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食品中菌落總數(shù)檢測的能力驗(yàn)證操作過程分享

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2022-06-13
核心提示:菌落總數(shù)小常識(shí)菌落總數(shù)的測定方法,看似非常簡單,但由于食品種類繁多,食品中可能存在的微生物菌群較多,要在同等條件下把所有
 菌落總數(shù)小常識(shí)

菌落總數(shù)的測定方法,看似非常簡單,但由于食品種類繁多,食品中可能存在的微生物菌群較多,要在同等條件下把所有的細(xì)菌培養(yǎng)出來,反應(yīng)樣品的真實(shí)情況,實(shí)屬不易。

 

一、能力實(shí)驗(yàn)的目的

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開展能力驗(yàn)證試驗(yàn)是檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢測能力和提高檢測水平的重要手段。利用實(shí)驗(yàn)室間的比對(duì),對(duì)實(shí)驗(yàn)室的校準(zhǔn)或檢驗(yàn)工作進(jìn)行判定。

關(guān)鍵是,能力驗(yàn)證是考察實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)?zāi)芰Φ耐獠抠|(zhì)量活動(dòng),組織方提供試驗(yàn)樣本,在菌落總數(shù)項(xiàng)目上,一般會(huì)考慮增加上述難度。

 

二、測定標(biāo)準(zhǔn)

 

食品國家標(biāo)準(zhǔn):GB 4789.2-2016 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測定》

 

三、操作過程

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(一)、前期做好充足的準(zhǔn)備工作

根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn),提前準(zhǔn)備好要用的平板計(jì)數(shù)瓊脂、平皿、試管、稀釋液(生理鹽水)、三角燒瓶等。


(二)、樣品接受:

收到樣品后,確認(rèn)樣品包裝是否完好,并將其保存在2~8℃冰箱中,然后在能力驗(yàn)證平臺(tái)進(jìn)行確認(rèn)。


(三)、樣品處理:

按照作業(yè)指導(dǎo)書操作(一定要仔細(xì)閱讀作業(yè)指導(dǎo)書)看看是幾個(gè)樣品及實(shí)驗(yàn)記錄要求。一般實(shí)驗(yàn)室收到的是干粉樣品或者是固體樣品等。假如收到的是干粉樣品,那么第一步就要水化。


樣品水化步驟(建議):一般能力驗(yàn)證樣品以國體粉末形式發(fā)放,以液體(CFU/mL)形式出報(bào)告。樣品水化前一定要認(rèn)真、仔細(xì)閱讀作業(yè)指導(dǎo)書,看看用多少稀釋液水化,水化后作為原液還是多大濃度的樣品來記錄。


(四)、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:

a、能力驗(yàn)證時(shí)最好在超潔凈臺(tái)或者生物安全柜里操作,這樣就要把超潔凈臺(tái)或者生物安全柜提前清理、消毒處理,確保實(shí)驗(yàn)環(huán)境無菌。

b、提前把要用到的平皿、試管、稀釋液等放到操作臺(tái)上。


(五)、實(shí)驗(yàn)操作:

a、稀釋

將樣品從冰箱中取出達(dá)到室溫后開啟使用,在超潔凈臺(tái)或者生物安全柜下先用少許稀釋液(選取的生理鹽水)進(jìn)行水化后吸入無菌瓶或袋中,再用剩余的稀釋液進(jìn)行洗滌并全部轉(zhuǎn)入無菌瓶或袋中。(具體公需多少稀釋液要看作業(yè)指導(dǎo)書說明)

 

洗滌轉(zhuǎn)移時(shí)注意樣品瓶蓋的清洗和無菌操作,將全部的水化液進(jìn)行均質(zhì)混勻,一般作為原液立刻進(jìn)行接種;再取25mL到225mL稀釋液中均質(zhì)混勻,制成10-1梯度樣品勻液。

 

用1mL無菌吸管取1:10的樣液到9mL生理鹽水試管中,制成1:100的樣液,以此類推。再將幾個(gè)稀釋度的樣液接種到提前做好標(biāo)記的無菌平皿中。

 

 

b、傾注平板

將提前在水浴鍋里涼至46℃的平板計(jì)數(shù)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約15mL,并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿,混合均勻。同時(shí)將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1ml稀釋液(不含樣品)的滅菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。傾注過程一般左手拿平皿,右手拿瓊脂瓶,左手將平皿打開30度左右的縫隙,傾注瓊脂大約到平皿底的二分之一處,左三圈、右三圈輕輕混勻,然后放到臺(tái)面上。

待瓊脂凝固后,翻轉(zhuǎn)平板,置36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2h。


e、觀察計(jì)數(shù)

最好,第二天先看看,檢測結(jié)果有沒有異常、是否有蔓延菌落出現(xiàn)。

按照GB 4789.2的要求進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)


f、上報(bào)數(shù)據(jù)

在對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析后,選取檢測結(jié)果的平均值進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)提交。

 

注意事項(xiàng):

a.一般能力驗(yàn)證的樣品添加的菌落濃度都比較高,檢測過程一定要多做幾個(gè)稀釋度,每個(gè)稀釋度多做幾個(gè)平板平行。


b.梯度稀釋:是關(guān)鍵步驟,必須盡可能地減少誤差(新手建議渦旋混勻,渦旋時(shí)間不宜過長,長時(shí)間離心力等作用下,微生物細(xì)胞可能死亡)。


c、傾注用培養(yǎng)基應(yīng)在46℃水浴內(nèi)保溫,溫度過高會(huì)影響細(xì)菌生長,過低瓊脂易于凝因而不能與菌液充分混勻。如無水浴,應(yīng)以皮膚感受較熱而不燙為宜。


d、傾注培養(yǎng)基的量規(guī)定不一,從12~20mL不等,一般以15mL較為適宜,平板過厚可影響觀察,太薄又易于干裂。傾注時(shí),培基底部如有沉淀物,應(yīng)將底部棄去,以免與菌落混淆而影響計(jì)數(shù)觀察。


e、傾注過程力度一定掌握好,絕不能把瓊脂濺出來。


f、為使菌落能在平板上均勻分布,檢液加入平皿時(shí)要盡可能放在中央部位,然后應(yīng)盡快傾注培養(yǎng)基并旋轉(zhuǎn)混勻,可正反兩個(gè)方向旋轉(zhuǎn),檢樣從開始稀釋到傾注最后一個(gè)平皿所用時(shí)間不宜超過20min,以防止細(xì)菌有所死亡或繁殖。


g、瓊脂瓶放水浴鍋前一定要混合均勻,以防出現(xiàn)平皿不凝固現(xiàn)象;拿出傾注時(shí)要用噴有75%酒精的抹布擦拭干凈。


h、冷卻的過程不要著急,冷卻充分后再倒置放進(jìn)培養(yǎng)箱培養(yǎng),放置的時(shí)候要盡量避免放到風(fēng)機(jī)口處,每摞不要超過6個(gè)平皿。


i、檢驗(yàn)結(jié)束后所有的稀釋液樣品一定要放到冰箱里0-5℃冷藏,以備必須再用(一旦第二天發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)做錯(cuò)了,在做一次實(shí)驗(yàn),死馬當(dāng)活馬醫(yī))。

編輯:songjiajie2010

 
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關(guān)鍵詞: 能力驗(yàn)證
 

 
 
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