要點(diǎn)

描述

原理

在壓力下產(chǎn)生的濕熱的蒸汽殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)體和孢子。 

密封

滅菌鍋必須密閉以阻隔外部空氣， 避免空氣的存在會(huì)影響壓力并降低滅菌鍋里面的溫度。

滅菌壓力

在滅菌鍋內(nèi)， 合適的滅菌溫度是通過(guò)壓力達(dá)到的， 壓力對(duì)于滅菌沒(méi)有效用但是使蒸汽溫度上升。 對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)操作來(lái)說(shuō)，15lbs/inch2時(shí)的121℃并趕走所有空氣可以達(dá)到滅菌的效果。

滅菌時(shí)間

當(dāng)?shù)竭_(dá)一定的溫度和壓力時(shí)， 需要保持一定的時(shí)間來(lái)達(dá)到效果，為了殺滅微生物，121℃必須保持至少15分鐘。

培養(yǎng)基滅菌

大部分情況下， 實(shí)驗(yàn)室配置培養(yǎng)基后應(yīng)滅菌，滅菌時(shí)應(yīng)根據(jù)供應(yīng)商指導(dǎo)， 使用合適的溫度時(shí)間； 有些培養(yǎng)基不適合滅菌的。

器皿滅菌

當(dāng)滅菌器皿時(shí)，需要考慮使用數(shù)量，比如，一天用10根吸管，在滅菌時(shí)， 一般就可以以10根為一包， 這樣可以減低器皿在使用過(guò)程中遭受微生物的污染的可能性。

滅菌條

在滅菌過(guò)程中， 可以用滅菌條來(lái)監(jiān)控效果， 滅菌條在滅菌前是有顏色的，滅菌后會(huì)變成黑色。

重新滅菌

假如一次滅菌無(wú)效， 可以重新進(jìn)行滅菌過(guò)程， 但是，培養(yǎng)基是不可以進(jìn)行第二次滅菌的， 應(yīng)拋棄。

儲(chǔ)存

滅菌完成后， 培養(yǎng)基和器皿應(yīng)妥善儲(chǔ)存。 一般來(lái)說(shuō)， 培養(yǎng)基應(yīng)存放于避光的潔凈空間，同時(shí)應(yīng)參照供應(yīng)商的指示。

要點(diǎn)

描述

簡(jiǎn)述

物理分離方法， 使用高效過(guò)濾將微生物從液體培養(yǎng)基分離。

由于不需要加熱和冷卻過(guò)程，過(guò)濾比高溫濕熱滅菌省時(shí)間。

過(guò)濾頭

0.2微米的過(guò)濾頭可以分離所有的細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)體, 把它安裝在針筒末端。

要點(diǎn)

描述

綜述

一旦培養(yǎng)基或者器皿經(jīng)過(guò)滅菌過(guò)程, 這種滅菌狀態(tài)應(yīng)保持直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

區(qū)域

最好能把培養(yǎng)基準(zhǔn)備區(qū)域(門(mén)外)和實(shí)驗(yàn)區(qū)域(門(mén)內(nèi))之間應(yīng)該設(shè)有緩沖間。

工作臺(tái)面

工作前必須消毒, 可以用70%的酒精, 也可以用含氯的消毒劑。 

消毒時(shí)間

不管使用何種消毒劑， 需要提供充分的消毒時(shí)間來(lái)殺滅微生物，一般5-10分鐘， 可以用紙巾擦干表面。

潔凈臺(tái)

必須有2個(gè)光源：普通照明用和殺菌紫外光。紫外燈用于保持工作臺(tái)面免于微生物污染， 在使用前仍然需要使用消毒劑清潔。

擺放

應(yīng)該有好習(xí)慣把工作桌面的物品擺放好,，把移動(dòng)放到最低限度， 避免帶來(lái)污染。

鑷子

如果使用薄膜過(guò)濾法， 需要準(zhǔn)備一個(gè)小燒杯并有少量酒精， 鑷子不用時(shí)就放在杯子里。

培養(yǎng)基

培養(yǎng)基使用前， 應(yīng)該有相關(guān)日期， 比如配置日期， 或者實(shí)驗(yàn)室收到日期(直接使用的培養(yǎng)基)。假如沒(méi)有所需日期, 這個(gè)培養(yǎng)基不能使用。

