1 .檢驗方法

依據(jù) GB 4789.2-2016《食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 菌落總數(shù)測定》中要求以無菌操作取檢樣25g（mL）剪碎放于含有225mL滅菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液中，經(jīng)振搖或研磨做成1︰10的均勻稀釋樣液，按照標準要求制備10倍系列稀釋樣品勻液。根據(jù)污染情況的估計，選擇2～3個稀釋度，每個稀釋度作2個平皿，每個平皿注入培養(yǎng)基約15~20mL，并轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿使混合均勻，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36℃±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48h±2h。計數(shù)后以同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)報告。

2. 數(shù)學(xué)模型

設(shè)菌落總數(shù)為A，檢測結(jié)果為X，則A=X CFU/g（mL）。

3 .計算不確定度
3.1 在微生物檢驗中，樣品中細菌分布的均勻性和重復(fù)測量帶來的不確定度是影響檢驗結(jié)果準確度的主要原因，而B類不確定度分量對合成不確定度影響較少。按 GB 4789.2-2016《食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 菌落總數(shù)測定》中方法，同一樣品每個稀釋度作兩個平衡樣，因此可以采用合并樣本標準差求檢測結(jié)果的不確定度 見表1。

3.2 從檢驗結(jié)果可知，如直接用貝塞爾公式計算合并樣本標準差，由于數(shù)據(jù)的散發(fā)性較大，計算出的合并樣本標準差很大，當(dāng)樣本均值較小時其不確定度則會過大，此時可以對上述數(shù)據(jù)取對數(shù)后，計算出樣本檢驗結(jié)果對數(shù)值的均值和殘差，將中間計算結(jié)果 見表2。根據(jù)貝賽爾公式，可計算出檢測結(jié)果對數(shù)值的合并樣本標準差：

取置信水平P＝95%，自由度ν＝19，查t分布表得：

分布于X±0.043之間。當(dāng)檢測結(jié)果以平衡樣結(jié)果平均值表示時，相對于對數(shù)值的取值再取反對數(shù)得其取值區(qū)間。這個取值區(qū)間適合于任何一次檢測。

3.3 例1、3#樣品，對數(shù)值的平均值為2.708，取值區(qū)間為2.665～2.751，取反對數(shù)得平衡樣平均值的取值區(qū)間為462～564 CFU/g（mL），菌落總數(shù)的取值區(qū)間為460～560CFU/g（mL）。

例2、12#樣品，對數(shù)值的平均值為3.203，取值區(qū)間為3.160～3.246，取反對數(shù)得平衡樣平均值的取值區(qū)間為1445～1762u/g（mL），菌落總數(shù)的取值區(qū)間為1400～1800CFU/g（mL）。

例3：18#樣品，對數(shù)值的平均值為4.0115，取值區(qū)間為3.9685～4.0545，取反對數(shù)得平衡樣平均值的取值區(qū)間為9300～11337 u/g（mL），菌落總數(shù)的取值區(qū)間為9300～11000CFU/g（mL）。

4 .小結(jié)
從以上計算結(jié)果可知，由于檢驗結(jié)果的散發(fā)性較大，如直接用貝賽爾公式計算合并樣本標準差所得到的不確定度不適合每一個樣本。當(dāng)檢驗結(jié)果取對數(shù)后，用合并樣本標準差求檢驗結(jié)果的不確定度則使用方便，并且適合于每一個樣本。隨著檢驗結(jié)果的不斷增加，可隨時加入到合并樣本中，重新計算合并樣本標準差，更新其不確定度的取值范圍。