常用標(biāo)準(zhǔn)

(1) GB/T 4789.3-2003 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 大腸菌群測定

(2) GB 4789.3-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 大腸菌群計數(shù)

(3) GB 4789.28-2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求

(4) GB 4789.1-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 總則

(5) GB 4789.41-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 腸桿科檢驗

(6) GB/T 27405-2008 實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品微生物檢測

(7) GB/T 16294-2010 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)） 沉降菌的測試方法

常見問題及解答

1：食品中大腸菌群的檢測有兩個標(biāo)準(zhǔn)三種方法，該如何選擇呢？

A：依據(jù)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的項目單λ

1.1、若單λ為CFU/g，則選擇GB 4789.3-2016第二法（平板計數(shù)法）

1.2、若單λ為MPN/g，則選擇GB 4789.3-2016第一法（MPN計數(shù)法）

1.3、若單λ為MPN/100g，則選擇GB/T 4789.3-2003。

2：MPN法3個適宜的連續(xù)稀釋度該怎樣選擇？

A：依據(jù)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的項目標(biāo)準(zhǔn)值

2.1、若標(biāo)準(zhǔn)值為＜3.0MPN/g，則選擇0.1g、0.01g、0.001g三個稀釋度。

2.2、若標(biāo)準(zhǔn)值為≤30MPN/100g，則選擇1g、0.1g、0.01g三個稀釋度。

樣品采集

怎樣采樣，才能使樣品具有代表性？

這里將樣品分為兩類：預(yù)包裝食品和散裝食品或現(xiàn)場制作食品

（1）、對于預(yù)包裝食品

① 應(yīng)采集相同批次、獨立包裝、適量件數(shù)的食品樣品，ÿ件樣品的采樣量應(yīng)滿足微生物項目檢驗的要求。

② 獨立包裝小于、等于1000g 的固態(tài)食品或小于、等于1000mL 的液態(tài)食品，取相同批次的包裝。

③ 獨立包裝大于1000mL 的液態(tài)食品，應(yīng)在采樣前搖動或用無菌棒攪拌液體，使其達(dá)到均質(zhì)后采集適量樣品，放入同一個無菌采樣容器內(nèi)作為一件食品樣品；大于1000g 的固態(tài)食品，應(yīng)用無菌采樣器從同一包裝的不同部λ分別采取適量樣品，放入同一個無菌采樣容器內(nèi)作為一件食品樣品。

（2）、對于散裝食品或現(xiàn)場制作食品

用無菌采樣工具從 n 個不同部λ現(xiàn)場采集樣品，放入 n 個無菌采樣容器內(nèi)作為 n 件食品樣品。ÿ件樣品的采樣量應(yīng)滿足微生物項目檢驗單λ的要求。

培養(yǎng)基制備過程容易出現(xiàn)問題解答

1、異�，F(xiàn)象一：培養(yǎng)基不凝固

原因分析：

①制備過程中過度加熱；

②低pH造成培養(yǎng)基酸解；

③稱量不正確；

④瓊脂δ完全溶解；

⑤培養(yǎng)基成分δ充分混勻。

2、異�，F(xiàn)象二：pH不正確

原因分析：

①制備過程中過度加熱；

②水質(zhì)不佳；

③外部化學(xué)物質(zhì)污染；

④測定pH時溫度不正確；

⑤pH計δ正確校準(zhǔn)；

⑥脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差。

3、異�，F(xiàn)象三：顏色異常

原因分析：

①制備過程中過度加熱；

②水質(zhì)不佳；

③pH不正確；

④外來污染；

⑤脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差。

4、異�，F(xiàn)象四：產(chǎn)生沉淀

原因分析：

①制備過程中過度加熱；

②水質(zhì)不佳；

③脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差；

④pH計δ正確控制。

5、異�，F(xiàn)象五：培養(yǎng)基出現(xiàn)抑制/低的生長率

原因分析：

①制備過程中過度加熱；

②脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差；

③水質(zhì)不佳；

④使用成分不正確，如：成分稱量不準(zhǔn)，添加劑濃度不正確；

⑤制備容器或水中的有毒殘留物。

6、異常現(xiàn)象六：選擇性差

原因分析：

①制備過程中過度加熱；

②脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差；

③配方使用不對；

④添加成分的加入不正確，例如加入添加成分時培養(yǎng)基過熱或添加濃度錯誤；

⑤添加劑污染。

7、異�，F(xiàn)象七：污染

原因分析：

①不適當(dāng)?shù)臏缇��?/span>

②無菌操作技術(shù)存在問題；

③添加劑污染。

實驗過程

1、2016版平板法VRBA傾注完，待瓊脂凝固后為什ô需要加3-4mL的覆蓋層？

A：因為大腸菌群是需氧及兼性厭氧的，再加一層瓊脂相當(dāng)于造就一個半?yún)捬醐h(huán)境，促進(jìn)兼性厭氧菌的生長，同時抑制其他菌的生長。除此之外，還有防止菌落蔓延的作用，防止遷徙性菌落對菌落計數(shù)構(gòu)成影響。例如一些變形桿菌就會有遷徙現(xiàn)象，從而導(dǎo)致菌落長成一片無法區(qū)分。在表面多覆蓋一層培養(yǎng)基就可以避免這種情況的發(fā)生。

2、GB 4789.3-2016平板法驗證菌落如何挑��？

A：分別計數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落數(shù)。按比例挑取10個不同類型的典型和可疑菌落,少于10個菌落的挑取全部典型和可疑菌落。假如在1:10的平板上可疑大腸菌群有10個，典型大腸菌群有6個。證實實驗應(yīng)該按照可疑跟典型5:3的比例進(jìn)行挑取，移種于BGLB肉湯管內(nèi)。

結(jié)果處理

按標(biāo)準(zhǔn)里的詳細(xì)規(guī)定對大腸菌群進(jìn)行計數(shù)。

注意：對于結(jié)果檢出的平板或試管需要經(jīng)過無害化處理（121℃滅菌30分鐘）方能棄去，防止對環(huán)境造成污染。