實(shí)驗(yàn)服

穿著干凈的實(shí)驗(yàn)服， 袖子應(yīng)卷起至肘部以避免碰到培養(yǎng)基或樣品帶來(lái)污染，當(dāng)然。做實(shí)驗(yàn)前要洗手。

采樣

個(gè)人

酒精燈

樣品應(yīng)無(wú)菌采得，

使用無(wú)菌采樣袋或者采樣瓶，

采樣員應(yīng)戴防護(hù)手套, 在采樣前燒采樣口，

樣品容器應(yīng)緊閉并安全儲(chǔ)存。

萬(wàn)一培養(yǎng)基或者樣品濺到實(shí)驗(yàn)服上應(yīng)在做完一個(gè)實(shí)驗(yàn)后換上干凈的。

咳嗽或者鼻塞可能會(huì)帶來(lái)微生物并影響實(shí)驗(yàn)，應(yīng)戴好防護(hù)手套面罩 。

使用本森燈或者酒精燈, 在實(shí)驗(yàn)前點(diǎn)燃。

火焰在實(shí)驗(yàn)區(qū)域產(chǎn)生一個(gè)防層， 可以防止那些懸浮在空氣中的微生物掉落在工作臺(tái)面上或者培養(yǎng)基上。

開(kāi)瓶

瓶口

培養(yǎng)皿

開(kāi)瓶前， 應(yīng)用清潔劑的紙巾清潔瓶蓋和附近區(qū)域，除去蓋子上可能留存的微生物。

蓋子打開(kāi)后，玻璃瓶口應(yīng)進(jìn)行滅菌，可以在酒精燈上方旋轉(zhuǎn)瓶口和螺紋， 一般2-3秒。 

當(dāng)打開(kāi)培養(yǎng)皿時(shí), 不能完全移除蓋子, 而應(yīng)該保持在培養(yǎng)皿的上側(cè), 從而能夠倒入培養(yǎng)基或者樣品, 這樣可以減少空氣灰塵或者微生物的污染。

倒完培養(yǎng)基或者樣品后, 瓶口重新過(guò)火, 蓋蓋子, 用消毒劑清潔。 

濾膜

鑷子

打開(kāi)薄膜裝， 絕對(duì)不能碰到薄膜! 

用鑷子把薄膜移除包裝并放到過(guò)濾頭上， 過(guò)濾的漏斗不能完全移開(kāi)，只需移開(kāi)一點(diǎn)點(diǎn)放入濾膜即可，

過(guò)濾完后，用鑷子把濾膜轉(zhuǎn)到培養(yǎng)皿中， 放置于中間。

用鑷子轉(zhuǎn)移濾膜

過(guò)火時(shí)，拿住鑷子的尾部， 放到火焰上， 保持一下能夠到火好， 時(shí)間太長(zhǎng)會(huì)在尖部結(jié)碳，

拿鑷子的時(shí)候， 尾部向上直至燒完。

實(shí)驗(yàn)結(jié)束

打掃

廢棄物

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱；剩余的培養(yǎng)基可以放回儲(chǔ)存區(qū)域， 蓋子必須蓋緊。

拋棄廢棄物，比如樣品袋; 可回用的物品放在遠(yuǎn)離工作區(qū)域的地方以回收, 清洗, 滅菌。

用含有消毒劑的紙巾清潔工作臺(tái)面。

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中暴露于微生物的物品應(yīng)作為有害廢棄物

這些廢棄物可能含有微生物并致病; 假如含有致病菌可能會(huì)產(chǎn)生公共衛(wèi)生的事件.

最好廢棄物能夠進(jìn)行濕熱滅菌

通風(fēng)和氣流

安保

工作區(qū)域

微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該有單獨(dú)的通風(fēng)系統(tǒng), 與其他操作區(qū)域的空氣供給分開(kāi)；

空調(diào)系統(tǒng)的排氣必須直接排出實(shí)驗(yàn)室, 空調(diào)系統(tǒng)應(yīng)定時(shí)清洗, 并關(guān)注空氣過(guò)濾器的清潔。

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該是限制進(jìn)入的, 可以是卡片控制或者其他方式, 只有那些被允許進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的人員才能進(jìn)入。

實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)該有充足的工作區(qū)域, 從GLP標(biāo)準(zhǔn)來(lái)說(shuō), 每人應(yīng)有20平方米的區(qū)域. 充足的工作區(qū)域可以避免工作中人員的碰撞, 也避免了交叉污染。

易清潔

照明

反饋

實(shí)驗(yàn)室的墻面, 屋頂和門(mén)都應(yīng)該是平滑的, 光潔易于清洗消毒的；

墻的接縫包括強(qiáng)和墻之間, 強(qiáng)和地面之間應(yīng)該是弧形的；

任何地方都應(yīng)該不能聚集灰塵, 例如窗臺(tái)或者窗簾；

柜子應(yīng)該是可移動(dòng)的或者是不著地的以方便清掃。

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有充足的照明, 包括不間斷電源或者備用發(fā)電機(jī). 

