1.了解不同微生物培養(yǎng)在斜面上和液體、半固體培養(yǎng)基中的特征。
2.進(jìn)一步熟練和掌握微生物的無菌操作接種技術(shù)。
二、基本原理
微生物的培養(yǎng)特征是指微生物培養(yǎng)在培養(yǎng)基上所表現(xiàn)出的群體形態(tài)和生長情況。一般可用斜面、液體和半固體培養(yǎng)基來檢驗(yàn)不同微生物的培養(yǎng)特征。它們培養(yǎng)在斜面培養(yǎng)基上,可以呈絲線狀、刺毛狀、串珠狀、疏展?fàn)睢渲罨蚣俑鶢。生長在液體培養(yǎng)基內(nèi),可以呈混濁、絮狀、粘液狀、形成菌膜、上層清晰而底部顯沉淀狀。穿刺培養(yǎng)在半固體培養(yǎng)基中,可以沿接種線向四周蔓延;或僅沿線生長;也可上層生長得好,甚至連成一片,底部很少生長;或底部長得好,上層甚至不生長。利用微生物的培養(yǎng)特征,可以作為它們的種類鑒定和識別純培養(yǎng)是否污染的參考。
檢驗(yàn)微生物的培養(yǎng)特征,或進(jìn)行其他微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)時,接種過程必須保證不被其他微生物所污染,為此,除工作環(huán)境要求盡可能地避免或減少雜菌污染外,熟練地掌握各種無菌操作接種技術(shù)是很重要的。
三、器材
枯草芽孢桿菌,大腸桿菌(Escherichia coli),金黃色葡萄球菌,白地霉(Geo-trichum candidum),蕈狀芽孢桿菌(Bacillusmycoides),粘質(zhì)沙雷氏菌(粘質(zhì)賽氏桿菌, Serratia marcescens);
肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基,肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基,半固體肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,接種環(huán),接種針,無菌吸管,酒精燈等。
四、操作步驟
1.斜面接種
(1)在肉膏蛋白胨斜面試管上,用記號筆寫上將接種的菌名、日期和接種者。
(2)點(diǎn)燃酒精燈或煤氣燈。
(3)將菌種試管和待接種的斜面試管,用大拇指和食指、中指、無名指握在左手中,并將中指夾在兩試管之間,使斜面向上,成水平狀態(tài)。在火焰邊用右手松動試管塞,以利于接種時拔出。
(4)右手拿接種環(huán)通過火焰燒灼滅菌,在火焰邊用右手的手掌邊緣和小指,小指和無名指分別夾持棉塞(或試管帽),將其取出,并迅速燒灼管口。
(5)將滅菌的接種環(huán)伸入菌種試管內(nèi),先將環(huán)接觸試管內(nèi)壁或未長菌的培養(yǎng)基,達(dá)到冷卻的目的,然后再挑取少許菌苔。將接種環(huán)退出菌種試管,迅速伸入待接種的斜面試管,用環(huán)在斜面上自試管底部向上端輕輕地劃直線,勿將培養(yǎng)基劃破,也不要使環(huán)接觸管壁或管口。
(6)接種環(huán)退出斜面試管,再用火焰燒管口,并在火焰邊將試管塞塞上。將接種環(huán)逐漸接近火焰,再燒灼。如果接種環(huán)上沾的菌體較多時,應(yīng)先將環(huán)在火焰邊烤干,然后燒灼,以免未燒死的菌種飛濺出污染環(huán)境,接種病原菌時更要注意此點(diǎn)。
2.液體培養(yǎng)基接種
向肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中接種少量菌體時,其操作步驟基本與斜面接種時相同,不同之處是挑取菌體的接種環(huán)放入液體培養(yǎng)基后,應(yīng)在液體表面處的管內(nèi)壁上輕輕磨擦,使菌體從環(huán)上脫落,混進(jìn)液體培養(yǎng)基,塞好試管塞后,搖動液體,使菌體在液體中分布均勻,或用試管振蕩器混勻。
向液體培養(yǎng)基中接種量大或要求定量接種時,可將無菌水或液體培養(yǎng)基注入菌種試管,用接種環(huán)將菌苔刮下,再將菌種懸液以無菌吸管定量吸出加入,或直接倒入液體培養(yǎng)基。如果菌種為液體培養(yǎng)物,則可用無菌吸管定量吸出加入或直接倒入液體培養(yǎng)基。整個接種過程都要求無菌操作。
3.穿刺接種
用接種針挑取菌種(針必須挺直),自培養(yǎng)基的中心垂直地刺入半固體培養(yǎng)基中,直至接近管底,但不要穿透,然后沿原穿刺線將針拔出,塞上試管塞,燒灼接種針。
上述幾種接種法的無菌操作,凡未敘述的均按實(shí)驗(yàn)一操作。試驗(yàn)者應(yīng)反復(fù)練習(xí)無菌操作接種技術(shù),直至較熟練地掌握。
4.將已接種的斜面、液體和半固體培養(yǎng)基放置28—30℃溫箱,培養(yǎng)2—3天后取出觀察結(jié)果。