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紫外可見分光光度計是分析測試實(shí)驗(yàn)室里常見的一種分析儀器，用于測定被測物質(zhì)在一定波長照射下所產(chǎn)生的吸光 度的大小，從而實(shí)現(xiàn)對物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析。在平時的日常教學(xué)及到企業(yè)調(diào)研時，發(fā)現(xiàn)在分光光度計使用問題上，使用者多多少少都存在一些疑惑或使用不規(guī)范的問題，下面就常見的一些問題進(jìn)行討論。
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關(guān)于儀器的預(yù)熱問題在一般分光光度計的使用說明書上，要求儀器預(yù)熱時間約20分鐘；若是帶微處理器的分光光度計，開機(jī)后儀器自動進(jìn)入自檢 (初始化 )狀態(tài)，約需1O分鐘左右。在分光光度計預(yù)熱這個環(huán)節(jié)上，很多使用者或多或少存在問題，如開機(jī)只預(yù)熱電路系統(tǒng) (不調(diào)節(jié)波長、打開吸收池暗箱蓋預(yù)熱等)或認(rèn)為初始化過程就是預(yù)熱等等。
對帶微處理器有自檢功能的分光光度計，開機(jī)后儀器自檢 (初始化)結(jié)束后，在測定窗口上，設(shè)置所需波長值， 用一個吸收池裝上純凈水置于光路上，調(diào) “0000A”后，預(yù)熱 儀器，當(dāng)儀器顯示讀數(shù)不再變化后即可進(jìn)行測定。
對于紫外可見分光光度計，由于有雙光源 (鎢燈與氘燈)， 為了延長燈的使用壽命，開機(jī)自檢完成后可以關(guān)掉測定時不用的光源燈。
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關(guān)于波長準(zhǔn)確度的檢查與校正日常在使用分光光度計時，是否要經(jīng)常進(jìn)行儀器波長準(zhǔn)確度的檢查 ?答案是否定的。當(dāng)在日常測定中發(fā)現(xiàn)儀器測定靈敏度下降，這時才應(yīng)進(jìn)行波長準(zhǔn)確度的檢查，最簡易的檢查方法 (粗檢 )是：儀器開機(jī)后，調(diào)節(jié)波長為 580nm，在吸收池座的通光道中插入一張白色卡片紙，若能觀察到一長方形 的黃色光斑，說明波長準(zhǔn)確度屬正常范圍，否則就應(yīng)進(jìn)行波 長校正。
當(dāng)儀器經(jīng)過長途搬運(yùn)、受過機(jī)械振動或更換光源燈泡后， 必須進(jìn)行波長準(zhǔn)確度的檢查與校正。粗檢同上，其校正方法 有：干涉濾光片或鐠釹濾光片校正法、利用氘燈的特征發(fā)射線校正法。具體步驟可參考儀器使用說明書。
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關(guān)于吸收池的使用問題按照吸收池使用的基本順序分說如下：
(1)吸收池的潤洗
吸收池裝液前必須用待裝溶液潤洗 2～3遍，潤洗前是否 要用純水先潤洗一遍呢?這可看具體情況區(qū)別對待。
如果初次用干的吸收池裝待測液 (特別是有色溶液)時， 從維護(hù)保養(yǎng)吸收池的角度講，為減小其干玻面對顏色的吸附能力，便于用后吸收池的清洗，建議先用純水潤洗一遍，再用待裝溶液潤洗 2～3遍；若后再用此吸收池裝濃度相近或更高濃度的溶液 (如從小到大測定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度)時， 可直接用待裝溶液潤洗2～3遍即可。
標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量時，如果是先測定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度，當(dāng)測到樣品溶液時，由于測定的樣品溶液濃度比最后一 個標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度低或不可知時，建議先用純水潤洗一遍， 再用待裝溶液潤洗 2～3遍。
(2)吸收池的裝液、擦拭與放置 吸收池潤洗完成后注入待測溶液至池高的 2/3~3/4處。
(3)吸收池成套性檢驗(yàn)及處理 新吸收池或吸收池使用一段時間后都必須進(jìn)行成套性檢驗(yàn).
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關(guān)于吸光度測定重復(fù)性的問題分光光度計在測定過程中，發(fā)現(xiàn)同一個溶液在不同時問里其測定結(jié)果不同，即重復(fù)性不好，其原因是什么?排除測定錯誤因素外，可 能原因有：
(1)儀器預(yù)熱時間不夠或預(yù)熱方法不對所造成，應(yīng)延長預(yù)熱時間或采用正確的預(yù)熱方法。
(2)光電轉(zhuǎn)換器 (如光電管)因長時間使用其光電轉(zhuǎn)換 效率發(fā)生了變化導(dǎo)致。這時標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測溶液的吸光度都 同樣變低，在相對定量時對結(jié)果影響很小。但是對這類儀器， 一 般建議連續(xù)使用時間不應(yīng)超過 3h，若需長時間使用，最好間歇 30min 。
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其他問題(1)發(fā)現(xiàn)測定過程中的一些不良操作不利于儀器的維護(hù)、保養(yǎng)，使用者應(yīng)盡 可能避免。如在儀器的上方進(jìn)行操作(如倒溶液)；拿出來的吸收池 (或吸收池架)放在儀器的面 板上；同實(shí)驗(yàn)室不同儀器的吸收池混用等。
(2)關(guān)于防塵、防潮問題
儀器一般都隨機(jī)附有一只塑料布罩，不使用時用其罩住整個儀器，這是很好的防塵手段。但發(fā)現(xiàn)很多實(shí)驗(yàn)室里不用附來塑料布罩，而是 自己用一塊普通布或做成布罩來覆蓋儀 器，防塵效果不如塑料布罩理想。另外，在塑料布罩只放入數(shù)袋防潮硅膠，也能更好起到延長防潮的功效。在防潮時， 如果儀器設(shè)有防潮干燥筒的，應(yīng)經(jīng)常檢查，發(fā)現(xiàn)變色立即更 換新的或加以烘干再用。
長期停用的分光光度計，要定期開機(jī)除潮，如每隔一個 月通電預(yù)熱半小時，以保持整機(jī)呈干燥狀態(tài)，并且維持電子元件的性能 。