反饋

要點(diǎn)

描述

總體安排

實(shí)驗(yàn)前應(yīng)做好儀器, 試劑和培養(yǎng)基的所有準(zhǔn)備工作, 這樣可以合理利用時(shí)間并得到穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

桌面安放

多余的培養(yǎng)皿, 燒瓶或者濾紙可能會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)并帶來(lái)潛在的濺出, 打碎或者交叉污染。

實(shí)驗(yàn)前消毒

在配制培養(yǎng)基或者開(kāi)始試驗(yàn)前, 應(yīng)該清潔并消毒工作桌面。 可以采用70%的酒精溶液, 含氯水的溶液, 或者其他消毒劑。清潔后, 應(yīng)等待幾分鐘以使有充分的時(shí)間殺滅微生物。

試驗(yàn)后消毒

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后, 徹底清潔工作區(qū)域, 仍然使用70%酒精溶液或者其他消毒劑, 保持一段時(shí)間, 然后擦干。

有害廢棄物的處置

必須有效管理微生物的有毒廢棄物, 任何和微生物培養(yǎng)或者培養(yǎng)基相關(guān)的物品都應(yīng)被看作有害物質(zhì);  因?yàn)樗麄兛赡芎�有致病�? 需要小心處理。

廢棄物的滅菌

濕熱滅菌是最簡(jiǎn)單也是最有效的處理污染物質(zhì)和有害物質(zhì)的方法。 用過(guò)的培養(yǎng)皿應(yīng)放在滅菌袋中。 滅菌后, 可以當(dāng)作一般廢棄物處理。

重復(fù)使用器皿的滅菌

當(dāng)需要對(duì)小件物品(比如移液管)滅菌時(shí), 可以根據(jù)實(shí)際用量分組包裝。 濕熱滅菌后, 袋包裝冷卻并保存。

避免浪費(fèi)

合理安排是非常重要的; 實(shí)驗(yàn)室工作需要精準(zhǔn), 但是有時(shí)候我們也需要快速工作, 因?yàn)榛ǚ浅６鄷r(shí)間會(huì)延長(zhǎng)設(shè)備, 培養(yǎng)基, 或者樣品暴露在環(huán)境中的時(shí)間。 把需要用的物品放在手邊可以用的地方可以節(jié)約時(shí)間并提高工作的有效性。

簡(jiǎn)介

使用

監(jiān)控

潔凈工作臺(tái)提供了控制來(lái)自環(huán)境的污染并提供工作區(qū)域的潔凈空氣. 潔凈空氣吹向工作區(qū)域, 同時(shí), 可以避免外部空氣進(jìn)入工作區(qū)域

使用時(shí), 紫外光線(xiàn)(或者紫外燈)應(yīng)關(guān)閉, 但是使用后應(yīng)打開(kāi). 如果紫外燈沒(méi)有打開(kāi)工作臺(tái)沒(méi)有開(kāi)啟, 工作臺(tái)不能開(kāi)始使用; 必須清潔工作臺(tái), 開(kāi)啟電源并打開(kāi)紫外燈, 保持30分鐘. 

潔凈工作臺(tái)需要進(jìn)行日常的確認(rèn), 一般有第三方公司進(jìn)行

安全用品

移動(dòng)

安全用品包含口罩, 手套和眼部防護(hù)。 

口罩防止培養(yǎng)基和樣品受到污染, 可能來(lái)自于咳嗽或者鼻涕; 根據(jù)當(dāng)?shù)氐囊�求和�?xí)慣, 每個(gè)實(shí)驗(yàn)室會(huì)有不同的要求。

戴手套是為了防止培養(yǎng)基或者其他刺激性物質(zhì)接觸皮膚; 在從濕熱滅菌鍋內(nèi)取出容器或則器皿時(shí), 需要戴防熱手套。

在配置培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)中佩戴防護(hù)眼鏡是一個(gè)很好的習(xí)慣, 能夠購(gòu)買(mǎi)帶有屈光度的防護(hù)眼鏡為佳。

