超過規(guī)定的濃度，避免產(chǎn)生毒性。

過濾除菌法

過濾除菌法是指采用物理截留去除氣體或液體中微生物的方法。常用于氣體、熱不穩(wěn)定溶液的除菌。

（1）過濾除菌工藝開發(fā)時，應(yīng)根據(jù)待過濾介質(zhì)屬性及工藝目的選擇合適的過濾器。

（2）除菌級過濾器的濾膜孔徑選用0.22μm(或更小孔徑或相同過濾效力)，過濾器的孔徑定義來自過濾器對微生物的截留能力，而非平均孔徑的分布系數(shù)。

（3）選擇過濾器材質(zhì)時，應(yīng)充分考察其與待過濾介質(zhì)的兼容性。過濾器不得因與待過濾介質(zhì)發(fā)生反應(yīng)、釋放物質(zhì)或吸附作用而對過濾產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生不利影響，不得有纖維脫落，禁用含石棉的過濾器。

（4）為保證過濾除菌效果，可使用兩個除菌級的過濾器串聯(lián)過濾，主過濾器前增加的除菌級過濾器即為冗余過濾器，并須保證這兩級過濾器之間的無菌性。

（5）過濾除菌法常用的挑戰(zhàn)微生物為缺陷短波單胞菌（Brevundimonas diminuta）。

（6）除菌級過濾器的截留試驗要求是在規(guī)定條件下，在有效過濾面積內(nèi)每平方厘米截留缺陷短波單胞菌的能力達(dá)到107cfu，但在有些情況下，缺陷短波單胞菌不能代表最差條件，則需要考慮采用生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)的最差條件細(xì)菌進(jìn)行截留試驗。

（7）在每一次過濾除菌后應(yīng)立即進(jìn)行濾器的完整性試驗，即起泡點試驗、擴(kuò)散流/前進(jìn)流試驗或水侵入法測試，確認(rèn)濾膜在除菌過濾過程中的有效性和完整性。

（8）過濾除菌前是否進(jìn)行完整性測試可根據(jù)風(fēng)險評估確定。

（9）滅菌前進(jìn)行完整性測試應(yīng)考慮濾芯在滅菌過程中被損壞的風(fēng)險；滅菌后進(jìn)行完整性測試應(yīng)采取措施保證過濾器下游的無菌性。

（10）過濾除菌前，產(chǎn)品的生物負(fù)載應(yīng)控制在規(guī)定的限度內(nèi)。過濾器使用前必須經(jīng)過滅菌處理（如在線或離線蒸汽滅菌，輻射滅菌等）。

（11）在線蒸汽滅菌的設(shè)計及操作過程應(yīng)關(guān)注濾芯可耐受的最高壓差及溫度。

（12）與過濾除菌相關(guān)的設(shè)備、包裝容器及其他物品應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行滅菌，并防止再污染。

汽相滅菌法

汽相滅菌法是指通過分布在空氣中的滅菌劑殺滅微生物的方法。常用的滅菌劑包括過氧化氫（H2O2）、過氧乙酸（CH3CO3CH）等。汽相滅菌適用于密閉空間的內(nèi)表面滅菌。

1、汽相滅菌效果與滅菌劑量（一般是指注入量）、相對濕度和溫度有關(guān)。

2、裝載方式的確認(rèn)應(yīng)考慮密閉空間內(nèi)部物品的裝載量和排列方式。

3、微生物挑戰(zhàn)試驗用來確認(rèn)滅菌效果，生物指示劑的放置位置應(yīng)包括滅菌劑最難到達(dá)的位置。

4、汽相滅菌用生物指示劑一般為嗜熱脂肪地芽孢桿菌（Geobacillus stearothermophilus）、萎縮芽孢桿菌（Bacillus atrophaeus）、生孢梭菌（Clostridium sporogenes）等。

5、日常使用中，汽相滅菌前滅菌物品應(yīng)進(jìn)行清潔。

6、滅菌時應(yīng)最大限度地暴露表面，確保滅菌效果。

7、滅菌后應(yīng)將滅菌劑殘留充分去除或滅活。

液相滅菌法

液相滅菌法是指將被滅菌物品完全浸泡于滅菌劑中達(dá)到殺滅物品表面微生物的方法。具備滅菌能力的滅菌劑包括：甲醛、過氧乙酸、氫氧化鈉、過氧化氫、次氯酸鈉等。

1、滅菌劑種類的選擇應(yīng)考慮滅菌物品的耐受性。

2、滅菌劑濃度、溫度、pH值、生物負(fù)載、滅菌時間、被滅菌物品表面的污染物等是影響滅菌效果的重要因素。

3、滅菌工藝驗證時，應(yīng)考慮滅菌物品表面積總和最大的裝載方式，并確保滅菌劑能夠接觸到所有表面，如狹小孔徑物品的內(nèi)表面。

4、微生物挑戰(zhàn)試驗常用的生物指示劑是萎縮芽孢桿菌（Bacillus atrophaeus）和枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）。

5、通過重復(fù)試驗來驗證滅菌劑濃度和滅菌時間等滅菌參數(shù)條件。

6、滅菌后應(yīng)將滅菌劑殘留充分去除或滅活。

7、滅菌劑殘留去除階段，應(yīng)采取措施防止已滅菌物品被再次污染。

8、使用滅菌劑的全過程都應(yīng)采取適當(dāng)?shù)陌踩�措施�?/span>