PCR實驗室污染？別急，教你萬能應(yīng)急法
發(fā)布日期：2022-04-08
核心提示：PCR檢測因其高靈敏度、快速、操作方便等優(yōu)勢已經(jīng)被廣泛應(yīng)用，不過正是由于它靈敏度極高，極微量的污染源都有可能導(dǎo)致檢測結(jié)果的假
PCR檢測因其高靈敏度、快速、操作方便等優(yōu)勢已經(jīng)被廣泛應(yīng)用，不過正是由于它靈敏度極高，極微量的污染源都有可能導(dǎo)致檢測結(jié)果的假陽性，因此所有的預(yù)防措施都會稍稍有所不同。「易查不易察」，污染來的悄無聲息，我們該如何應(yīng)對。
那么，如何避免以及處理實驗室污染，對PCR人來說是一門必修課。
主要是在采（取）樣的過程中，由于取樣工具之間的交叉造成污染；或者在核酸提取的過程中，由于移液器、離心管等使用不當(dāng)導(dǎo)致的污染。主要是在 PCR 組分試劑加樣過程中，由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。這是 PCR 反應(yīng)中最主要最常見的污染問題。因為 PCR 產(chǎn)物拷貝量大，遠遠高于 PCR 檢測數(shù)個拷貝的極限，所以極微量的 PCR 產(chǎn)物污染，就可形成假陽性。還有一種容易被忽視的污染，是能造成PCR產(chǎn)物污染形式的氣溶膠污染，而氣溶膠造成的污染是一個值得特別重視的問題。
在實驗操作中會經(jīng)常用到陽性參考品，這些參考品大多數(shù)是由某些克隆質(zhì)粒制作而成的，質(zhì)粒在單位容積內(nèi)濃度高，不小心使用極易造成污染。
(2).購買市面上有效氯消毒片，根據(jù)要求配置不同濃度的消毒液，或者購買成品次氯酸鈉消毒液配制合適濃度消毒水；(3).購買核酸氣溶膠污染清除劑(DNA AWAYO®原液/MediClean⑧稀釋100倍)；
(1).清理廢液缸并且對廢液缸用有效氯含量為2000mg/L消毒水浸泡消除核酸污染；(2).用有效氯含量為2000mg/L消毒水對移液槍進行擦洗，關(guān)鍵部位為移液槍前端易污染部位，清潔干凈后用潔凈水再擦拭一遍；
(3).將離心管架、擴增管架、擴增管架底板、吸嘴盒及其他相關(guān)物品用有效氯含量為500mg/L的消毒水浸泡2小時后，用清水沖洗干凈晾干后使用；
(4).對污染區(qū)域內(nèi)的設(shè)備如擴增儀、全自動提取儀等，使用核酸氣溶膠污染清除劑進行反復(fù)處理；對生物安全柜等含有空氣過濾系統(tǒng)的設(shè)備，需更換過濾網(wǎng)；
(5).用有效氯含量為500mg/L的消毒液對整個實驗室（地板、墻面、天花板、門、窗戶等地方）進行清潔，并且用用有效氯含量為1000mg/L的消毒水對實驗室進行噴霧消毒（重點部位為操作區(qū)），有效降解空氣中的氣溶膠與附著在實驗臺表面的核酸污染；同時加大通風(fēng)量（內(nèi)循環(huán)無用，盡可能外循環(huán)）；
(6).待污染區(qū)域及設(shè)備器件清理完成后，常用設(shè)備和操作臺面使用移動紫外消毒車近距離輻照1小時；實驗室內(nèi)則使用室內(nèi)紫外燈整晚輻照。
以上措施每日進行，直至污染消除；步驟(1)-(6)必須堅持每天進行，確保消除實驗室污染；
設(shè)計陰性對照組，根據(jù)陰性對照確認污染情況。可使用敞開后隔夜放置操作區(qū)的陰性對照進行實驗（在單獨的實驗室驗證)，若連續(xù)三天陰性對照沒有起跳，則說明污染得到控制，可恢復(fù)正常實驗。
污染，是 PCR 實驗室出現(xiàn)實驗假陽性、結(jié)果不可信、研發(fā)不可靠的重要推手。在最初開展PCR實驗室的時候，應(yīng)最大程度的降低可能出現(xiàn)的PCR污染或杜絕污染的出現(xiàn)，在實驗室前期設(shè)計及日常實驗室管理和操作中，就需要進行合理的規(guī)劃以及嚴格執(zhí)行實驗室SOP，把污染的可能性扼殺在搖籃中。
編輯：songjiajie2010
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