當(dāng)移動(dòng)培養(yǎng)基或者樣品時(shí), 應(yīng)小心注意以避免濺出或者潑出；

突然的移動(dòng)會(huì)產(chǎn)生安全危害或者導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)效；

不要使用夸張的動(dòng)作或者行為

同時(shí), 不要把任何東西, 比如吸管, 放到嘴里。

 明火

濕熱滅菌鍋

實(shí)驗(yàn)中需要用到酒精燈或其他明火, 但是假如使用不當(dāng)會(huì)帶來(lái)比較高的安全危險(xiǎn)；

確保酒精燈不用時(shí)完全關(guān)閉, 當(dāng)有閥門(mén)時(shí)經(jīng)常檢查墊圈是否有裂痕或者泄露；

操作酒精燈時(shí), 應(yīng)確�；鹧娌粫�(huì)接觸衣物或者皮膚. 可燃物品, 比如記錄本, 應(yīng)遠(yuǎn)離火焰以避免意外點(diǎn)燃；

同時(shí), 要注意可燃液體的容器. 每次使用后應(yīng)蓋好蓋子并遠(yuǎn)離酒精燈火焰；

使用火焰進(jìn)行滅菌工作時(shí), 可使用鑷子. 把鑷子放在含有95%酒精的燒杯中, 使用時(shí), 把鑷子在火焰上灼燒1-2秒, 移開(kāi)鑷子并等待火焰熄滅； 

拿著鑷子是尖端應(yīng)向下, 使熱的酒精不會(huì)流到手上。

濕熱滅菌鍋使用高壓下產(chǎn)生的蒸汽, 溫度可達(dá)1210C,  殺死了微生物, 同樣可以帶來(lái)人類(lèi)組織的灼傷, 所以必須特別小心地操作; 

如此高的溫度以及蒸汽能帶來(lái)極大的潛在傷害, 即使是殘留的蒸汽也能帶來(lái)很大的危險(xiǎn). 打開(kāi)滅菌鍋時(shí)需要特別小心, 站在邊上避免面對(duì)熱量和蒸汽, 緩慢的打開(kāi)門(mén), 同時(shí), 戴好防熱手套. 

把需要滅菌的培養(yǎng)基和器皿平均放置在托盤(pán)上, 大的物品放在邊上, 確保物品不會(huì)相互碰撞. 這樣可以是熱量均勻擴(kuò)散并平衡整個(gè)托盤(pán)

潔凈臺(tái)

樣品操作

在潔凈臺(tái)工作時(shí)必須關(guān)閉紫外燈. 紫
外光線(xiàn)是危險(xiǎn)的；

不要把手或者手指放在紫外燈下, 以免灼傷皮膚；

不要直接看紫外光線(xiàn)以免損傷眼睛。

培養(yǎng)基和樣品: 用火焰灼燒瓶口時(shí), 停留4-5秒, 旋轉(zhuǎn)使整個(gè)表面都能被灼燒, 不要停留太久, 不要濺出樣品或者培養(yǎng)基；

假如樣品是瓶裝的, 不要直接灼燒以免爆開(kāi). 可以取2個(gè)燒杯, 倒入70%酒精, 把瓶子倒置放入一個(gè)燒杯中, 使蓋子和瓶頸的2.5厘米處能浸沒(méi)在酒精中, 拿出瓶子用干凈的布擦干; 同理, 放入第二個(gè)燒杯, 拿出瓶子直立待酒精自然蒸發(fā)；

開(kāi)瓶時(shí)應(yīng)特別小心不能污染樣品, 可以用消毒紙巾開(kāi)旋蓋的瓶子; 用浸沒(méi)在95%酒精并灼燒的開(kāi)瓶器打開(kāi)壓蓋瓶；

打開(kāi)瓶子后, 使用相同的方法灼燒瓶口, 并確保用于消毒的酒精完全揮發(fā)；

拉罐可以使用相同的程序或者用含70%酒精的棉球擦拭頂部, 假如罐子必須用開(kāi)罐器, 這個(gè)開(kāi)罐器操作同開(kāi)瓶器；

無(wú)菌包裝的產(chǎn)品用含70%酒精的棉球擦拭。