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應廣大粉絲的需求，小編將陸續(xù)推出《微生物檢驗問答集錦》系列。本系列所列出的問題均是微生物檢驗過程中提問頻次較高的問題，我們咨詢專家老師后匯編，希望可以幫助微生物檢驗從業(yè)人員對檢驗過程中遇到的問題有新的理解。大家對感興趣的、比較關注的問題，也可以后臺留言，我們一起交流探討！
問、滅菌鍋化學檢驗和生物檢驗是每次實驗都需要做嗎？還是定期檢驗一下滅菌鍋的性能呢？
答：化學法是每次都要做的，生物法可以定期做，根據(jù)滅菌鍋的使用頻率，每周、每半月或每月做一次即可。
問：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA）上會不會生長細菌？
答：SDA不是選擇性培養(yǎng)基，而是一種廣譜的增菌培養(yǎng)基，pH范圍5.4-5.8，某些細菌是可以在SDA上生長的，霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)時SDA上生長的菌均應計入霉菌和酵母菌總數(shù)；或者可以經過評估選擇含有抗生素（如氯霉素）的SDA或者玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基進行霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)。
問：瓊脂培養(yǎng)基為什么需要倒置培養(yǎng)？
答：在進行微生物培養(yǎng)時，若正置培養(yǎng)，瓊脂培養(yǎng)基中的水分易蒸發(fā)使平板干裂，不利于微生物的生長；同時水蒸汽會在平皿蓋上形成冷凝水，若回落在培養(yǎng)基表面，會使菌落蔓延生長，無法計數(shù)，若冷凝水太多會使培養(yǎng)基與平皿分離，容易滑動倒置培養(yǎng)可減少培養(yǎng)基表面的空氣流動，減慢培養(yǎng)基中水分蒸發(fā)的速度，充分維持彈性，有利于菌株的生長和繁殖，防止空氣中雜菌對培養(yǎng)基及培養(yǎng)物造成污染；也會由于重力作用在一定程度上使營養(yǎng)物質沉積到培養(yǎng)基表面，有利于微生物利用營養(yǎng)物質；倒置的平板方便拿取，避免環(huán)境中雜菌的污染。
需要注意的是，《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數(shù)》（GB4789.15-2016）是要求正置培養(yǎng)，而非倒置，以防霉菌孢子形成次生菌落，影響計數(shù)結果。
問：食品企業(yè)的環(huán)境檢測應該依據(jù)那個標準？
答：GB/T16294-2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》都有規(guī)定，可以做為參考。
問：請問高壓滅菌鍋需要操作人員有壓力容器操作證嗎?有些人說屬于《特種設備安全監(jiān)察條例》需要操作證？
答：CNAS-CL 01-A001: 2018的 6.2.2.2條款里有說講到，如實驗室使用的高壓蒸汽滅菌器不屬于簡單壓力容器(定義參見TSG R0003 -2007《簡單壓力容器安全技術監(jiān)察規(guī)程》)時，操作人員需持有特種作業(yè)人員證。
問：
答：開瓶后的培養(yǎng)基，如果長時間不使用，還在效期內，建議開瓶后間隔1年進行復驗。如果出現(xiàn)結塊，則不能使用。同理，如果同一批次一次購買量較多，一年內未使用完，也建議進行復檢。
問：控制菌檢查法中用到的培養(yǎng)基，在做培養(yǎng)基適用性的時候，其中有“指示特性”的表述，那么“指示特性”是指的什么意思？
答：培養(yǎng)基指示特性包括菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應情況（菌落顏色變化）等。例如大腸埃希氏菌在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上桃紅色菌落有沉淀環(huán)、乙型副傷寒沙門菌在XLD有黑心等。
問：什么是不可接受微生物？
答：不可接受微生物通常是指那些已知有明顯致病性的，存在足夠的數(shù)量，通過產品的給藥途徑可能導致患者不可接受風險的微生物。如何確定一種微生物是不可接受的，需要進行風險分析，包括微生物負載量、微生物特性、產品特性、給藥途徑、對患者潛在影響等。
問： 培養(yǎng)基滅菌沒有按照廠家提供的滅菌參數(shù)進行，是否可行？
答：可以。廠家產品說明書提供的滅菌參數(shù)可作為參考使用，使用單位也可以根據(jù)自己實驗室的實際情況，在相關法規(guī)要求內，使用自己驗證過的滅菌參數(shù)來執(zhí)行。
【法規(guī)來源：中國藥典2020版9203藥品微生物實驗室質量管理指導原則 ……培養(yǎng)基滅菌應按照生產商提供或使用者驗證的參數(shù)進行……】
問：革蘭氏染色有哪些注意事項？
答：（1）最好挑選18-24h的菌落進行革蘭氏染色,培養(yǎng)時間過久的的革蘭氏陽性細菌可能會被染成紅色而造成假陰性。
（2）挑取適量的菌，不宜過多,均勻涂開。
（3乙醇脫色是革蘭氏染色是否成功的關鍵,15-30s為宜，脫色不夠可能會造成假陽性,脫色過度可能會造成假陰性。
問：如何根據(jù)實驗需要制備斜面？
答：根據(jù)實驗需求，擺放斜面一般有三種形式：
（1）長斜面：斜面底部剛覆蓋試管底部，上部距管口2.5-3cm左右；例如TSA傳代斜面。
（2）高層斜面：斜面與底層高度約為2:3，即底部高約3cm，斜面長度約2cm；如三糖鐵高層斜面。
（3）普通斜面：斜面底部距試管底部約1cm，上部距管口約2.5-3cm。
問：三糖鐵培養(yǎng)基顏色變化原理是什么？
答：該培養(yǎng)基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1，只能利用葡萄糖的細菌，分解葡萄糖產酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸接觸空氣而氧化，加之細菌利用培養(yǎng)基中含氮物質，生成堿性產物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。而發(fā)酵乳糖的細菌則產生大量的酸，使整個培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。如菌種接至培養(yǎng)基培養(yǎng)后產生黑色沉淀，是因為某些細菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫和培養(yǎng)基中的鐵鹽反應，生成黑色的硫化亞鐵沉淀。
問：如果三糖鐵上斜面紅色、底層黃色，中間有黑色且產氣，能否判定為沙門菌？
答：不能。某些非沙門菌也能在三糖鐵上呈現(xiàn)和沙門菌一樣的顏色變化，例如奇異變形桿菌。如三糖鐵上有上述顏色變化，需要進一步的進行適宜的鑒定試驗，確證是否為沙門菌。
如果采用傳統(tǒng)的生化鑒定，可參考GB 4789.4-2016中沙門氏菌檢驗的方法。
來源：網友提問，小編搜集整理
